一种检测脂质纳米球中脂质成分及含量的方法技术

本发明专利技术建立了一种高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种检测脂质纳米球中脂质成分及含量的方法


[0001]本专利技术涉及一种用于检测脂质纳米球中脂质成分及含量的方法，具体涉及一种利用高效液相色谱
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蒸发光散射检测器检测磷脂含量及成分的方法。

技术介绍

[0002]脂质体是现在应用最广泛的第四代药物制剂技术之一，它的膜材料是脂类化合物磷脂、胆固醇等。因为磷脂和胆固醇具有双亲性，可以自组装形成双分子层封闭囊泡，药物可以包封在囊泡内部。利用脂质体的结构特点，可以特异性的将药物送到病变组织并且释放药物，从而达到提高药物疗效、降低药物毒副作用的治疗效果。
[0003]脂质体是由表面活性生物脂质形成的组装结构，其通过将它们的亲水性头部暴露于水相，疏水性尾部粘附在一起，形成封闭的囊泡。脂质体的直径从纳米到千分尺不等，是含有正电荷和负电荷的两性化合物，具有无毒、可生物降解并且提高生物利用度等优点。它们有两个不同的作用：为生物膜提供一个很好的模型；亲水和亲脂性试剂的受控药物递送系统。
[0004]针对天然磷脂类的含量检测方法，企业中最常用的为液相色谱法，使用的检测器多为紫外检测器和蒸发光散射检测器。流动相体系主要集中在正相和反相两大类流动相体系，当使用紫外检测器检测时，由于乙腈和乙腈溶剂存在紫外末端吸收，而磷脂酰胆碱的检测波长也多处于末端吸收范围之内，因此常避免使用乙腈
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乙腈
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酸体系。关于大豆磷脂酰胆碱和蛋黄卵磷脂的含量检测方法中，多集中使用正己烷
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异丙醇
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酸/水体系进行测定，色谱图基线较为平稳，磷脂酰胆碱能够与基质中的干扰物完全分离。中国药典(2015版)收录的通则测定方法中，正是使用了正己烷
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异丙醇
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水体系来进行大豆磷脂含量的测定。目前，蒸发光散射检测器常用于磷脂类化合物的检测，因为其为通用型检测器，对大多数物质均有响应，且对磷脂的分子种类无特殊要求。
[0005]传统的高效液相色谱与各种检测器结合是分离和分析磷脂成分的常用技术，如高效液相色谱
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电雾式检测器，高效液相色谱
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蒸发光散射检测器。常规的紫外检测器是应用最广泛的检测器，灵敏度高、线性范围宽，但要求被测样品组分具有紫外吸收或衍生后有紫外吸收。而大多数脂肪酸不具有紫外吸收，因此使用紫外检测器是无效的。针对弱紫外吸收化合物，电雾式检测器和蒸发光散射检测器可作为紫外检测器的补充。高效液相色谱
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蒸发光散射检测器比成本更低，而且比高效液相色谱
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电雾式检测器更容易维护，目前广泛用于磷脂的含量分析。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术在传统磷脂检测方法的基础上，结合不同磷脂的分子结构及自身特点，开发了一种选择性好、简单快捷准确测量脂质体中磷脂成分及组分的新方法。
[0007]本专利技术将以磷脂酰胆碱为原料进行检测。其中磷脂酰胆碱的分子式为：
[0008][0009]第一方面，本专利技术采用方法采用高效液相色谱
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蒸发光散射检测器串联进行检测，流动相A为三氟乙酸、水、乙腈，流动相B为四氢呋喃、乙酸铵、甲醇，进行梯度洗脱。
[0010]流动相A的配制，乙腈：水：三氟乙酸为80：19：1、85：14：1、75：24：1。
[0011]流动相B的配制，甲醇：乙酸铵：四氢呋喃为96：3：1、95：4：1。
[0012]进一步地，所述的洗脱程序为：
[0013]时间流动相A(％)流动相B(％)0158580100100100111585151585
[0014]进一步地，所述的高效液相色谱条件为：色谱柱为氨基柱(250mm
×
4.6mm，5μm)，柱温为25
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45℃，流动相流速为1.0
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1.8ml/min。进一步地，所述的蒸发光散射检测器检测条件为：漂移管温度为40
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60℃；氮气流速为1.2
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2.3L/min；增益1。
[0015]进一步地，所述的检测方法在进行检测时，进样量为10
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30μL。
[0016]另一方面，本专利技术还包括样品的处理，将磷脂酰胆碱用无水乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，摇匀，得到质量浓度为96.80mg/L的标准母液。吸取母液，用无水乙醇稀释，得到7.744，15.488，23.232，30.976，38.720mg/L的磷脂酰胆碱标准工作液，置冰箱中
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20℃储藏备用。
[0017]本专利技术与现有技术相比，其有益效果和优点在于：
[0018]1.该检测方法更快捷、简便、易于操作，重现性好，稳定性高。
[0019]2.该方法针对磷脂不同的极性与官能团，通过调整流动相中水相比例，能够对磷脂进行有效的筛选，并且准确度和稳定性都很好。
[0020]3.该方法在流动相中加入三氟乙酸，能够有效的保证阳离子磷脂的稳定。
[0021]4.该方法中的洗脱液与氨基柱搭配，两者发挥协同作用，能够很好的提升该方法的精密度与稳定性，能够有效的缩短磷脂的保留时间，使得检测效率提高。
附图说明
[0022]图1
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1、图1
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2、图1
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3为不同流动相比例的磷脂酰胆碱色谱图。
[0023]图2为磷脂酰胆碱的标准曲线图。
具体实施方式
[0024]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细描述，需要指出的是，检测的磷脂并不近局限于磷脂酰胆碱，对其它脂质体也同样适用。
[0025]实施例1流动相的确定
[0026]准确称取磷脂酰胆碱标准品9.68mg，用无水乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，摇匀，制得质量浓度为96.80mg/L的标准母液。准确吸取磷脂酰胆碱标准母液4，8，12，16，20mL，用无水乙醇进行梯度稀释，得到质量浓度分别为7.744，15.488，23.232，30.976，38.720mg/L的磷脂酰胆碱标准工作液。置冰箱中
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20℃储藏备用。
[0027]取23.232mg/L的磷脂酰胆碱标准工作液，进样量为10μL，进行高效液相色谱
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蒸发光散射检测器检测，检测条件为：
[0028]高效液相色谱柱为SHISEIDO CAPCELL PAK UG80氨基柱(250mm
×
4.6mm，5μm)，流动相流速为1.8mL/min，蒸发光散射检测器检测条件为：漂移管温度为50℃；氮气流速为1.6L/min；增益1。流动相A为乙腈、水、三氟乙酸，流动相B为甲醇、乙酸铵、四氢呋喃，进行梯度洗脱。梯度洗脱程序如表1所示为：
[0029]表1梯度洗脱程序
[0030]时间流动相A(％)流动相B(％)0158580100100100111585151585
[0031]配制不本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂质纳米球中脂质组分的测定方法，其特征在于：该方法采用高效液相色谱
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蒸发光散射检测器串联进行检测，流动相A为三氟乙酸、水、乙腈，流动相B为四氢呋喃、乙酸铵、甲醇，进行梯度洗脱。2.如权利要求1所述的一种脂质纳米球中脂质组分的测定方法，其特征在于，所述的的梯度洗脱程序为：时间流动相A(％)流动相B(％)01585801001001001115851515853.如权利要求1或2所述的一种脂质纳米球中脂质组分的测定方法，其特征在于，所述的高效液相色谱条件为：色谱柱为氨基柱(250mm
×
4.6mm，5μm)，柱温为25
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【专利技术属性】
技术研发人员：王全军，韩刚，戴学栋，董延生，黄莹，梁宗星，刘杨，
申请(专利权)人：苏州赛赋新药技术服务有限责任公司，
类型：发明
国别省市：