Pro-Pro-Val-Val的制备方法技术

本发明专利技术属于化学分析技术领域，具体涉及Pro

【技术实现步骤摘要】
Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法


[0001]本专利技术属于化学分析
，具体涉及Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法。

技术介绍

[0002]Pro
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Pro
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Val
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Val，是由脯氨酸
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脯氨酸
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缬氨酸
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缬氨酸，通过肽键结合而成的直链四肽化合物。四肽属于小分子肽，同时具有氢键受体和氢键给体，而氢键是药物与受体相互作用的主要方式之一，因而在药物化学中是一个重要的药效团，表现出抗氧化、抗菌、抗肿瘤等多方面的生物活性。四肽可以通过由蛋白质水解而得，但蛋白质水解的方法存在水解产物不稳定的问题，所以通常是化学合成的方法制备，但原料不易得，制备成本较高。
[0003]黄水是固态酿造白酒起糟滴窖过程中产生的黄色或棕黄色粘稠状液体，是微生物以粮食为原料的发酵产物，也是白酒酿造的副产物，富含糖类、蛋白及白酒风味成份，黄水风味成份通过蒸馏方式得到回收利用，而剩余的底锅黄水则作为废液处理后排放，其中植物蛋白、微生物蛋白等在白酒酿造发酵过程中水解产生的大量肽类化合物未得到回收利用。提取、分离、纯化黄水活性肽，鉴定其结构，并进一步进行活性研究，以明确白酒黄水活性肽的活性，一是可以提高白酒黄水的循环利用价值，具有一定的经济效益。二是可以减轻废液处理负担，具有一定的环保效益。
专利
技术实现思路

[0004]针对现有由脯氨酸
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脯氨酸
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缬氨酸
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缬氨酸，通过肽键结合而成的直链四肽化合物(Pro
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Pro
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Val
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Val)通过化学合成法原料不易得，制备成本高，同时白酒酿造产物黄水还无法得到资源化利用的问题，本专利技术提供Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法，更具体的是提供从黄水中分离制备Pro
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Pro
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Val
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Val的方法，以解决现有制备方法存在的原料不易得到、制备工艺复杂等问题。
[0005]本专利技术提供了Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法：从黄水中分离得到。
[0006]进一步地，所述的制备方法，包括如下步骤：
[0007]a、取黄水，有机溶剂提取，浓缩提取液，得到粗提物；
[0008]b、将粗提物进行大孔树脂柱层析，收集含有Pro
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Pro
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Val
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Val的洗脱液，浓缩，得到粗品；
[0009]c、将粗品进行凝胶色谱柱层析，收集含有Pro
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Pro
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Val
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Val的洗脱液，浓缩，即得Pro
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Pro
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Val
‑
Val。
[0010]进一步地，步骤a中，所述有机溶剂为醇系溶剂。优选为甲醇和或/乙醇。
[0011]进一步地，步骤a中，提取时，有机溶剂与黄水体积比为(3：1)～(4：1)。
[0012]进一步地，步骤a中，提取温度为
‑
10～10℃。
[0013]进一步地，步骤b中，采用大孔树脂柱层析。
[0014]优选地，所述的大孔树脂为DA201和/或DA301大孔吸附树脂。
[0015]优选地，以乙醇
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水为洗脱剂。
[0016]更优选地，以乙醇/水，乙醇体积含量0％，15％，30％，45％，60％，75％，100％的比例进行梯度洗脱。
[0017]优选地，所述大孔吸附树脂层析流速为8～10mL/min。
[0018]进一步地，步骤c中，采用凝胶色谱柱层析。
[0019]优选地，所述的凝胶为葡聚糖凝胶sephadex LH
‑
20。
[0020]优选地，以甲醇
‑
水为洗脱试剂。
[0021]更优选地，以甲醇/水，甲醇体积含量5％，25％，50％，75％，100％的比例进行梯度洗脱。
[0022]进一步地，步骤a、b或c中，浓缩温度为60～80℃。
[0023]进一步地，步骤b或c中，所述含有Pro
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Pro
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Val
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Val的洗脱液以高效液相色谱
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四级杆飞行时间质谱确定目标产物。
[0024]进一步地，所述黄水为固态酿造白酒起糟滴窖过程产生的黄色或棕黄色粘稠液体。
[0025]进一步地，所述黄水为酿造五粮浓香型白酒产生的黄水。
[0026]有益效果：
[0027]1、本专利技术提供了一种制备Pro
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Pro
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Val
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Val的新方法：从五粮浓香型白酒副产物黄水中分离得到，原料易得，制备方法简单。
[0028]2、黄水是白酒酿造的副产物，通常作为废液处理后排放，一方面为废液处理造成了负担，另一方面黄水中的大量肽类化合物未得到循环利用，造成了资源浪费。本专利技术从黄水中探究并制备Pro
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Pro
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Val
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Val，既可提高黄水的应用价值，增大黄水用途，又可以减轻废液处理负担，具有一定的环保效益。
[0029]3、本专利技术首次从黄水中制备分离得到Pro
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Pro
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Val
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Val，原料易得，制备方法简便，产物纯度高。本专利技术创造性地将大孔树脂柱层析和凝胶柱层析等分离技术相结合，通过高分辨的高效液相色谱
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四级杆飞行时间质谱联用技术，以质荷比、同位素相对丰度、同位素比例等的相似度以及二级质谱特征离子为依据进行鉴定，从成分复杂的黄水中首次分离得到了纯度在95％以上的Pro
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Pro
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Val
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Val，可以为黄水中其他肽类化合物的分离制备提供技术依据。
附图说明
[0030]图1为实施例1中D35洗脱液的Pro
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Pro
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Val
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Val的二级质谱图；
[0031]图2为实施例1中D35洗脱液的总离子流图(TIC)和Pro
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Pro
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Val
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Val提取离子流图(EIC)；
[0032]图3为实施例1所得纯品的总离子流图(TIC)。
具体实施方式
[0033]本专利技术的目的在于提供Pro
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Pro
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法，其特征是：从黄水中分离得到。2.根据权利要求1所述的Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法，其特征是：包括如下步骤：a、取黄水，有机溶剂提取，浓缩提取液，得到粗提物；b、将粗提物进行大孔树脂柱层析，收集含有Pro
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Pro
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Val
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Val的洗脱液，浓缩，得到粗品；c、将粗品进行凝胶柱层析，收集含有Pro
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Pro
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Val
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Val的洗脱液，浓缩，即得Pro
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Pro
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Val
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Val。3.根据权利要求2所述的Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法，其特征是：步骤a中，满足以下至少一项：有机溶剂为醇系溶剂；优选地，为甲醇和或/乙醇；提取时，有机溶剂与黄水体积比为(3：1)～(4：1)；提取温度为
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10～10℃。4.根据权利要求3所述的Pro
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Pro
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Val
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Val的制备方法，其特征是：步骤b中，满足以下至少一项：所述的大孔树脂为DA201和/或DA301大孔吸附树脂；以乙醇
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水为洗脱剂；优选地，以乙醇/水，以乙醇体积含量0％，15％，30％，45％...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖勤俭，宋廷富，郑佳，赵东，李杨华，王芳，周韩玲，郭艳，罗珠，胡娇，李松柏，
申请(专利权)人：宜宾五粮液股份有限公司，
类型：发明
国别省市：