一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法技术

本发明专利技术属于分析化学技术领域，公开了一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法，步骤为：采用超高压液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法


[0001]本专利技术属于分析化学
，特别涉及一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法。

技术介绍

[0002]环境雌激素是一类典型的环境内分泌干扰物(endocrine disrupting chemicals,EDCs)，具有极强的内分泌干扰效应和生物活性，因其频繁在污水处理厂中被检测出，由于其持久性、高难降解性、持续性排放以及对人类和生态系统的不利影响，近几十年来受到了人们的广泛关注。雌酮(E1)、雌二醇(E2)、炔雌醇(EE2)三种雌激素在极低的浓度下(1.0ng/L)就会对生物体产生明显的影响，有严重的致畸致癌作用，能诱发雄性个体雌性化，引发女性肿瘤、癌症、男性不育和儿童性早熟等。微藻作为可进行光合作用的真核生物，对炔雌醇有明显的降解效果，但目前对炔雌醇在微藻中的降解产物定性分析的研究不足，传统检测炔雌醇在微藻中的降解产物所使用的液质联用仪存在分辨率较低，准确度不够的问题，无法对降解产物进行准确定性，对降解产物处于预测阶段。

技术实现思路

[0003]本专利技术旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法，能够对炔雌醇在微藻中的降解产物进行准确定性。
[0004]本专利技术的目的在于提供一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法。
[0005]具体的，一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法，包括以下步骤：
[0006]建立待测炔雌醇及其降解产物的精确质量数据库和质谱谱库：配置待测炔雌醇以及炔雌醇降解产物的标准溶液，采用超高压液相色谱
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四极杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪确定待测炔雌醇及其降解产物的精确质量数据库和质谱谱库；
[0007]样品检测：将炔雌醇加入微藻中，再置于培养基中培养，然后取藻液与溶剂混合，破碎藻细胞后，再经过固相萃取分离藻细胞，得到样品；采用超高压液相色谱
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四级杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪对样品进行检测；
[0008]结果分析：将样品的检测结果与建立的精确质量数据库和质谱谱库进行对比分析，当检测结果与精确质量数据库和质谱谱库信息匹配时，则确定样品中检测出待测炔雌醇及其降解产物。
[0009]优选地，在本专利技术所述炔雌醇及其降解产物的定性分析方法中，所述炔雌醇降解产物包括双醋炔诺醇、17
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乙酸β
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雌二酯、雌三醇、雌酮、雌二醇、2
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羟基雌酮、16α
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羟基雌酮中的17
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乙酸β
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雌二酯、雌酮、雌二醇、16α
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羟基雌酮。
[0010]3.根据权利要求2所述的定性分析方法，其特征在于，所述炔雌醇降解产物包括双醋炔诺醇、17
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乙酸β
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雌二酯、雌三醇、雌酮、雌二醇、2
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羟基雌酮和16α
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羟基雌酮。
[0011]优选地，在本专利技术所述炔雌醇及其降解产物的定性分析方法中，所述精确质量数
据库包括各待测炔雌醇及其降解产物的色谱保留时间及一个母离子和对待测炔雌醇及其降解产物分别施加不同的碰撞能量后响应强度较高的子离子的精确质量数；质谱谱库包括对待测炔雌醇及其降解产物分别施加不同碰撞能量后产生的二级质谱图。
[0012]优选地，在本专利技术所述炔雌醇及其降解产物的定性分析方法中，所述超高压液相色谱
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四级杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪的色谱条件如下：
[0013]色谱柱：Shim
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pack Scepter C18
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120(2.1
×
100mm，1.9μm)；
[0014]流动相A为：0.1wt％甲酸水溶液；
[0015]流动相B为：LC
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MS级甲醇；
[0016]柱温：35℃；
[0017]流速：0.3mL/min；
[0018]进样量：2μL；
[0019]洗脱方式：梯度洗脱。
[0020]优选地，在本专利技术所述炔雌醇及其降解产物的定性分析方法中，所述梯度洗脱的程序如下：
[0021]0分钟，流动相A为60％，流动相B为40％；
[0022]10.6分钟，流动相A为35％，流动相B为65％；
[0023]16.5分钟，流动相A为0％，流动相B为100％；
[0024]19.25分钟，流动相A为0％，流动相B为100％；
[0025]19.35分钟，流动相A为60％，流动相B为40％；
[0026]23分钟，流动相A为60％，流动相B为40％。
[0027]优选地，在本专利技术所述炔雌醇及其降解产物的定性分析方法中，所述超高压液相色谱
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四级杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪的质谱离子源条件如下：
[0028]电喷雾离子源；
[0029]负离子模式；
[0030]喷雾电压:3.5kV；
[0031]毛细管温度：25℃；
[0032]加热器温度：50℃；
[0033]鞘气流量：33arb；
[0034]辅助气体流量：15arb；
[0035]扫气流量：2arb；
[0036]离子透镜电压频率：55.0。
[0037]优选地，在本专利技术所述炔雌醇及其降解产物的定性分析方法中，所述超高压液相色谱
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四级杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪的质谱检测条件如下：
[0038]扫描模式：一级全扫描/数据依赖二级子离子扫描；
[0039]扫描范围：200
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350m/z；
[0040]一级全扫描：分辨率为70000，轨道阱最大容量为3
×
106，轨道阱最大注入时间为100ms；
[0041]数据依赖二级子离子扫描：启用目标离子列表，目标离子列表中的参数与精确质量数据库中的对应参数一致，分辨率为17500，轨道阱最大容量为1
×
105，轨道阱最大注入
时间为50ms，循环次数为5次，隔离窗口为4.0m/z，碰撞能量模式与能量值设置为NCE：15eV、NCE：25eV、NCE：30eV，轨道阱最小容量为8
×
103，动态排除时间为10s。
[0042]优选地，建立待测炔雌醇及其降解产物的精确质量数据库的具体过程，包括以下步骤：
[0043]分别配制浓度为1000μg/L的待测炔雌醇以及炔雌醇降解产物的标准溶液，采用超高压液相色谱
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四极杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪进样器直接进样，在正离子与负离子模式下分别进行分析检测，确定扫描模式为负离子模式，确定相应待测化合物的母离子精确质量数，确定响应强本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种炔雌醇及其降解产物的定性分析方法，其特征在于，包括以下步骤：建立待测炔雌醇及其降解产物的精确质量数据库和质谱谱库：配置待测炔雌醇以及炔雌醇降解产物的标准溶液，采用超高压液相色谱
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四极杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪确定待测炔雌醇及其降解产物的精确质量数据库和质谱谱库；样品检测：将炔雌醇加入微藻中，再置于培养基中培养，然后取藻液与溶剂混合，破碎藻细胞后，再经过固相萃取分离藻细胞，得到样品；采用超高压液相色谱
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四级杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪对样品进行检测；结果分析：将样品的检测结果与建立的精确质量数据库和质谱谱库进行对比分析，当检测结果与精确质量数据库和质谱谱库信息匹配时，则确定样品中检测出待测炔雌醇及其降解产物。2.根据权利要求1所述的定性分析方法，其特征在于，所述炔雌醇降解产物包括双醋炔诺醇、17
‑
乙酸β
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雌二酯、雌三醇、雌酮、雌二醇、2
‑
羟基雌酮、16α
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羟基雌酮中的17
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乙酸β
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雌二酯、雌酮、雌二醇、16α
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羟基雌酮。3.根据权利要求2所述的定性分析方法，其特征在于，所述炔雌醇降解产物包括双醋炔诺醇、17
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乙酸β
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雌二酯、雌三醇、雌酮、雌二醇、2
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羟基雌酮和16α
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羟基雌酮。4.根据权利要求1所述的定性分析方法，其特征在于，所述精确质量数据库包括各待测炔雌醇及其降解产物的色谱保留时间及一个母离子和对待测炔雌醇及其降解产物分别施加不同的碰撞能量后响应强度较高的子离子的精确质量数；质谱谱库包括对待测炔雌醇及其降解产物分别施加不同碰撞能量后产生的二级质谱图。5.根据权利要求1所述的定性分析方法，其特征在于，所述超高压液相色谱
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四级杆
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静电场轨道阱高分辨质谱仪的色谱条件如下：色谱柱：Shim
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pack Scepter C18
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120(2.1
×
100mm，1.9μm)；流动相A为：0.1wt％甲酸水溶液；流动相B为：LC
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MS级甲醇；柱温：35℃；流速：0.3mL/min；进样量：2μL；洗脱方式：梯度洗脱。6.根据权利要求5所述的定性分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱的程序如下：0分钟，流动相A为60％，流动相B为40％；10.6分钟，流动相A为35％，流动相B为65％；16.5分钟，流动相A为0％，流动相B为100％；19.25分钟，流动相A为0％，流动相B为100％；19.35分钟，流动相A为60％，流动相B为40％；23分钟，流动相A为60％，流动相B为40％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王振，吴小敏，王裕文，刘晓娟，
申请(专利权)人：汕头大学，
类型：发明
国别省市：