一种CRP检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种CRP检测试剂盒及其应用。该CRP检测试剂盒包括：偶联CRP受体颗粒的受体试剂和含有供体颗粒的供体试剂，所述供体试剂包含缓冲溶液以及悬浮于其中的供体颗粒，所述供体颗粒在液相中被激发后能够产生活性氧；所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值不低于5％，且每克质量的所述供体颗粒中的糖含量不高于25mg。粒中的糖含量不高于25mg。

【技术实现步骤摘要】
一种CRP检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及化学发光检测领域，更具体地，本技术方案涉及一种CRP检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]体外诊断(In Vitro diagnosis，IVD)技术，通常是指在人体之外，通过对机体包括血液、体液及组织等样本进行检测而获取相关的临床诊断信息，从而帮助判断疾病或机体功能的产品和服务。纳米材料具有独特的尺寸依赖物理或化学性质，在纳米尺度内，可以通过改变它们的尺寸、形状、化学组成及表面官能团等来调节其光、磁、电、热及生物学性能，特别是纳米材料由于具有远高于宏观材料的比表面积，可提供大量的空间在其表面修饰不同的分子，使得它们在生物分析和生物传感器等应用方面具有重要作用。利用这些表面修饰了不同分子的纳米材料可以有选择性地检测小分子、核酸、蛋白质和微生物等。显然，纳米材料与体外诊断技术融合后有望具有检测限更低、灵敏度更高、选择性更强等特性，而纳米材料与临床诊断分析技术相结合也将把临床体外诊断学科推向新的发展生长点。
[0003]免疫分析经过半个多世纪的发展，先后出现了很多检测种类。根据测定过程中是否要将待测物质与反应体系分离可以分为非均相免疫分析和均相免疫分析。非均相免疫分析，是指引入探针进行标记的操作过程中，各种相关试剂混合反应后需要进行分离，将待测物与反应体系分离后再进行检测，是现在免疫分析中的主流方法。如广为人们熟知的酶联免疫吸附法(ELISA法)和磁微粒化学发光法等。均相免疫分析则是指在测定过程中将待测物与反应体系中的相关试剂混合反应后直接测定，而没有多余的分离或清洗的步骤。截止目前，多种灵敏的检测方法被应用于均相免疫分析，比如化学发光检测方法、电化学检测方法等。
[0004]在光激化学发光技术(Light Initiated Chemiluminescent Assay，LiCA)就是一种典型的均相免疫分析方法。它是基于被包被在一种纳米微球表面的抗原与被包被在另一纳米微球表面的抗体在液相中反应将两种纳米微球拉近，从而形成“双球”免疫复合物。即供体颗粒和受体颗粒借助抗原
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抗体间结合共同组成一对“双球”体系。“双球”均是纳米微球，它们在光激化学发光系统中相辅相成，相互作用，相互配合，相互影响，二者缺一不可。两种纳米微球在液相中有很好悬浮特性，微球在液相中和抗原或抗体相遇完全符合液态动力学特征。在680nm的激光照射下，供体颗粒的光敏剂负责将周围环境中的氧气激发为单线态氧分子。当单线态氧分子扩散到“双球”体系中的受体颗粒时，与受体颗粒中的化学发光剂产生一系列化学发光反应，从而产生610nm至620nm的发射波长光信号，通过光子计数器和数学拟合将光子数换算为靶分子浓度，从而实现“免分离”的均相免疫分析。当待测样本中不含靶分子时，两种纳米微球间就无法形成免疫复合物，此时两种纳米微球的间距超出单线态氧200nm内的传播范围，因而单线态氧在液相中迅速淬灭，检测时则没有高能级红光信号产生。该方法具有快速、均相(免冲洗)、高灵敏和操作简单的特点。
[0005]然而，现有技术中的“双球”存在在液相中均质性差，在用于免疫分析时重复性差、发光效果不稳定，难以兼顾高灵敏度和宽检测量程等缺陷。

技术实现思路

[0006]基于现有技术中的缺陷，本专利技术之一提供了一种供体试剂，其包含缓冲溶液以及悬浮于其中的供体颗粒，所述供体颗粒在液相中被激发后能够产生活性氧，所述供体颗粒在供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值不低于5％，且每克质量的所述供体颗粒中的糖含量不高于25mg。
[0007]在一个具体实施方式中，所述供体颗粒包括载体，所述载体的内部填充有敏化剂，所述载体的表面连接有特异性配对结合成员中的一员。
[0008]在一个具体实施方式中，所述供体颗粒在供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值不高于20％。
[0009]在一个具体实施方式中，所述供体颗粒在供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值不高15％。
[0010]在一个具体实施方式中，所述供体颗粒在供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值不低于8％。
[0011]在一个具体实施方式中，在一个具体实施方式中，每克质量的所述供体颗粒中的糖含量不高于15mg。
[0012]在一个具体实施方式中，每升体积的所述缓冲溶液中的糖含量不低于0.2g且不高于2g。
[0013]在一个具体实施方式中，每升体积的所述缓冲溶液中的糖含量不低于0.5g且不高于1.5g。
[0014]在一个具体实施方式中，通过蒽酮法检测所述糖含量。
[0015]在一个具体实施方式中，所述载体的表面带有键合官能团，所述键合官能团用于将特异性结合配对成员中的一员化学键合在所述载体的表面。
[0016]在一个具体实施方式中，所述键合官能团选自胺基、酰胺基、羟基、醛基、羧基、马来酰亚胺基和巯基中的至少一种；优选地，所述键合官能团选自醛基和/或羧基。
[0017]在一个具体实施方式中，所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布呈现多分散性。
[0018]在一个具体实施方式中，所述供体试剂中包含至少两种平均粒径分布的供体颗粒。
[0019]在一个具体实施方式中，所述特异性配对结合成员为亲和素
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生物素系统，所示亲和素选自卵白亲和素、卵黄亲和素、链霉亲和素、中性亲和素及类亲和素分子，优选为链霉亲和素。
[0020]在一个具体实施方式中，所示亲和素选自链霉亲和素。
[0021]本专利技术之二提供了一种化学发光检测试剂盒，其包括如本专利技术之一中任意一项所述的供体试剂。
[0022]在一个具体实施方式中，所述试剂盒中含有多个试剂条，每个试剂条上开设有若干盛装试剂的试剂孔，其中一个所述试剂孔用于盛装所述供体试剂。
[0023]本专利技术之三提供了专利技术之一中任意一项所述的供体试剂或专利技术之二中任意一项所述的试剂盒在使用化学发光分析仪中的应用。
[0024]本专利技术之四提供了专利技术之一中任意一项所述的供体试剂或专利技术之二中任意一项所述的试剂盒在使用POCT仪器中的应用。
[0025]本专利技术所述的供体试剂的作用在于其试剂中的供体颗粒受外在激发光的激发后能够产生单线态氧，单线态氧把能量传递至距离受体颗粒200nm范围内的供体颗粒，最终才能产生化学发光信号，从而实现对未知物的检测。
[0026]本专利技术所述用语“活性氧”是指机体内或者自然环境中由氧组成，含氧并且性质活泼的物质的总称，主要为一种激发态的氧分子，包括氧的一电子还原产物超氧阴离子(O2
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)、二电子还原产物过氧化氢(H2O2)、三电子还原产物羟基自由基(
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OH)以及一氧化氮和单线态氧(1O2)等。
[0027]本专利技术中，所述“直接或间接连接”是指指定的物质能够通过化学或物理键合到另一物质上(直接连接)；或者指定的物质通过中间体物质(化合物、聚合物、多糖)再化学或物理键合到另一物质上(间接连接)。
[0028]本专利技术所述用语本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CRP检测试剂盒，其包括：偶联CRP受体颗粒的受体试剂和含有供体颗粒的供体试剂，所述供体试剂包含缓冲溶液以及悬浮于其中的供体颗粒，所述供体颗粒在液相中被激发后能够产生活性氧；所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值不低于5％，且每克质量的所述供体颗粒中的糖含量不高于25mg。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括含有生物素化抗CRP抗体的试剂。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述供体颗粒在所述供体试剂中的粒径分布变异系数C.V值不高于20％。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述供体颗粒的粒径大于所述CRP受体颗粒的粒径。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述供体颗粒包括载体，所述载体的粒径选自100至400nm，优选为150至350nm。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述供体颗粒在所述供体试剂中的浓度为50μg/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：康蔡俊，李临，
申请(专利权)人：科美诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：