本发明专利技术涉及高效成骨技术领域，特别涉及一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，本发明专利技术在原研药的基础上增加牙源性外泌体能有效增强牙周骨细胞的骨分化，此外还通过对诱导剂的筛选，从众多具有报道的成骨分化的中药中筛选出葛根提取物和薄荷提取物，经过临床案例的研究发现，该提取物能有效促进牙骨质线重新生长，骨水平增高，骨小梁恢复，且通过两个诱导剂的合理配比后，能使骨水平增高达到4.0mm以上，相比于现有技术中的3.0mm提高效果更好，在牙周骨重建药物中效果更佳。牙周骨重建药物中效果更佳。牙周骨重建药物中效果更佳。
【技术实现步骤摘要】
一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物
[0001]本专利技术涉及高效成骨
，特别涉及一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物。
技术介绍
[0002]牙周炎是侵犯牙龈和牙周组织的慢性炎症，是一种破坏性疾病，其主要特征为牙周袋的形成和袋壁的炎症，牙周骨缺失，牙松动为特征的一组，口腔恶性疾病，申请人的在先申请专利：202110311551.X提出，利用间充质干细胞凝胶、异体骨粉和诱导剂制备药物用于牙周骨的重建，但是，该文并未明确具体的诱导剂成分。
[0003]在申请人的深入研究中发现，间充质干细胞凝胶虽然能促进细胞的骨分化，但是，其中的杂质仍然较多，骨分化效果并不能达到最佳，外周骨增高效果并不能达到最佳，且现有技术中报道的某些中药具有补肾壮阳、强筋健骨、祛风除湿之功效，药理和临床研究均证实其具有良好的防治骨质疏松症的作用，能促进成骨细胞增殖、矿化，抑制破骨细胞活性的效果，这些中药成分可以做为药物的诱导剂，但是，在具体的研究中发现，这些中药制剂中有部分对细胞增殖有明显的抑制作用，抑制效果甚至导致骨细胞不能很好的生长，而且，在报道具有促进成骨分化效果的诱导剂，并不一定在牙周骨重建过程中有促进作用，有的甚至还有抑制效果，因此，在该药物中对诱导剂的筛选尤为重要。
技术实现思路
[0004]鉴于上述内容，有必要对诱导剂进行筛选和研究，该诱导剂能有效促进间充质干细胞应用于制备牙周骨重建药物。
[0005]为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，所述药物由如下质量百分数的成分组成：15％的间充质干细胞凝胶、4％的牙源性干细胞外泌体、80％的骨粉和1％的诱导剂；所述诱导剂为葛根提取物和/或薄荷提取物。
[0007]进一步的，所述葛根提取物和薄荷提取物均为乙醇提取物。
[0008]进一步的，所述乙醇提取物的乙醇为体积百分数为70％的乙醇溶液。
[0009]进一步的，所述葛根提取物和薄荷提取物的质量比为1:3。
[0010]进一步的，所述葛根提取物和薄荷提取物的具体提取方法为：分别称量500g的干葛根、干淫羊藿、新鲜薄荷、新鲜莲叶药材，用体积百分数为70％的乙醇溶液，回流2次，每次2h，然后将提取物浓缩至20g，在4℃条件下储存即得相应的提取物。
[0011]进一步的，所述牙源性干细胞外泌体标志物为TSG101、CD81和CD63蛋白。
[0012]进一步的，所述牙源性干细胞外泌体制备方法如下：
[0013](1)将牙髓干细胞接种于培养皿或培养瓶中，待细胞生长融合至80％时，弃掉旧培养基，PBS洗涤3次，加入基础培养基；
[0014](2)培养24
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48小时后，将细胞培养液收集起来；
[0015](3)PBS洗涤去除死细胞并更换10％FBS的DMEM；
[0016](4)连续收集约500ml细胞培养液，分装至50ml离心管；
[0017]离心去除大分子囊泡，然后采用100KD超滤管中进行浓缩，将距离离心管底1.5cm高度的液体弃去，5000g 4℃离心10min得到培养基浓缩液；将体积百分数为30％的蔗糖溶液5ml注入培养基浓缩液中，出现分层后，继续加浓缩培养液，使液面高度至管口3mm处；离心，去掉上层的培养基，用注射器轻轻吸取下方含外泌体的蔗糖溶液；收集蔗糖溶液后，用PBS缓冲液稀释后放入100KD的超滤管中，配平后反复用PBS洗涤离心直到去除蔗糖重水溶液，最后收集到的浓缩液即为牙源性干细胞来源的外泌体，将外泌体进行过滤除菌后保存于使
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80℃冰箱，即得。
[0018]本专利技术具有如下有益效果：
[0019]经由上述的技术方案可知，本专利技术采用牙源性外泌体能有效增强牙周骨细胞的骨分化，此外还通过对诱导剂的筛选，从众多具有报道的成骨分化的中药中筛选出葛根提取物和薄荷提取物，经过临床案例的研究发现，该提取物能有效促进牙骨质线重新生长，骨水平增高，骨小梁恢复，且通过两个诱导剂的合理配比后，能使骨水平增高达到4.0mm以上，相比于现有技术中的3.0mm提高效果更好，在牙周骨重建药物中效果更佳。
【附图说明】
[0020]图1为间充质干细胞凝胶的形态图；
[0021]图2为外泌体在电镜下的形态图；
[0022]图3为外泌体的NTA粒径分析图；
[0023]图4为外泌体的Western Blot蛋白印迹检测结果图；
[0024]图5
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图12为部分病例治疗前后拍摄的x光片图。
【具体实施方式】
[0025]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术。但是本专利技术能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似改进，因此本专利技术不受下面公开的具体实施的限制。
[0026]实施例1：
[0027]一、间充质干细胞凝胶获取：
[0028]采集静脉外周血10mL，即将外周血放入变速离心机内离心三分钟，变速离心结束后，无菌操作台内，打开采血管，取出冻胶状PRF，转移至消毒器皿，剪切去除上层淡黄色胶体，用5mL生理盐水简单清洗胶冻内的红细胞，保留胶体，得到间充质干细胞凝胶，胶体形态如图1所示。
[0029]用间充质干细胞专用培养基(购自HYCLONE公司)进行增培代传，收获p4代细胞。
[0030]之后进行免疫荧光染色检测，根据国际细胞治疗联盟的检测标准，间充质干细胞因蛋白标志物CD73，CD90，CD105呈阳性(具体参见专利文件：202110311551.X)。
[0031]二、获取牙源性干细胞外泌体：
[0032]从正常幼儿脱落的乳牙和成人矫正拔牙中获取牙源性干细胞；脱落牙齿来自南宁
贴心创美口腔门诊部的正常拔牙。
[0033]1、牙源性干细胞外泌体的获得：
[0034](1)将幼儿脱落的乳牙牙髓干细胞和成人牙髓干细胞混合后接种于培养皿或培养瓶中，待细胞生长融合至80％时，弃掉旧培养基，PBS洗涤3次，加入基础培养基；
[0035](2)培养24
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48小时后，将细胞培养液收集起来；
[0036](3)PBS洗涤去除死细胞并更换10％FBS的DMEM；
[0037](4)连续收集约500ml细胞培养液，分装至50ml离心管；
[0038](5)离心去除大分子囊泡，然后采用100KD超滤管中进行浓缩，注意将距离离心管底1.5cm高度的液体弃去，5000g 4℃离心10min得到培养基浓缩液；将体积百分数为30％的蔗糖溶液5ml注入培养基浓缩液中，出现分层后，继续加浓缩培养液，使液面高度至管口3mm处；离心，去掉上层的培养基，用注射器轻轻吸取下方含外泌体的蔗糖溶液；收集蔗糖溶液后，用PBS缓冲液稀本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，其特征在于，所述药物由如下质量百分数的成分组成：15％的间充质干细胞凝胶、4％的牙源性干细胞外泌体、80％的骨粉和1％的诱导剂；所述诱导剂为葛根提取物和/或薄荷提取物。2.根据权利要求1所述的一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，其特征在于，所述葛根提取物和薄荷提取物均为乙醇提取物。3.根据权利要求2所述的一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，其特征在于，所述乙醇提取物的乙醇为体积百分数为70％的乙醇溶液。4.根据权利要求1所述的一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，其特征在于，所述葛根提取物和薄荷提取物的质量比为1:3。5.根据权利要求2所述的一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，其特征在于，所述葛根提取物和薄荷提取物的具体提取方法为：分别称量500g的干葛根、新鲜薄荷，用体积百分数为70％的乙醇溶液，回流2次，每次2h，然后将提取物浓缩至20g，在4℃条件下储存即得相应的提取物。6.根据权利要求1所述的一种利用干细胞外泌体促进牙周骨重建的药物，其特征在于，所述牙源性干细胞外泌体标志物为TSG101、CD81和CD63蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴涛，
申请(专利权)人：吴涛，
类型：发明
国别省市：
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