一种多聚磷酸盐依赖型激酶的突变体蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种多聚磷酸盐依赖型激酶(PPGMK)的突变体蛋白，其通过理性设计和定点突变改造获得，具有较高的热稳定性和酶活力，其酶活力与原始多聚磷酸盐依赖型激酶PPGMK相比提高了1.06倍，热稳定性(半衰期)提高7.18倍；将该PPGMK的突变体蛋白应用于催化甘露糖合成甘露糖

【技术实现步骤摘要】
一种多聚磷酸盐依赖型激酶的突变体蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于基因重组
，涉及一种多聚磷酸盐依赖型激酶的突变体蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]甘露糖
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磷酸(M6P)的分子式为C6H
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O9P，在人体细胞内参与了很多代谢途径，如糖异生、脂肪细胞的分化等。分泌蛋白在内质网折叠后，运送到高尔基体中，在最终糖基化修饰蛋白时，M6P参与末端修饰和糖蛋白标记；也可以参与细胞内溶酶体酶的标记，正因如此，它与人体的一些疾病有着间接关系。最近的文献报道提出甘露糖
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磷酸与胰腺炎的发病有关，M6P通路可以维持胰腺外分泌平衡和功能，而M6P通路的阻断会导致溶酶体自噬途径的紊乱，进而导致胰腺炎的发病。
[0003]M6P作为一种与生物体内环境密切相关的物质，可以利用其参与反应的多样性，对M6P的应用进行开发，如磷酸甘露糖异构酶(PMI)作为一种可以催化M6P异构为果糖
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磷酸(F6P)的酶，可以作为筛选体系正筛选植物转化细胞是否成功。在医疗应用上，目前本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种影响多聚磷酸盐依赖型激酶的热稳定性和酶活力的氨基酸突变子，其包括位于原多聚磷酸盐依赖型激酶(PPGMK)的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列从N端到C端的第187位Ala突变为Arg和/或第166位Asn突变为Ser。2.一种多聚磷酸盐依赖型激酶的突变体蛋白，其序列包含位于原多聚磷酸盐依赖型激酶(PPGMK)的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列从N端到C端的第187位Ala突变为Arg和/或第166位Asn突变为Ser。3.根据权利要求2所述的突变体蛋白，其特征在于，所述突变体蛋白为1号PPGMK突变体蛋白，其序列中包含位于原多聚磷酸盐依赖型激酶(PPGMK)的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列从N端到C端的第187位Ala突变为Arg；优选地，所述1号PPGMK突变体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；和/或，所述突变体蛋白为2号PPGMK突变体蛋白，其序列中包含位于原多聚磷酸盐依赖型激酶(PPGMK)的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列从N端到C端的第166位Asn突变为Ser；优选地，所述2号PPGMK突变体蛋白的序列如SEQ ID NO.3所示；和/或，所述突变体蛋白为3号PPGMK突变体蛋白，其序列中包含位于原多聚磷酸盐依赖型激酶(PPGMK)的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列从N端到C端的第187位Ala突变为Arg和位于原多聚磷酸盐依赖型激酶(PPGMK)的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列从N端到C端的第166位Asn突变为Ser；优选地，所述3号PPGMK突变体蛋白的序列如SEQ ID NO.4所示。4.根据权利要求2或3所述的突变体蛋白，其特征在于，所述突变体蛋白还包括上多聚磷酸盐依赖型激酶的突变体蛋白的N端或C端连接标签得到的融合蛋白；优选地，所述标签包括His标签和/或SUMO标签；进一步优选地，所述突变体蛋白还包括由1号PPGMK突变体蛋白、2号PPGMK突变体蛋白或3号PPGMK突变体蛋白的N端或C端连接His标签或SUMO标签得到的融合蛋白。5.一种影响多聚磷酸盐依赖型激酶酶活力的核苷酸突变子，其包括位于编码原PPGMK的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列的从5
′
端到3
′
端方向的第496位A突变为T、第497位A突变为C、第498位T突变为C、第560位T突变为G、第561位C突变为T中的一个或几个。6.一种编码权利要求2
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4中任意一项所述的突变体蛋白的核苷酸分子，其序列中包含位于编码原PPGMK的如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列中的从5
′
端到3
′
端方向的第496位A突变为T、第497位A突变为C、第498位T突变为C、第560位T突变为G、第...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹辉，孙鹤铭，朱文龙，秦培勇，刘珞，
申请(专利权)人：北京化工大学，
类型：发明
国别省市：