一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR-novel-1007及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR

【技术实现步骤摘要】
一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR
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novel
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1007及其应用


[0001]本专利技术属于干扰RNA
，具体涉及一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR
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novel
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1007及其应用。

技术介绍

[0002]MicroRNAs(miRNAs)是非编码RNA的子集，是长度约22个核苷酸的内源启动的短RNA分子，被认为具有转录后调节靶mRNAs的功能。长期以来，由于技术和方法学的限制，miRNAs的意义一直被忽视，直到最初发现两个miRNAs(Lin
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4和let
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7)，通过与目标mRNAs的3'UTR不完全碱基配对来抑制其翻译，进而控制线虫的发育时间。miRNAs不仅在细胞生长周期、细胞分化、增殖和凋亡中起调控作用，而且在肿瘤发生和宿主
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病原体相互作用中也有调节作用。MiRNAs通过碱基配对与完全或接近完全互补的mRNAs 3'UTR区的序列基序控制目标表达。3'UTR区中某些富含AU的元件被发现与miRNAs相互作用，并直接或间接地作为有效的转录后调控信号。对miRNA靶点的分析表明，3'UTR较长的基因通常具有较高的miRNA结合位点密度，主要参与发育调控；而3
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UTR较短的基因通常具有较低的miRNA结合位点密度，并倾向于参与基本的细胞过程。这些结果验证了3'UTR在与miRNAs相互作用中的重要性。也有研究者报道，来自动植物的一部分miRNAs是通过结合mRNAs的5'UTR来发挥作用。因此，许多miRNAs可能在5'UTR和3'UTR区域含有重要的与miRNA相互作用的位点。3'UTR是miRNAs的一个重要但不是唯一的结合靶标，这一事实为miRNAs留下了一种可能性，即miRNAs通过多种途径或模式识别它们的靶标。
[0003]目前，现有技术中有关于miRNAs在调节动物生殖方面的报道，例如公开号为CN109136388A的专利公开了一种半滑舌鳎差异表达的microRNA标签，以解决半滑舌鳎雄鱼及伪雄鱼在生殖遗传差异的区分问题。然而，在山羊中是否有靶向作用繁殖力相关的基因的miRNAs还未见报道。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR
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1007，所述miR
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1007通过与靶基因GTF2IRD1的3'UTR区域的结合位点，实现调控GTF2IRD1基因表达水平。
[0005]本专利技术提供了一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR
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1007，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0006]本专利技术提供了一种所述miR
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1007的检测方法，包括以下步骤：
[0007]将用引物对对样本进行PCR扩增，得到PCR产物进行分析，得到279bp的DNA片段则判断样本中含有miR
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1007；
[0008]所述引物对包括核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的反向引物。
[0009]优选的，所述PCR扩增的反应程序为95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃变性30s，
72℃延伸30s，40个循环；72℃延伸7min。
[0010]优选的，所述PCR产物的分析方法采用琼脂糖凝胶电泳完成。
[0011]本专利技术提供了一种所述miR
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1007的激动剂，包括核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的反向引物。
[0012]本专利技术提供了所述miR
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1007、所述miR
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1007的激动剂或所述miR
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1007的模拟物mimics在负调控GTF2IRD1基因表达中的应用。
[0013]优选的，所述miR
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novel
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1007、所述miR
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1007的激动剂或所述miR
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1007的模拟物mimics是通过结合GTF2IRD1基因的3'UTR区域的结合位点来实现抑制GTF2IRD1基因表达。
[0014]本专利技术提供了所述miR
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1007作为检测标志物在羊育种中的应用。
[0015]本专利技术提供了一种1所述miR
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1007的抑制剂在提高羊繁殖力中的应用。
[0016]优选的，所述羊包括黑山羊和/或绵羊。
[0017]本专利技术提供了一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR
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1007，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本专利技术通过对高产云上黑山羊和低产云上黑山羊进行转录组结果验证分析，发现高产组中GTF2IRD1基因高表达，miR
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1007低表达，而在低产组中GTF2IRD1基因低表达，miR
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1007高表达，推测miR
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1007与GTF2IRD1基因的表达存在调控关系并且与黑山羊的繁殖力相关。同时本专利技术还采用EDU方法验证GTF2IRD1基因和miR
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1007的生物学功能，结果表明，与对照组相比，过表达GTF2IRD1基因组的卵巢颗粒细胞的增殖能力有显著提高，而miR
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1007模拟物组卵巢颗粒细胞的增殖能力有显著降低。由于卵巢颗粒细胞是供应卵母细胞营养的细胞，卵巢颗粒细胞的增殖能力提高能有效提高卵母细胞的数量和质量，大大提升黑山羊的繁殖力。
附图说明
[0018]图1为采用软件预测GTF2IRD1基因与miR
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1007之间的结合位点结果；
[0019]图2为miR
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1007的退火温度筛选结果，注：第一泳道为2000DLMarker：第二泳道开始从左到右依次对应的退火温度为58℃、59℃、60℃、和61℃；
[0020]图3为荧光定量PCR法验证高产组和低产组黑本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向调控GTF2IRD1基因表达的miR
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1007，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一种权利要求1所述miR
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1007的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：将用引物对对样本进行PCR扩增，得到PCR产物进行分析，得到279bp的DNA片段则判断样本中含有miR
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1007；所述引物对包括核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的反向引物。3.根据权利要求2所述检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应程序为95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃变性30s，72℃延伸7min，35个循环；72℃延伸7min。4.根据权利要求2或3所述检测方法，其特征在于，所述PCR产物的分析方法采用琼脂糖凝胶电泳完成。5.一种权利要求1所述miR
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1007的激动剂，其特征在于，包括核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的反向引物。6.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：储明星，刘玉芳，李文韬，刘子嶷，王鹏，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：