(R)-β-红没药烯合酶CcTPS2和其编码基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于合成(R)

【技术实现步骤摘要】
(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2和其编码基因及其应用

：
[0001]本专利技术属于合成生物学和天然药物化学
，具体涉及(R)
‑
β
‑
红没药烯倍半萜合酶及其编码基因，与其应用和其产物作为在制备抗菌和降脂药物中的应用。

技术介绍
：
[0002]萜类化合物为种类最多、化学结构变化最为丰富的一类天然产物，广泛存在于高等植物和微生物中，具有重要的经济和药用价值。倍半萜烯β
‑
红没药烯具有R和S构型，通常存在于植物精油中。负责催化合成单产物(R)
‑
β
‑
红没药烯的萜类合酶编码基因及其应用尚未报道，其抗菌和脂肪抑制活性也未有文献报道。

技术实现思路
：
[0003]本专利技术的目的是提供(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2和其编码基因cDNA序列及其应用，以及其产物作为在制备抗菌和降脂药物中的应用。
[0004]为了实现本专利技术的上述目的，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0005](R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2，其为：
[0006](1)Seq ID No.1所示氨基酸序列构成的蛋白；
[0007](2)Seq ID No.1所示的氨基酸序列经取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基且功能相同的衍生蛋白。
[0008]所述(R)
‑<br/>β
‑
红没药烯合酶CcTPS2的编码基因，其为：
[0009](a)Seq ID No.2所示的核苷酸序列；
[0010](b)Seq ID No.2所示的核苷酸序列经取代和/或缺失和/或添加一个或几个核苷酸且表达相同功能蛋白的核苷酸序列。
[0011]含有所述的CcTPS2编码基因的重组载体。
[0012]含有所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的表达盒。
[0013]含有所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的转基因细胞系。
[0014]含有所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的重组菌。
[0015]所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2或其编码基因在制备含有(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系、重组菌中的应用。
[0016]所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2或其编码基因在制备含有化合物(R)
‑
β
‑
红没药烯的发酵液中的应用，所述的应用是采用：构建含有编码所述基因的表达载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，将获得的基因工程细菌进行发酵培养，得到含有(R)
‑
β
‑
红没药烯的发酵液。
[0017]化合物(R)
‑
β
‑
红没药烯的制备方法，该方法包括下述步骤：构建含有编码(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2的编码基因的表达载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，将获得的基因工程细菌进行发酵培养，得到含有(R)
‑
β
‑
红没药烯的发酵液，通过石油醚或乙酸乙酯萃取后获得含有(R)
‑
β
‑
红没药烯浸膏，经硅胶柱层析方法分离纯化，最终得到化合物
(R)
‑
β
‑
红没药烯，
[0018][0019]所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2或其编码基因在制备化合物(R)
‑
β
‑
红没药烯中的应用。
[0020](R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2或其编码基因在制备香精香油、日用化妆品、抗菌药物、脂肪抑制物、降脂药物中的应用。
[0021]上述任意一项所述制备方法得到的倍半萜类化合物(R)
‑
β
‑
红没药烯在制备香精香油、日用化妆品、抗菌药物、脂肪抑制物、降脂药物中的应用。
[0022]所述抗菌或降脂药物为所述所用病原菌、病原菌抑制剂、脂肪染色剂。
[0023]一种药物组合物，包括药剂学上可接受的药物辅料和化合物(R)
‑
β
‑
红没药烯。所述药物组合物包括片剂、胶囊剂、冲剂、口服液体制剂、静脉注射剂或肌肉注射剂。
[0024]本专利技术还提供获取(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因cDNA序列的特异性引物对，包括：
[0025]正向引物(CcTPS2
‑
F)：5
’‑
ATGGAGGAAATTAGGAGATCAGGA
‑3’
[0026]反向引物(CcTPS2
‑
R)：5
’‑
TCATGTTGATGGCATAGGGATAGG
‑3’
[0027]上述引物由北京擎科新业生物技术有限公司合成。
[0028]本专利技术提供的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的开放阅读框(ORF)为1668bp(Seq ID No.2)，编码555个氨基酸(Seq ID No.1)，将其放在NCBI中进行BLASTN分析比对，结果显示与唇形科植物火把花(Colquhounia coccinea var.mollis)的terpene synthase 1(TPS1)/MZ686957.1的同源性为89.57％。
[0029]本专利技术提供的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因是从火把花(Colquhounia coccinea var.mollis)中克隆获得的萜类合酶基因，其能够特异性催化倍半萜的直接前体法尼基焦磷酸酯(FPP)合成倍半萜(R)
‑
β
‑
红没药烯，该基因是首次从植物中克隆得到，该酶的发现丰富了萜类合酶的多样性。
[0030]本专利技术从唇形科药用植物火把花中克隆并功能鉴定了倍半萜合酶CcTPS2，并利用大肠杆菌生成(R)
‑
β
‑
红没药烯的应用。
[0031]与现有技术相比，本专利技术具备如下的优益性：
[0032]本专利技术从唇形科植物火把花(Colquhounia coccinea var.mollis)出发，克隆本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2，其特征在于：其为：(1)Seq ID No.1所示氨基酸序列构成的蛋白；(2)Seq ID No.1所示的氨基酸序列经取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基且功能相同的衍生蛋白。2.权利要求1所述(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2的编码基因，其特征在于：所述的编码基因为：(a)Seq ID No.2所示的核苷酸序列；(b)Seq ID No.2所示的核苷酸序列经取代和/或缺失和/或添加一个或几个核苷酸且表达相同功能蛋白的核苷酸序列。3.含有权利要求2所述的CcTPS2编码基因的重组载体。4.含有权利要求2所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的表达盒。5.含有权利要求2所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的转基因细胞系。6.含有权利要求2所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的重组菌。7.权利要求1或2所述的(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2或其编码基因在制备含有(R)
‑
β
‑
红没药烯合酶CcTPS2编码基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系、重组菌中的应用。8.权利要求1或2所述的(R)
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β
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红没药烯合酶CcTPS2或其编码基因在制备含有化合物(R)
‑
β
‑
红没药烯的发酵液中的应用，其特征在于所述的应用是采用：构建含有(R)
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β
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红没药烯合酶CcTPS2的编码基因的表达载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，将获得的基因工程细...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎胜红，刘燕，李德森，石琳琳，刘艳春，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：