【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于水产养殖技术,涉及到
技术介绍
在养殖生产中常常需要对鱼类进行催产繁育,而鱼类精子质量的好坏是繁育中非 常重要的一个环节,直接影响受精率、孵化率和成活率等。鱼类精子排出体外后,其活力容 易受到外界各种环境因子的影响,不同的环境条件(温度、光照等)都会对精子造成一定损 伤,从而影响精子的质量,降低受精率、孵化率和成活率,给养殖生产带来极大损失。精子线 粒体是维持精子正常生理功能的能量来源,线粒体上含有多种参与能量代谢的酶,给精子 的运动提供所需的能量,因此线粒体功能的好坏直接反映了精子运动能力的强弱。目前检 测鱼 类精子线粒体损伤的方法是通过扫描电镜和透射电镜进行观察,但这种方法只能从外 观进行定性观察,不能定量分析和统计,且仪器价格昂贵,操作较为烦琐。
技术实现思路
本专利技术需要解决的问题是提供。本专利技术采集一定数量的鱼类新鲜精子和经过低温处理的精子,将2份精液标本分 别用0. Olmol/L、PH 7. 4的PBS洗涤2次后300Xg离心5min ;PBS悬浮沉淀精子,调精子 密度为lX106/ml,加入Rhl23,37°C水浴孵育lOmin,离心弃上清,PBS重复洗涤离心2次, PBS悬浮,加入PI,终浓度10ug/ml,染色5min,利用FACSCalibur型流式细胞仪检测,仪器 状态设置前向散射FSC与侧向散射SSC为线性放大,荧光通道FLl和FL2对数放大,测每 个精子的荧光强度,每份悬液检测10000个精子,数据用Cell Quest软件进行分析;右下象 限Rhl23+/PI_为线粒体膜功能良好的精子,左下象限Rhl23+/ ...
【技术保护点】
一种检测鱼类精子线粒体损伤的方法,采集一定数量的鱼类精子,其特征是将精液标本用0.01mol/L、PH7.4的PBS洗涤2次后300×g离心5min;PBS悬浮沉淀精子,调精子密度为1×10↑[6]/ml,加入Rhl23,37℃水浴孵育10min,离心弃上清,PBS重复洗涤离心2次,PBS悬浮,加入PI,终浓度10ug/ml,染色5min,利用FACSCalibur型流式细胞仪检测,仪器状态设置:前向散射FSC与侧向散射SSC为线性放大,荧光通道FL1和FL2对数放大,测每个精子的荧光强度,每份悬液检测10000个精子,数据用CellQuest软件进行分析;右下象限Rhl23↑[+]/PI↑[-]为线粒体膜功能良好的精子,左下象限Rhl23↑[+]/PI↑[-]为线粒体膜功能丧失的精子,左上象限Rhl23↑[-]/PI↑[+]为坏死精子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:黄晓荣,章龙珍,庄平,江琪,姚志峰,刘鉴毅,张涛,冯广朋,赵峰,闫文罡,
申请(专利权)人:中国水产科学研究院东海水产研究所,
类型:发明
国别省市:31[中国|上海]
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