一种动物免疫球蛋白及其制备方法技术

本申请提出了一种动物免疫球蛋白及其制备方法，涉及免疫球蛋白提取技术领域。制备方法包括以下步骤：将收集的动物血浆或血清合并成物质A；对物质A通过两次低温醇沉处理和分离得到初级分离产物；对初级分离产物通过超滤、层析和浓缩得到精制后的动物免疫球蛋白；对精制得到的免疫球蛋白经过除菌过滤得到最终的动物免疫球蛋白成品。此方法具有提取效率高，产品纯度高，工艺简单的特点。通过本方法制备的动物免疫球蛋白产品具有纯度高，细胞毒性小，安全性好的特点。安全性好的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种动物免疫球蛋白及其制备方法


[0001]本申请涉及免疫球蛋白提取
，具体而言，涉及一种动物免疫球蛋白及其制备方法。

技术介绍

[0002]免疫球蛋白是血浆中除白蛋白外含量最丰富的血浆蛋白质，约占血浆蛋白总量的12％～15％。哺乳动物的免疫球蛋白在基因序列、氨基酸组成以及蛋白质结构上存在较高的相似性，它们的生理功能和生理作用基本一致。免疫球蛋白分子的基本单位都是由四条肽链构成的对称结构，包括两条相同的重链和两条相同的轻链，其中，轻链又分为κ和λ两种结构类型；其主要生理功能和作用是通过特异性结合相应抗原、活化补体以及结合Fc受体产生抗体依赖的细胞介导细胞毒作用和调理吞噬作用，阻断或消除各种病原体对机体的致病作用，并通过抗体补充和免疫调节作用对多种疾病起到治疗作用。
[0003]血浆免疫球蛋白可分为五种类型，分别为lgG、lgA、lgE、lgM、lgD，其中免疫球蛋白G(IgG)占免疫球蛋白总量的约70％～80％，是最重要的一类免疫球蛋白，主要应用于免疫低下症、替代治疗、预防某些病毒和细菌感染等。
[0004]目前，动物免疫球蛋白的制备方法主要依靠从血液中提取，常用的提取方法有盐析法、选择性变性沉淀法、有机聚合物沉淀法、聚电解质沉淀法、金属离子沉淀法等等。
[0005]盐析法在常温下可以生产，因此使用最多，生产时常用的盐为硫酸铵盐，硫酸铵盐析法的生产工艺反应较为激烈，主要生化指标中蛋白纯度和单体加双体含量难以一次性达到要求，需要多次纯化，蛋白存放过程中会出现再析出的现象，这就要求有老化的过程，不仅延长了生产周期，而且会影响产品的外观和质量，硫酸铵盐析法需要多步生产工艺反应，且各反应步骤中的反应过程均有差异，缺乏继承性；全过程涉及化学试剂十余种，各种反应溶液均需在生产过程中现场配制，工作过程繁琐；生产过程中排出的废液中含有高浓度硫酸铵，腐蚀性强，不易回收，容易造成环境污染。
[0006]选择性变性沉淀法使溶解度下降、粘度增加、紫外线吸收增加、侧链反应增强，对蛋白质的作用敏感，易被水解；有机聚和物沉淀法虽然沉淀效果高，但是高聚物会产生残留，有一定毒性(阳离子聚合物)；金属离子沉淀法纯度虽高，但是耗电高，容易使生物分子变性，复合物难分解。以上几种方法不适用于大规模生产。
[0007]如何减少产品中有毒化合物残留，减少蛋白变性引起的失活，提高免疫球蛋白的得率，减小细胞毒性及规模化生产是目前动物免疫蛋白生产面临的诸多问题，而市场上对纯度高，工艺简单，安全性好的动物免疫球蛋白的制备方法和产品的需求迫在眉睫。

技术实现思路

[0008]本申请的目的在于提供一种动物免疫球蛋白制备方法，此方法具有提取效率高，产品纯度高，工艺简单的特点。
[0009]本申请的另一目的在于提供一种通过本方法制备得到的动物免疫球蛋白产品，其
具有纯度高，细胞毒性小，安全性好的特点。
[0010]本申请解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0011]一方面，本申请实施例提供一种动物免疫球蛋白的制备方法，其包括以下步骤：
[0012]S1、收集动物血浆和/或血清，合并成物质A；
[0013]S2、对物质A通过两次低温醇沉处理得到初级分离产物；
[0014]S3、对初级分离产物通过超滤、层析和浓缩得到精制后的动物免疫球蛋白；
[0015]S4、对精制得到的免疫球蛋白经过除菌过滤之后得到最终的动物免疫球蛋白成品。
[0016]本申请通过两次低温醇沉处理对动物免疫球蛋白进行粗提，采用低温乙醇法生产，各项生化指标均有所提高，蛋白纯度和含量能够一次性达到要求，存放不会出现再析出现象。其中乙醇分子量小，易回收易降解，环保且经济效益高，同时在醇沉过程中，还采用添加氯化钠用于稳定蛋白质的结构，减少了蛋白质的变性，随后采取超滤、层析和浓缩得到精制的动物免疫球蛋白，最后对动物免疫球蛋白除菌调整pH值至4.1
±
0.3，采用低pH法孵育灭活产品中的病毒，得到安全性高的动物免疫球蛋白成品。整体工艺简单，没有采用有害工业盐添加其中，无有机化合物的残留，而且提取效率高，能达到70％以上，得到的产品蛋白纯度高，细胞毒性小，具有安全绿色的特点。
[0017]另一方面，本申请实施例提供一种根据动物免疫球蛋白的制备方法得到的动物免疫球蛋白，上述动物免疫球蛋白的蛋白浓度大于70g/L，纯度大于95％。
[0018]本申请通过上述制备方法制备得到的动物免疫球蛋白具有纯度高，细胞毒性小，安全性好的特点。
[0019]相对于现有技术，本申请的实施例至少具有如下优点或有益效果：
[0020]1、本申请提供的动物免疫球蛋白制备方法以动物血清或血浆为原料，通过两次低温醇沉处理对动物免疫球蛋白进行粗提，其中乙醇分子量小，易回收易降解，环保且经济效益高，同时在醇沉过程中，还采用添加氯化钠用于稳定蛋白质的结构，减少了蛋白质的变性，随后采取超滤、层析和浓缩得到精制的动物免疫球蛋白，最后对动物免疫球蛋白除菌过滤，分装得到动物免疫球蛋白成品，整体工艺简单，没有采用有害工业盐添加其中，无有机化合物的残留，而且提取效率高，能达到70％以上，而且得到的产品蛋白纯度高，蛋白浓度能够高达98g/L，蛋白纯度能够高达98.5％，并且通过低pH孵育对病毒灭活后的动物免疫球蛋白产品细胞毒性小，整体工艺具有安全、绿色、高效的特点。
[0021]2、本方法收集的动物免疫球蛋白产品的蛋白浓度高且蛋白纯度高，对动物的副作用小。
具体实施方式
[0022]为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0023]需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考具体实施例来详细说明本申请。
[0024]本申请实施例提供一种动物免疫球蛋白的制备方法，其包括以下步骤：
[0025]S1、收集动物血浆和/或血清，合并成物质A；
[0026]S2、对物质A通过两次低温醇沉处理得到初级分离产物；
[0027]S3、对初级分离产物通过超滤、层析和浓缩得到精制后的动物免疫球蛋白；
[0028]S4、对精制得到的免疫球蛋白经过除菌过滤之后得到最终的动物免疫球蛋白成品。
[0029]需要说明的是，本申请中动物指的是猫、犬、猪、羊、牛、马等，本申请主要以动物血清或血浆为原料，在实际操作中也可以将血清与血浆合并。将原料通过两步醇沉，一步层析分离得到动物免疫球蛋白。本申请免疫球蛋白包含lgG、lgA、lgE、lgM、lgD中的至少一种。本申请通过两次低温醇沉处理对动物免疫球蛋白进行粗提，其中乙醇分子量小，易回收易降解，环保且经济效益高，同时在醇沉过程中，还采用添加氯化钠用于稳定蛋白质的结构，减少了蛋白质的变性，随后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种动物免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：S1、收集动物血浆和/或血清，合并成物质A；S2、对物质A通过两次低温醇沉处理得到初级分离产物；S3、对初级分离产物通过超滤、层析和浓缩得到精制后的动物免疫球蛋白；S4、对精制得到的免疫球蛋白经过除菌过滤之后得到最终的动物免疫球蛋白成品。2.根据权利要求1所述的动物免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，所述S2步骤的具体操作如下：向物质A中加入生理盐水，加入pH缓冲液调节pH至6.8
±
0.5，降温至0℃左右，逐步加入
‑
20～
‑
15℃乙醇至体积终浓度为20％
±
2％，并降温至
‑
4.5
±
1℃，搅拌均匀后静置得到物质B；用高速离心机或压滤机对物质B进行分离，收集沉淀I，弃去上清液I；向收集的沉淀I中加入3
±
1℃0.01mol/L的氯化钠溶液，搅拌溶解，随后加入pH缓冲液调节pH至5.2
±
0.5，将溶液降温至0℃左右，加入
‑
20～
‑
15℃乙醇至体积浓度为15％
±
2％，并降温至
‑
4.5
±
1℃，继续反应2小时，静置得到物质C；用高速离心机或压滤机对物质C进行分离，收集上清液II；向上清液II中加入1mol/L的氯化钠溶液，随后加入pH缓冲液调节pH至6.8
±
0.5，加入
‑
15℃以下乙醇至体积浓度为25％
±
2％，降温至
‑
7.0
±
1.0℃，搅拌2小时，静置得到物质D；用高速离心机或者压滤机分离物质D，弃上清液，收集沉淀II得到初级分离产物。3.根据权利要求2所述的动物免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，所述S3步骤中的具体操作如下...

【专利技术属性】
技术研发人员：武福军，胡明明，
申请(专利权)人：武福军，
类型：发明
国别省市：