模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法技术

本发明专利技术公开了一种模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，包括以下步骤：S1、采用电转方法将FRET探针转染进入Jurkat细胞中；S2、第一次模拟Jurkat细胞处于力学微环境下；S3、FRET显微镜采集Jurkat细胞的FRET图像；S4、对FRET图像进行定量分析及统计分析；S5、第二次模拟Jurkat细胞处于力学微环境下；S6、采用免疫印迹法检测ERK磷酸化水平。本发明专利技术通过模拟Jurkat细胞无包被黏附、电荷吸附、胞外基质吸附、黏附在内皮细胞层上等不同状态，并通过FRET活细胞观测方法和ERK磷酸化抗体的生化检测方法对处于不同状态的Jurkat细胞进行检测，从而得到Jurkat细胞在不同力学微环境下的活性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法。

技术介绍

[0002]T细胞是人体免疫系统的主要组分之一。在维护健康的免疫反应中，许多T细胞会经历显著的力学微环境变化，如从循环系统的流体状态到黏附在血管璧，穿过血管在组织中迁移并到达效应靶区。jurkat细胞属急性T细胞白血病细胞系，由于Jurkat细胞在人体中的状态及活性无法被观测到，而本方法能够通过模拟的方式探索力学环境变化对Jurkat细胞活性的影响。

技术实现思路

[0003]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。
[0004]为此，本专利技术提出一种模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，该模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法具有模拟出Jurkat细胞在人体中的状态的优点。
[0005]根据本专利技术实施例的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，包括以下步骤：S1、采用电转方法将FRET探针转染进入Ju本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、采用电转方法将FRET探针转染进入Jurkat细胞中；S2、第一次模拟Jurkat细胞处于力学微环境下；S3、FRET显微镜采集Jurkat细胞的FRET图像；S4、对FRET图像进行定量分析及统计分析；S5、第二次模拟Jurkat细胞处于力学微环境下；S6、采用免疫印迹法检测ERK磷酸化水平。2.根据权利要求1所述的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，S1的具体步骤为：S11、在24孔细胞培养板中，用移液枪在每个孔加入500μLRPMI
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1640培养液(10％FBS)，置于细胞培养箱中预热；S12、每孔接种2
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105个细胞，通过计数取适量细胞悬液离心处理，用磷酸盐缓冲盐溶液清洗细胞两次；S13、用电转缓冲液重悬细胞，加入ERK质粒并混匀，用电转移液枪吸10μL细胞悬液；S14、将移液枪插入电转仪中，设置电压为1325V，时间为10ms，冲击数为3次；S15、电转结束后，将细胞液体转入预热的培养基中，于37℃继续培养。3.根据权利要求2所述的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，S12中离心处理时转速为1000转/min，时间为3min；S13中要求无气泡产生。4.根据权利要求1所述的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，S2中，模拟Jurkat细胞处于力学微环境下的状态包括：无包被黏附状态、电荷吸附状态、胞外基质吸附状态、Jurkat细胞包埋于不同刚度I型胶原状态、Jurkat细胞包埋于不同刚度Matrigel胶状态。5.根据权利要求1所述的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，S3中，FRET显微镜上，选取两个成像通路，ECFP成像通道的荧光滤片参数为激发(436
±
10)nm，分光455nm，发射(480
±
20)nm；FRET成像通道的荧光滤片参数为激发(436
±
10)nm，分光455nm，发射(535
±
15)nm；FRET成像时，通过成像软件自动快速切换ECFP和FRET成像通道，以实现该双通道图像的实时采集。6.根据权利要求5所述的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，S3中，吸取100μL细胞悬液置于共聚焦皿中间的玻璃孔上，放置于显微镜的细胞培养盒中，在10min内，通过成像软件选定多个荧光细胞观察位置，然后使用100倍油镜，在显微镜下进行多位点的FRET图像采集。7.根据权利要求1所述的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，S4中，通过以MATLAB软件平台开发的FRET图像分析软件Fluocell6.0.0进行数据分析，实验分析数据以“平均值+标准差”表示，用统计分析软件Origin8.0和GraphPadPrism6.0进行分析，采用t检验比较各组数据之间的差异，t检验的P值要求小于0.05。8.根据权利要求1所述的模拟Jurkat细胞在力学微环境下敏感响应的方法，其特征在于，S5包括，S51、预处理：将六孔板内加入2mg/mL的多聚赖氨酸进行孔板预处理,于37℃条件的细胞培养箱中孵育4h，用于悬浮细胞贴壁培养，按每孔接种2
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105个细胞计算所需细胞量，将
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【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳明星，盛会，李亚芹，邓林红，
申请(专利权)人：常州大学，
类型：发明
国别省市：