一种使用实时荧光定量PCR技术快速检测药品中白色念珠菌的方法技术

本发明专利技术涉及一种使用实时荧光定量PCR手段快速检测药品中控制菌白色念珠菌的方法。本发明专利技术根据白色念珠菌ITS2基因序列，设计特异性引物和探针，可以特异性的检测出药品中的白色念珠菌，达到快速检测药品中白色念珠菌的目的。本发明专利技术灵敏度高，特异性强，耗时短，能够在第一时间得到药品的检测结果，并提出有效的改进措施。本发明专利技术从真菌的培养到真菌基因组的提取和PCR反应结束出结果，全程只需要3

【技术实现步骤摘要】
中白色念珠菌的检查方法制备供试品、供试品阳性、阳性对照、阴性对照，上述溶液分别置于23 ℃恒温培养箱中过夜培养5 d。
[0013]（2）细菌基因组的提取
[0014]取上述培养物1ml，按照TaKaRa Dr. GenTLE
TM (fromYeast) High Recovery试剂盒的步骤提取真菌基因组。
[0015]（3）荧光PCR体系的构建
[0016]实时荧光PCR反应体系：10 μl Premix Ex Taq
TM
，上下游引物、TaqMan探针各1 μl（浓度为10 μM），提取DNA模板1 μl，用灭菌水补足至总体积20μl；
[0017] PCR反应程序：95 ℃预变性30 s；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，35个循环；
[0018]当FAM荧光的Ct值小于等于30时，说明供试品中检出白色念珠菌，当FAM荧光的Ct值大于30时，说明供试品未检出白色念珠菌。
[0019]本专利技术相比现有技术具有以下优点：
[0020]（1）本专利技术利用白色念珠菌的保守基因ITS2设本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种使用实时荧光定量PCR技术快速检测药品中白色念珠菌的方法，其特征在于：上游引物F：5
’‑
CGCTGGGTTTGGTGTTGAG
‑3’
；下游引物R：5
’‑
GTTACCGCCGCAAGCAATG
‑3’
；探针序列P：5
’‑
（FAM）CGGTAGTGGTAAGGCGGGAT
‑3’
(MGB）。2.一种应用权利要求1所述的白色念珠菌特异性基因检测用引物和探针进行药品中白色念珠菌检测的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）供试液的制备和增菌培养：按照“中国药典2020年版四部 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法”中白色念珠菌的检查方法制备供试品、供...

【专利技术属性】
技术研发人员：李杰，钱云开，王家芳，林鹏，肖艳霞，王海洋，单超，
申请(专利权)人：秦皇岛海关技术中心临沂市食品药品检验检测中心，
类型：发明
国别省市：