一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统、制备方法及其应用技术方案

本发明专利技术提供了一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统、制备方法及其应用，涉及生物医药技术领域。本发明专利技术提供了一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统，使用红细胞进行药物的递送，提高了药物的局部作用浓度和靶向性。利用所述囊泡递药系统装载BAPN，可以抑制肝星状细胞活化缓解肝纤维化，且修饰前后RBCEV的形态和结构基本不受影响。与直接使用BAPN相比，cRGD

【技术实现步骤摘要】
一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统、制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统、制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]器官纤维化是慢性炎症性疾病的疾病进展特征，占全世界全因死亡率的45％。慢性肝病每年导致全球约200万人死亡。慢性肝病的潜在病因包括病毒相关的慢性肝病、酒精性脂肪性肝炎(ASH)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，以及自身免疫和遗传疾病等。在肝脏中，纤维化水平与肝功能相关，是发展为肝细胞癌(HCC)的主要危险因素。此外，肝纤维化引起的慢性门静脉高压是临床并发症的主要原因，包括水肿失代偿、出血事件以及肝性脑病。因此，肝硬化目前是世界上第11位最常见的死亡原因。肝纤维化的特征是细胞外基质(ECM)的逐渐积累，这会破坏肝脏的生理结构。肝脏主要由实质细胞肝细胞组成，在受到轻度损伤时，肝细胞增殖并替换受损组织。然而，持续性和/或严重损伤会导致肝细胞大量死亡和免疫细胞浸润，从而激活肝星状细胞转分化为产生胶原蛋白、纤连蛋白的肌成纤维细胞。一般来说，抗纤维化药物治疗可分为以下三个思路：保护肝细胞、抑制肝星状细胞活化、免疫调节。然而，尽管进行了大量临床前和临床试验，但迄今为止，尚不存在经食品和药物管理局(FDA)批准的抗纤维化药物。
[0003]红细胞外囊泡(Redbloodcellsextracellularvesicles，RBC
‑
EV)是红细胞自发释放的、具有双层脂质结构的球状小泡，在正常生理和疾病状态下发挥多种作用，例如细胞间通讯、免疫调节、红细胞代谢等。RBCEV是用于治疗药物的极具前景的递送载体，它易于获取、伦理安全且使用场景用途广泛。与其他类型的细胞衍生EV相比，RBCEV内不含核DNA和线粒体DNA，极大程度上避免了EV本身的遗传物质对靶细胞产生干扰。RBCEVs具有天然的肝脏靶向能力，这对于治疗肝脏疾病具有一定的优势。
[0004]目前也有一些其他肽修饰RBCEV的报道，它们的作用包括增强靶向性、提高细胞摄取、改善生物相容性等。例如：细胞穿透肽TAT，其作用是改变目的细胞的细胞膜通透性，从而促进RBCEV进入细胞。酸性敏感肽H5WYG是一种可以响应环境酸碱度变化的肽类，疾病部位的酸度较高(如肿瘤组织、炎症部位等)会导致酸性敏感肽发生构象变化或降解。这些修饰手段只能辅助红细胞囊泡提高细胞摄取率或改善生物相容性，而不能针对性地靶向具体某病变部位，从而导致无法实现载药红细胞囊泡的精准靶向输送。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统，提高了BAPN的肝脏局部作用浓度，装载BAPN的cRGD
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RBCEV可以抑制肝星状细胞活化缓解肝纤维化，提高了药物的靶向性和治疗效果。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统，所述递药系统包括药物载体
和靶向肝星状细胞的药物；所述药物载体由cRGD
‑
DSPE
‑
PEG2000修饰红细胞外囊泡RBCEV所得；所述cRGD
‑
DSPE
‑
PEG2000以膜融合方式结合到红细胞外囊泡RBCEV表面。
[0008]优选的，所述cRGD
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DSPE
‑
PEG2000通过如下方法制备得到：
[0009]将cRGD与NHS
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PEG2000
‑
COOH混合进行反应得到cRGD
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PEG2000
‑
NHS；将NHS
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PEG2000
‑
COOH和DSPE反应生成DSPE
‑
PEG2000
‑
COOH；将DSPE
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PEG2000
‑
COOH转化为DSPE
‑
PEG2000
‑
NH2后与所述cRGD
‑
PEG2000
‑
NHS反应，即可得到所述cRGD
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DSPE
‑
PEG2000。
[0010]优选的，所述靶向肝星状细胞的药物包括BAPN。
[0011]本专利技术提供了上述囊泡递药系统的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
[0012]将红细胞外囊泡RBCEV与cRGD
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DSPE
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PEG2000悬浊液混合反应后获得药物载体；
[0013]将所述药物载体与靶向肝星状细胞的药物混合后进行摇床孵育即可获得所述囊泡递药系统。
[0014]优选的，所述cRGD
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DSPE
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PEG2000悬浊液由cRGD
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DSPE
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PEG2000干粉经稀释、超声后所得。
[0015]优选的，所述超声的条件为：10％振幅超声3
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6min，超声处理2
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6s，中断3
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7s。
[0016]优选的，所述红细胞外囊泡RBCEV与cRGD
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DSPE
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PEG2000悬浊液的体积比为1:1～1:3。
[0017]优选的，所述药物载体与靶向肝星状细胞的药物的体积比为1:8～1:12。
[0018]优选的，所述反应的温度为40℃，时间为2h；所述摇床孵育的速度为50rpm。
[0019]本专利技术还提供了上述的囊泡递药系统或上述制备方法制备得到的囊泡递药系统在制备治疗肝纤维化药物中的应用。
[0020]本专利技术提供了一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统，通过cRGD
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DSPE
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PEG2000的进一步修饰，可以达到将RBCEV精准递送至肝星状细胞的目的，提高了药物的局部作用浓度和靶向性。利用所述囊泡递药系统装载BAPN，可以抑制肝星状细胞活化缓解肝纤维化，且修饰前后RBCEV的形态和结构基本不受影响。与直接使用BAPN相比，cRGD
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RBCEV递送的BAPN的血药浓度维持时间更长，肝脏靶向性更强，治疗效果更显著，为治疗纤维化肝病提供了新思路。
附图说明
[0021]图1为WesternBlot技术检测囊泡递药系统蛋白结果。
[0022]图2为扫描电子显微镜下的RBCEV图像。
[0023]图3为RBCEV的纳米粒径分析结果。
[0024]图4为PKH26标记cRGD修饰RBCEV，检测肝星状细胞摄入情况；其中，第一列为空白对照组，未进行处理；第二列为添加阴性对照组，添加了未染色的RBCEV；第三、四列为实验组，分别将PKH26染色的RBCEV和PKH26染色的cRGD
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RBCEV与肝星状细胞共本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向肝星状细胞的囊泡递药系统，其特征在于，所述递药系统包括药物载体和靶向肝星状细胞的药物；所述药物载体由cRGD
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DSPE
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PEG2000修饰红细胞外囊泡RBCEV所得；所述cRGD
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DSPE
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PEG2000以膜融合方式结合到红细胞外囊泡RBCEV表面。2.根据权利要求1所述的囊泡递药系统，其特征在于，所述cRGD
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DSPE
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PEG2000通过如下方法制备得到：将cRGD与NHS
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PEG2000
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COOH混合进行反应得到cRGD
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PEG2000
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NHS；将NHS
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PEG2000
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COOH和DSPE反应生成DSPE
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PEG2000
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COOH；将DSPE
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PEG2000
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COOH转化为DSPE
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PEG2000
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NH2后与所述cRGD
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PEG2000
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NHS反应，即可得到所述cRGD
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DSPE
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PEG2000。3.根据权利要求1所述的囊泡递药系统，其特征在于，所述靶向肝星状细胞的药物包括BAPN。4.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：严永敏，程芳，
申请(专利权)人：常州市武进人民医院常州市第八人民医院，
类型：发明
国别省市：