一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用技术

本公开涉及一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用。所述方法包括：S1、将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇

【技术实现步骤摘要】
一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用


[0001]本公开涉及食品材料
，具体地，涉及一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]玉米蛋白是一种醇溶蛋白，占玉米总蛋白的35
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60％，可作为食品来源的递送载体。玉米醇溶蛋白有α
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、β
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、γ
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和δ
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玉米醇溶蛋白四个亚类，其分子量和溶解度不同，α
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玉米醇溶蛋白占整个玉米醇溶蛋白的75
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85％。由于丙氨酸、亮氨酸和脯氨酸等非极性氨基酸含量高，玉米醇溶蛋白不溶于水，除非使用高浓度的尿素、十二烷基硫酸钠等阴离子表面活性剂或极端碱性条件。玉米蛋白在食品和制药领域具有广泛的应用，从生产用于保鲜的功能性薄膜、用于体内支架的生物相容性材料，到递送不稳定的生物活性物质。疏水分子可以使用简单的去溶剂化过程封装在玉米醇溶蛋白颗粒中。
[0003]用配体修饰玉米醇溶蛋白颗粒以达到靶向递送是一种快速发展的策略。叶酸是一种稳定形式的维生素B9，它是蛋白质和核酸合成所必需的必需营养素。叶酸已成为一种有前途的靶向配体，用于将显像剂或治疗剂选择性递送至癌症组织和炎症部位。叶酸受体在许多肿瘤细胞和被激活的巨噬细胞表面过表达，使得叶酸受体经常被作为细胞内靶向递送的目标靶点。与以物理键结合叶酸的玉米醇溶蛋白颗粒相比，叶酸与玉米醇溶蛋白的共价结合增加了过表达叶酸受体的细胞对蛋白颗粒的吸收。虽然大多数细菌不具有叶酸受体，但据报道病原菌对叶酸修饰颗粒的吸收增强，导致颗粒的抗菌效果更好。
[0004]叶酸的谷氨酸侧链上的两个羧基和蝶呤部分的氨基可用于修饰载体材料或生物活性物质。玉米醇溶蛋白和叶酸之间的结合通常是通过不同碳二亚胺介导的酰胺化反应来实现的。然而，碳二亚胺是食品中必须避免的危险化学品。因此，亟需一种无毒无害的方法来制备靶向载体。

技术实现思路

[0005]本公开的目的是提供一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用，该方法制备的叶酸修饰的玉米醇溶蛋白对活性物质进入细菌内部具有显著靶向递送作用。
[0006]为了实现上述目的，本公开一方面提供一种用叶酸修饰玉米醇溶蛋白的制备方法，所述方法包括：
[0007]S1、将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇
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水溶液中，得到玉米醇溶蛋白溶液；
[0008]S2、将叶酸加入所述玉米醇溶蛋白溶液中得到混合液，调节所述混合液的pH值至7
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8，进行偶联反应，得到叶酸
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玉米醇溶蛋白溶液；
[0009]S3、将所述叶酸
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玉米醇溶蛋白溶液进行纯化处理，得到叶酸
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玉米醇溶蛋白。
[0010]可选地，步骤S1中，所述乙醇
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水溶液的浓度为60
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90％；所述玉米醇溶蛋白溶液的浓度为10～30g/L；步骤S2中，相对于每10mL玉米醇溶蛋白溶液，所述叶酸的用量为1～298mg。
[0011]可选地，步骤S2中，所述偶联反应包括搅拌处理；所述搅拌处理的条件包括：速率为200～1000r/min，优选为400～600r/min；温度为40～90℃，优选为50～70℃；时间为3～24h，优选为8～12h。
[0012]可选地，所述纯化处理包括：S31、向所述叶酸
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玉米醇溶蛋白溶液中加入饱和食盐水，析出第一叶酸
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玉米醇溶蛋白；S32、将所述第一叶酸
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玉米醇溶蛋白进行离心处理得到析出物，对所述析出物进行清洗处理。
[0013]可选地，所述离心处理的条件包括速度为3000～11000r/min，优选为7000～10000r/min；温度为0～30℃，优选为0～4℃；时间为0.1～1h，优选为0.1～0.5h；所述清洗处理包括使用第一中性缓冲液或第一碱性缓冲液进行第一冲洗后使用去离子水进行第二冲洗；可选地，所述第一中性缓冲液选自磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠
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柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾
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磷酸氢二钾缓冲液中的至少一种，所述第一碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠
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碳酸氢钠中的至少一种。
[0014]可选地，所述纯化处理包括：将所述叶酸
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玉米醇溶蛋白溶液放入透析袋中与透析液接触；可选地，所述透析使用的透析袋的分子量小于19kDa；所述透析液包括第二中性缓冲液或第二碱性缓冲液。
[0015]可选地，所述第二中性缓冲液选自磷酸二氢钠
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磷酸氢二钠缓冲液、磷酸氢二钠
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柠檬酸缓冲液和磷酸二氢钾
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磷酸氢二钾中的至少一种；所述第二碱性缓冲液选自三(羟甲基)甲基甘氨酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液和碳酸钠
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碳酸氢钠中的至少一种。
[0016]本公开另一方面提供根据第一方面所述的方法制备的叶酸
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玉米醇溶蛋白。
[0017]可选地，其中，所述叶酸的含量为0.66～66.52wt％，优选为52.53～66.52wt％；玉米醇溶蛋白的含量为33.48～99.34wt％，优选为33.48～47.47wt％；所述叶酸
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玉米醇溶蛋白中一级氨基的含量为11.0～13.9μM/g，优选为11.0～12.6μM/g。
[0018]本公开再一方面提供前述的方法制备的叶酸
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玉米醇溶蛋白或前述的叶酸
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玉米醇溶蛋白在递送活性物质进入细菌内部中的应用。
[0019]通过上述技术方案，本公开提供一种用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白及其制备方法和应用，本公开的方法和由本公开的方法制备得到的用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白具备以下优点：(1)本公开的方法简单，实验条件宽泛，且在制备过程中涉及的原材料绿色安全且经济易得，可以作为食品级材料直接使用；(2)本公开的用叶酸修饰的玉米醇溶蛋白对活性物质在大肠杆菌中的递送效果较好。
[0020]本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0021]附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
[0022]图1是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白中叶酸含量的情况图。
[0023]图2是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白中一级氨基含量情况图。
[0024]图3是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白的红外光谱图。
[0025]图4是叶酸修饰的玉米醇溶蛋白的核磁氢谱图。
[0026]图5是图4的局部放大图。
[0027]图6是图4的局部放大图。
[0028]图7是图4的局部放大图。
[0029]图8是叶酸修饰的玉米醇本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用叶酸修饰玉米醇溶蛋白的制备方法，其特征在于，所述方法包括：S1、将玉米醇溶蛋白溶解于乙醇
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水溶液中，得到玉米醇溶蛋白溶液；S2、将叶酸加入所述玉米醇溶蛋白溶液中得到混合液，调节所述混合液的pH值至7
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8，进行偶联反应，得到叶酸
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玉米醇溶蛋白溶液；S3、将所述叶酸
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玉米醇溶蛋白溶液进行纯化处理，得到叶酸
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玉米醇溶蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S1中，所述乙醇
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水溶液的浓度为60
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90％；所述玉米醇溶蛋白溶液的浓度为10～30g/L；步骤S2中，相对于每10mL玉米醇溶蛋白溶液，所述叶酸的用量为1～298mg。3.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤S2中，所述偶联反应包括搅拌处理；所述搅拌处理的条件包括：速率为200～1000r/min，优选为400～600r/min；温度为40～90℃，优选为50～70℃；时间为3～24h，优选为8～12h。4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述纯化处理包括：S31、向所述叶酸
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玉米醇溶蛋白溶液中加入饱和食盐水，析出第一叶酸
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玉米醇溶蛋白；S32、将所述第一叶酸
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玉米醇溶蛋白进行离心处理得到析出物，对所述析出物进行清洗处理。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述离心处理的条件包括速度为3000～11000r/min，优选为7000～10000r/min；温度为0～30℃，优选为0～4℃；时间为0.1～1h，优选为0.1～0.5h；所述清洗处理包括使用第一中性缓冲液或第一碱性缓冲液进行第一冲洗后使用去离子水进行第二冲洗；可选地，所述第一中性缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑金铠，杨飞龙，冯丽萍，赵成英，陆畅，王彦淇，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：