一种在枯草芽孢杆菌中分泌表达贻贝粘附蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了用于在枯草芽孢杆菌中分泌贻贝粘附蛋白的方法。贻贝粘附蛋白具有很好的应用价值，但天然来源的贻贝粘附蛋白产量极低，而异源表达时，贻贝粘附蛋白又难以被分泌至细胞外。鉴于此，本发明专利技术使用来自大肠杆菌中的伴侣蛋白Spy介导贻贝粘附蛋白分泌表达，实现了贻贝粘附蛋白Mfp3和Mfp5在食品级宿主枯草芽孢杆菌中的高效分泌表达。草芽孢杆菌中的高效分泌表达。草芽孢杆菌中的高效分泌表达。

【技术实现步骤摘要】
一种在枯草芽孢杆菌中分泌表达贻贝粘附蛋白的方法


[0001]本专利技术属于生物高
，公开了一种在枯草芽孢杆菌中分泌表达贻贝粘附蛋白的方法。

技术介绍

[0002]贻贝粘附蛋白(又名贻贝足蛋白，mussel foot protein)能够在潮湿的环境中附着于各种不同类型材料的表面，具有很好的粘附性、防水性和生物相容性，是一种潜在的粘合剂材料。从天然贻贝中直接提取的贻贝粘附蛋白产量极低，约10,000只紫贻贝中仅可提取1g贻贝粘附蛋白(Cristian et al..1991.Comp.Comp.Biochem.Physiol.B.98:569
‑
572.Doi:10.1016/0305
‑
0491(91)90255
‑
C.)，难以满足实际生产需求。蛋白异源表达是实现贻贝粘附蛋白大量生产的必由之路。
[0003]目前，部分原核生物和真核生物宿主已被用来尝试表达贻贝粘附蛋白。研究人员在大肠杆菌(Yang et al..2013.Biofouling.29:483<br/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种贻贝粘附蛋白表达盒，其特征在于包含Spy的编码基因spy以及贻贝粘附蛋白基因，所述的Spy的编码基因spy序列如SEQ ID NO.5所示,所述的贻贝粘附蛋白基因选自mfp3、mfp5、mfp6、vfp5或vfp3中的任意一种；优选mfp3或mfp5，mfp3基因序列如SEQ ID NO.8所示,mfp5基因序列如SEQ ID NO.10所示。2.根据权利要求1所述的贻贝粘附蛋白表达盒，其特征在于由P
43
启动子、P
cryIIIa
启动子、信号肽SP
AprE
的编码区、Spy的编码基因spy、连接肽Linker编码区、TEV蛋白酶切割位点CS
TEV
编码区、贻贝粘附蛋白基因和T0转录终止子组成。3.根据权利要求1所述的贻贝粘附蛋白表达盒，其特征在于所述的贻贝蛋白表达盒序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.11所示。4.一种贻贝粘附蛋白重组片段，其特征在于由上游同源臂LF
‑
博来霉素抗性基因Zeo
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权利要求1～3中任一项所述的贻贝粘附蛋白表达盒
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下游同源臂RF组成。5.一种枯草杆菌基因工程菌，其特征在于含有权利要求1～3中任一项所述的贻贝粘附蛋白表达盒或权利要求4所述的贻贝粘附蛋白重组片段...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫新，吴盼盼，李玉，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：