长链非编码RNAlnc070974在制备治疗或诊断肺癌的产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了长链非编码RNAlnc070974在制备治疗或诊断肺癌的产品中的应用，涉及生物医药领域，具体涉及抑制长链非编码RNAlnc070974表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用，以及检测lnc070974表达水平的试剂在制备诊断肺癌的产品中的应用。本发明专利技术研究发现lnc070974可以促进肺癌的生长和转移。利用肺癌细胞系皮下注射裸鼠成瘤后，进行lnc070974的siRNA的瘤内注射，通过检测肿瘤的大小和重量，发现肿瘤的大小和重量降低，说明抑制lnc070974可以缓解和治疗肺癌。此外，还可以将lnc070974作为标志物进行肺癌的诊断。以将lnc070974作为标志物进行肺癌的诊断。以将lnc070974作为标志物进行肺癌的诊断。

【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNA lnc070974在制备治疗或诊断肺癌的产品中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别是涉及长链非编码RNA lnc070974在制备治疗或诊断肺癌的产品中的应用。

技术介绍

[0002]RNA干扰(RNA interference RNAi)现象最先发现于秀丽杆线虫，这是一种由双链RNA(double
‑
stranded RNA,dsRNA)诱导的抗双链RNA的反应，这一反应导致序列特异性的基因沉默。随后发现这一机制存在于许多真核有机体中。RNAi机制的发现为医学基础研究中基因功能的研究提供了新的手段，使基因功能的研究可以大规模展开。在医学临床治疗方面，RNAi的特异性及高效性使其可能成为一前景光明的治疗方法。目前该方法已经通过质粒、腺病毒、逆转录病毒及慢病毒等载体试用于治疗感染性疾病、肿瘤以及遗传性疾病等。
[0003]肺癌是起源于肺部支气管黏膜或腺体的恶性肿瘤，发病率和死亡率增长较快，是对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。肺癌的无创诊断和治疗，仍尚未解决，因此，开发肺癌的检测和治疗药物，具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供长链非编码RNA lnc070974在制备治疗或诊断肺癌的产品中的应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术研究发现抑制lnc070974可以缓解和治疗肺癌，检测lnc070974表达水平可以实现对肺癌的诊断。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
>[0006]本专利技术提供抑制长链非编码RNA lnc070974表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。
[0007]进一步地，所述试剂为si
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lncRNA070974
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1，正义链如SEQ ID NO.3所示，反义链如SEQ ID NO.4所示。
[0008]进一步地，所述试剂为si
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lncRNA070974
‑
2，正义链如SEQ ID NO.5所示，反义链如SEQ ID NO.6所示。
[0009]进一步地，所述试剂为如SEQ ID NO.15所示的shRNA。
[0010]进一步地，所述肺癌为非小细胞肺癌。
[0011]本专利技术还提供一种治疗肺癌的药物，包含si
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lncRNA070974
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1、si
‑
lncRNA070974
‑
2或shRNA；所述si
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lncRNA070974
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1的正义链如SEQ ID NO.3所示，反义链如SEQ ID NO.4所示；所述si
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lncRNA070974
‑
2的正义链如SEQ ID NO.5所示，反义链如SEQ ID NO.6所示；所述shRNA的序列如SEQ ID NO.15所示。
[0012]本专利技术还提供检测lnc070974表达水平的试剂在制备诊断肺癌的产品中的应用。
[0013]进一步地，检测lnc070974表达水平的试剂包括如SEQ ID NO.11
‑
12所示的引物
对。
[0014]本专利技术公开了以下技术效果：
[0015]本专利技术探究了长链非编码RNA lnc070974在肺癌中的作用，并通过RNA下拉(RNA pμlldown)实验、质谱分析和RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RIP)技术鉴定出lnc070974与Y
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盒结合蛋白
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1(Y
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Box Binding Protein 1，YBX1)结合，通过CCK
‑
8、平板克隆等技术，发现敲低lnc070974和YBX1可以抑制肺癌细胞的生长。
[0016]本专利技术首先通过慢病毒转染技术构建稳定敲低lnc070974的肺癌细胞系；然后将该细胞系注射到裸鼠皮下，测量并称量裸鼠皮下肿瘤大小和重量；此外将敲低lnc070974的肺癌细胞和原始肺癌细胞分别尾静脉注射到裸鼠，观察裸鼠肺部肿瘤的变化；通过小鼠活体成像等技术，发现lnc070974可以促进肺癌的生长和转移。利用肺癌细胞系皮下注射裸鼠成瘤后，进行lnc070974的siRNA的瘤内注射，通过检测肿瘤的大小和重量，发现肿瘤的大小和重量降低，说明抑制lnc070974可以缓解和治疗肺癌。
[0017]本专利技术利用qPCR检测肺癌组织或癌旁组织中lnc070974的水平；同时分别取正常人和肺癌患者的血液，分离血清中的外泌体，并利用qPCR检测外泌体中的lnc070974的水平，发现癌组织中lnc070974水平高表，且肺癌患者血清外泌体中lnc070974水平较高，因此可以将lnc070974作为标志物进行肺癌的诊断。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1为si
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NC、si
‑
lnc070974
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1和si
‑
lnc070974
‑
2分别处理A549和HCC827细胞的结果，其中A为A549细胞CCK8结果；B为HCC827细胞CCK8结果；C为两组细胞平板克隆；D为两组细胞克隆数量统计结果；
[0020]图2为si
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NC和si
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YBX1分别处理A549和HCC827细胞的结果，其中A为RNA pu
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down电泳；B：RIPqPCR后产物电泳；C：RIP qPCR结果；D：为A549细胞CCK8结果；E：为HCC827细胞CCK8结果；F：为两组细胞平板克隆；G：为两组细胞克隆数量统计结果；
[0021]图3为lnc070974的shRNA用于动物的体内治疗的实验结果，其中A为肿瘤大小的测量结果；B为肿瘤生长曲线；C为肿瘤的称重结果；D为小鼠活体成像；E为肺部转移结节变化观察结果；
[0022]图4为3例肺癌病人的癌和癌旁组织中lnc070974基因的相对表达水平，以actin基因作为对照基因；
[0023]图5为lnc070974的siRNA用于动物的体内治疗的实验结果，其中A为肿瘤大小的测量结果；B为肿瘤生长曲线；C为肿瘤的称重结果。
具体实施方式
[0024]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限
制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0025]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制长链非编码RNAlnc070974表达的试剂在制备治疗肺癌的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为si
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lncRNA070974
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1，正义链如SEQ ID NO.3所示，反义链如SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为si
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lncRNA070974
‑
2，正义链如SEQ ID NO.5所示，反义链如SEQ ID NO.6所示。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为如SEQ ID NO.15所示的shRNA。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肺癌为非小细胞肺癌。6.一种治疗肺癌的药物，其特征在于，包含si
‑
lncRNA07097...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，刘林，张丽，李雪玲，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：