【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预防和治疗流感感染的组合物及其使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年9月11日提交的美国临时申请号63/077,454的权益和优先权，该申请的全部内容通过引用纳入本文。
[0003]关于联邦资助的声明
[0004]研究或开发
[0005]本专利技术是在美国国家卫生研究院授予的HHSN272201400008C和AI146448以及美国农业部授予的58
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5030
‑5‑
047的政府支持下完成的。政府对本专利技术享有一定的权利。
[0006]对序列表的引用
[0007]根据37 C.F.R
§
1.52(e)(5)，创建于2021年9月13日，大小为11,269字节的命名为“UGA_2019_094_02_PCT_ST25.txt”的文本文件提交的序列表通过引用纳入本文。
[0008]本专利技术大体在重组流感病毒及其在疫苗制剂和方案中的应用的领域。
技术介绍
[0009]流行性感冒，常称为流感，是一种由流感病毒引起的急性呼吸道疾病。流感病毒感染继续构成与季节性流行病和散发性流行病相关的全球主要公共卫生威胁。大多数人在一周内从发烧和其他症状中康复，无需医疗护理。然而，流感会导致高风险人群的严重疾病或死亡。例如，甲型流感(IAV)每年在全球造成300万至500万例重症病例，以及30万至60万人死亡(Girard，et al.，Vaccine，23，5708
‑>5724(2005)，Iuliano，et al.，Lancet，391，1285
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1300(2018))。对美国而言，由于预防、治疗和住院费用，以及缺课或工作日请假，流感病毒感染导致的平均经济影响为870亿美元(Molinari，et al.，Vaccine，25，5086
‑
5096(2007)，Glezen，et al.，Am.J.Public Health，103，e43
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e51(2013)，Gasparini，et al.，Hum.Vaccines Immunother，8，21
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28(2012))。
[0010]疫苗接种被认为是对抗流感的第一道防线(Erbelding，J Infect Dis，218(3)：347
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354(2018))，尽管不是100％有效，但仍然是预防感染的最佳方式。目前，季节性流感疫苗只针对几个(通常是三或四个)预计在下一个季节最常见的毒株，然而，这些病毒不断变化的性质使得疫苗在一个季节后或针对大流行毒株无效。FDA批准了三种类型的流感病毒疫苗供人类使用：裂解病毒体(split virion)或亚单位灭活流感病毒(IIV)、重组流感蛋白(RIV)和减毒流感病毒(LAIV)活疫苗。IIV和RIV疫苗可以引发针对HA上的表位的抗体的产生，但产生有限的或没有细胞免疫。相比之下，LAIV可以通过模拟天然感染引发体液和细胞应答的组合(Lopez，et al.，Vaccines，8，434(2020)，Yamayoshi&Kawaoka，Nat.Med.，25，212
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220(2019))。尽管LAIV具有固有的提供针对多种病毒靶标的免疫力的能力，由于在免疫受损个体中的安全性问题，它们并不适合所有人(Yamayoshi&Kawaoka，Nat.Med.，25，212
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220(2019)，Grohskopf，et al.，MMWR Recomm Rep.，69，1
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24(2020))。因此，希望提高LAIV的安全性同时保持功效以扩大此类疫苗在人群中的用途。
[0011]接种疫苗后，机体产生针对疫苗中存在的病毒的特异性抗体。IgG和IgA是机体产生以预防流感感染的两种主要抗体同种型。IgG是血液循环中发现的主要同种型，IgA是粘膜组织(包括气道)中发现的占主导地位的同种型。IgA应答被认为对预防和/或控制多种生殖器、肠道和呼吸道感染(包括流感)具有重要意义(Corthesy，Front.Immunol.，4，185(2013))。当流感病毒通过粘膜表面进入宿主时，在气道粘膜上检测到IgA和IgG应答，具有抗流感的中和活性，然而，大量的IgA对于提供第一道保护至关重要。IgA，特别是其多重多聚体形式的分泌型IgA，通常比IgG更广泛地中和(Suzuki，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，112，7809
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7814(2015))。IgA中和病原体而不引起炎症，因为它不能固定和激活补体级联(Cerutti，Nat.Rev.Immunol.，8，421
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434(2008))。
[0012]此外，IgA抗体显示出显著高于IgG抗体的交叉结合活性，这意味着IgA抗体甚至可以靶向疫苗中未包含的更广谱的病毒。IgA，特别是其多重多聚体形式的分泌型IgA(sIgA)，通常比IgG6更广泛地中和。IgA中和病原体而不引起炎症，因为它不能固定和激活补体级联(Cerutti，et al.，Nat Rev Immunol，8(6)：421
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34(2008))。相比之下，结合但不中和病毒(非保护性抗体)的IgG应答与2009感染大流行H1N1病毒或1957年感染大流行H2N2病毒后病情严重的中年人的免疫复合物介导的疾病有关(Monsalvo，et al.，Nature medicine，17(2)：195
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9(2011))。
[0013]目前流感疫苗的有效性仍然很低，从10％到60％不等。鼻内流感疫苗被认为甚至不如注射流感疫苗有效。迄今为止可用的流感疫苗尚未被设计为特异性上调IgA应答和/或使IgA/IgG平衡向更占主导的IgA应答倾斜，特别是在气道狭窄区域(confinements)内(Boyaka，et al.，J Immunol，199(1)：9
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16(2017))。目前批准或试验的减毒流感病毒活疫苗被认为能刺激粘膜和全身IgA和IgG以及T细胞介导的免疫，因为它们更类似于天然病毒感染，但它们对促进IgA应答的相对影响尚不清楚。
[0014]因此，仍然需要改进的疫苗策略来预防和治疗流感。
[0015]因此，本专利技术的目的是提供用于保护和治疗流感病毒感染的改进的组合物及其使用方法。
[0016]本专利技术的另一个目的是提供用于改善针对流感的粘膜IgA应答的组合物及其使用方法。
[0017]本专利技术的另一个目的是提供组合物及其使用方法，所述组合物及其使用方法增强和/或拓宽针对抗原漂移变体或分化体的保护，同时最小化与次优抗体
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抗原匹配、疾病增强和免疫病理学相关的风险。
技术实现思路
[0018]提供了用于诱导或增加针对病毒的免疫应答的重组构建体、包括所述重本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.核酸，其包含编码IgA诱导蛋白(IGIP)多肽的核酸序列和编码血凝素(H)或神经氨酸酶(N)的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接到一个或多个表达控制序列。2.权利要求1所述的核酸，其进一步包含可操作地连接至所述编码IGIP多肽的序列的编码自体IGIP信号肽序列或异源信号肽序列的核酸序列。3.权利要求2所述的核酸，其中所述IGIP多肽包含SEQ ID NO：1
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12中任一项的IGIP的成熟形式或其功能片段或其变体，所述变体与SEQ ID NO：1至12中任一项具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多的序列同一性，任选地其中所述IGIP多肽能够增加IgA表达。4.权利要求3所述的核酸，其包含编码H的核酸序列，并且还包含可操作地连接到所述编码H的序列的编码自体H信号肽序列或异源信号肽序列的核酸序列。5.权利要求4所述的核酸，其中所述H是来自甲型流感病毒的H的成熟形式，任选地，其中所述H是H1至H18中的任一种。6.权利要求5所述的核酸，其中所述H是H1的成熟形式。7.权利要求4所述的核酸，其中所述H是来自乙型流感病毒的H的成熟形式。8.权利要求3所述的核酸，其包含编码N的核酸序列，并且还包含可操作地连接到所述编码N的序列的编码自体N信号肽序列或异源信号肽序列的核酸序列。9.权利要求8所述的核酸，其中所述N是来自甲型流感病毒的N的成熟形式。10.权利要求9所述的核酸，其中所述N是N1至N11中任一项的成熟形式。11.权利要求8所述的核酸，其中所述N是来自乙型流感病毒的N的成熟形式。12.权利要求3所述的核酸，其中所述编码IGIP多肽的序列和所述编码H或N的序列由编码蛋白酶切割位点的核酸序列隔开，任选地其中所述蛋白酶切割位点是弗林蛋白酶切割位点。13.权利要求12所述的核酸，其中所述编码IGIP多肽的序列和所述编码H或N的序列由编码自切割肽的核酸序列隔开，任选地，其中所述自切割肽是2A自切割肽，任选地其中所述2A自切割多肽选自EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQ ID NO：16)、ATNFSLLKQAGDVEENPGP(SEQ ID NO：17)、QCTNYALLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO：18)和VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO：19)。14.权利要求13所述的核酸，其中所述编码IGIP多肽的序列和所述编码H或N的序列由编码肽接头的核酸序列隔开，任选地，其中所述肽接头包含一个或多个甘氨酸和一个或多个丝氨酸。15.权利要求3所述的核酸，其中所述核酸是具有以下取向的流感基因组RNA片段：
‘
5编码IGIP多肽的核酸序列
‑
编码H或N的核酸序列3
’
。16.权利要求3所述的核酸，其中所述核酸是具有以下取向的流感基因组RNA片段：
‘
5编码H或N的核酸序列
‑
编码IGIP多肽的核酸序列3
’
。17.权利要求15所述的核酸，其进一步包含5
’
非翻译区(UTR)、3
’
非翻译区域(UTR)，或其组合。18.权利要求17所述的核酸，其中所述5
′
UTR、3
′
UTR或其组合来自流感病毒。19.权利要求18所述的核酸，其中所述核酸编码H，并在核酸的5
’
和3
’
端分别包含流感病毒片段4的5
’
UTR和3
’
UTR。
20.权利要求18所述的核酸，其中所述核酸编码N，并且在核酸的5
’
和3
’
端分别包含流感病毒片段6的5
’
UTR和3
’
UTR。21.核酸，其包含权利要求1
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20中任一项所述的核酸的反向互补序列。22.权利要求21所述的核酸，其中所述核酸是DNA或RNA。23.权利要求21所述的核酸，其中所述核酸是单链的或双链的。24.权利要求21所述的核酸，其中所述核酸是环形的或线性的。25.载体，其包含权利要求1
‑
14中任一项所述的核酸。26.病毒基因组片段，其包含权利要求1
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20中任一项所述的核酸或其反向互补序列。27.病毒，其包含权利要求26所述的病毒基因组片段。28.权利要求27所述的病毒，其中剩余的病毒基因组片段来自流感病毒。29.权利要求28所述的病毒，其中所述流感病毒是甲型流感病毒。30.权利要求29所述的病毒，其包含如下基因组结构：编码PB2的片段1；编码PB1和任选的PB1
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F2的片段2；编码PA和任选的PA
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X的片段3；编码H的片段4；编码NP的片段5；编码N的片段6；编码M1和M2的片段7；和编码NS1和NEP的片段8。31.权利要求28所述的病毒，其中所述流感病毒是乙型流感病毒。32.权利要求31所述的病毒，其包含如下基因组结构：编码PB1的片段1；编码PB2的片段2；编码PA的片段3；编码H的片段4；编码NP的片段5；编码N和NB的片段6；编码M1和BM2的片段7；和编码NS1和NEP的片段8。33.权利要求27所述的病毒，其中所述流感病毒是减毒的流感病毒。34.权利要求33所述的病毒，其中所述减毒的病毒包含再分配基因组，温度敏感突变，NS1截短，弹性蛋白酶依赖性，重排的基因组，或其组合。35.权利要求33所述的病毒，其中所述减毒的流感病毒是OH/04att、冷适应列宁格勒(ca/LEN)或B/Bris att。36.药物组合物，其包含药学上可接受的载体中的权利要求2...
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