一种检测紫肉参薯种山药的分子标记、引物对、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术涉及山药种质资源鉴定技术领域，特别是涉及一种检测紫肉参薯种山药的分子标记、引物对、试剂盒及其应用。本发明专利技术提供的分子标记为紫肉参薯种山药与其他参薯种山药(紫皮花肉或紫皮白肉)的区别位点，利用该分子标记设计的引物对可以无需等到成熟期挖取块茎并切断来鉴别紫肉参薯山药，对紫皮紫肉参薯种山药的筛选具有高效、准确和限制少的优点，为紫肉参薯种质资源鉴定和育种提供了有效的工具。参薯种质资源鉴定和育种提供了有效的工具。参薯种质资源鉴定和育种提供了有效的工具。

【技术实现步骤摘要】
一种检测紫肉参薯种山药的分子标记、引物对、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及山药种质资源鉴定
，特别是涉及一种检测紫肉参薯种山药的分子标记、引物对、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]参薯种山药为薯蓣科薯蓣属参薯种的草质藤本植物，药食同源，主要分布在亚洲、非洲和美洲的热带和亚热带地区，在我国南方各省普遍栽种。参薯种山药地下块茎富含丰富的蛋白质、淀粉、多糖等营养物质，蒸、煮后可以直接食用；还可加工成甜品糕点、饮品等，经济价值高，市场前景好。此外，参薯种山药中紫皮紫肉参薯种山药块茎富含抗氧化功能的花青苷，可预防高血压、心脑血管等疾病。
[0003]参薯种山药中按块茎颜色可分为白皮白肉、紫皮花肉、紫皮紫肉、紫皮白肉四种品种类型。紫皮花肉、紫皮紫肉、紫皮白肉三类参薯种山药地上部叶片和藤蔓表型性状非常接近，很难进行有效区分，进行品种鉴定时需等到成熟期挖取块茎并切断鉴别，费时费力且伤害植物。因此，生产上紫肉参薯种山药品种混杂现象严重，极大影响了紫肉参薯种山药的种植推广和新品种选育。因此，提高紫肉参薯种山药种质资源鉴定的效率和准确性，对加快紫肉参薯种山药的育种进程、降低由于鉴定过程中的资源消耗、减少因鉴定对植物造成的伤害具有重要意义。

技术实现思路

[0004]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种检测紫肉参薯种山药的分子标记、引物对、试剂盒及其应用。本专利技术提供的分子标记可以鉴定紫肉参薯种质资源，对紫皮紫肉参薯种山药的筛选具有高效、准确和限制少的优点，为紫肉参薯种质资源鉴定和育种提供了有效的工具。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种检测紫肉参薯种山药的分子标记，所述分子标记包括C2
‑
28；所述C2
‑
28的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
[0007]本专利技术还提供了一种检测紫肉参薯种山药的引物对，所述引物对包括C2
‑
28F和C2
‑
28R；
[0008]所述C2
‑
28F的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
[0009]所述C2
‑
28R的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。
[0010]本专利技术还提供了一种检测紫肉参薯种山药的试剂盒，所述试剂盒包括上述技术方案所述的引物对。
[0011]优选的，所述试剂盒还包括191bp的DNAMaker。
[0012]本专利技术还提供了上述技术方案所述的分子标记或上述技术方案所述的引物对或上述技术方案所述的试剂盒在检测紫肉参薯种山药中的应用。
[0013]本专利技术还提供了一种检测紫肉参薯种山药的方法，包括以下步骤：
[0014]以待检测参薯种山药的基因组DNA为模板，利用上述技术方案所述的引物对进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0015]当扩增产物的大小仅为191bp时，则待检测参薯种山药为紫肉参薯种山药。
[0016]优选的，所述PCR扩增的反应体系为10μL，包括基因组DNA 1μL、C2
‑
28F0.4μL、C2
‑
28R 0.4μL、dNTP Mix 0.2μL、Taqpolymerase 0.08μL、10
×
TaqBuffer1μL、MgCl20.6μL和余量的ddH2O。
[0017]优选的，所述PCR扩增的的反应程序包括：94℃预变性3min；94℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s，共进行16个循环；94℃变性30s，54℃退火30s，72℃延伸30s，共进行19个循环；72℃延伸10min。
[0018]优选的，所述扩增产物的大小的测定方法包括电泳或测序；所述电泳包括非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
[0019]优选的，所述非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的参数包括：50V，50mA电泳20～30分钟；220V，180mA电泳60～90分钟。
[0020]有益效果：
[0021]本专利技术提供了一种检测紫肉参薯种山药的分子标记，所述分子标记包括C2
‑
28；所述C2
‑
28的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本专利技术提供的分子标记为紫肉参薯种山药与其他参薯种山药的区别位点，利用该分子标记设计的引物对可以无需等到成熟期挖取块茎并切断来鉴别紫肉参薯山药，对紫皮紫肉参薯种山药的筛选具有高效、准确和限制少的优点，为紫肉参薯种质资源鉴定和育种提供了有效的工具。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0023]图1为扩增产物为430bp、380bp、195bp、191bp和175bp时，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图；
[0024]图2为应用例1中22种参薯种山药的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果图；其中序号和品种编号对应结果为：1
‑
Y280、2
‑
Y281、3
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Y264、4
‑
Y275B3、5
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Y302、6
‑
Y307、7
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Y299、8
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Y296、9
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Y294、10
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Y309、11
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Y284、12
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Y289、13
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Y285、14
‑
Y278、15
‑
Y283、16
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Y274、17
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Y310、18
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Y268、19
‑
Y12、20
‑
YW、21
‑
YZ、22
‑
YS；
[0025]图3为紫皮花肉、紫皮白肉、紫皮紫肉参薯种山药的横切图；
[0026]图4为部分紫皮花肉、紫皮白肉、紫皮紫肉参薯种山药的叶片与茎节对比图；
[0027]图5为对比例1中C7
‑
48引物标记的反应产物的聚丙烯酰胺凝胶检测结果图；
[0028]其中Y307为紫皮花肉参薯种山药、Y281为紫皮白肉参薯种山药、Y285为紫皮紫肉参薯种山药。
具体实施方式
[0029]本专利技术提供了一种检测紫肉参薯种山药的分子标记，所述分子标记包括C2
‑
28；所述C2
‑
28的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，所述SEQ ID NO.1为：
[0030]5’‑
TTTGAGGATCAGCTCTTCGGGGGGCTAAACTTTCCTTTAGCTGAAA ATAAATAAATAAATAAATAAATAAATAATGTTATGTG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测紫肉参薯种山药的分子标记，其特征在于，所述分子标记包括C2
‑
28；所述C2
‑
28的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。2.一种检测紫肉参薯种山药的引物对，其特征在于，所述引物对包括C2
‑
28F和C2
‑
28R；所述C2
‑
28F的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；所述C2
‑
28R的核苷酸序列包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。3.一种检测紫肉参薯种山药的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的引物对。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括191bp的DNAMaker。5.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物对或权利要求3或4所述的试剂盒在检测紫肉参薯种山药中的应用。6.一种检测紫肉参薯种山药的方法，其特征在于，包括以下步骤：以待检测参薯种山药的基因组DNA为模板，利用权利要求2所述的引物对进行PCR扩增，得到扩增产物；当...

【专利技术属性】
技术研发人员：周庆红，朱强龙，林佳丽，黄英金，孙静宇，陈欣，
申请(专利权)人：江西农业大学，
类型：发明
国别省市：