本发明专利技术公开了一种添加DNA溯源码的DNA油墨，该DNA油墨中含有油墨本底和至少一种人工编辑的DNA溯源码，所述DNA溯源码包含与所用商品相关的身份信息。本发明专利技术的DNA油墨含有已知长度和序列的DNA溯源码，结合由DNA油墨印制的二维码图案信息，DNA溯源码取出或采样后可通过已知的DNA分析方法检测标记商品上的特定核酸，基于DNA油墨建立商品溯源系统。基于DNA油墨建立商品溯源系统。基于DNA油墨建立商品溯源系统。
【技术实现步骤摘要】
一种添加DNA溯源码的DNA油墨及其使用、检测方法
[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种添加DNA溯源码的DNA油墨。
技术介绍
[0002]DNA条形码(DNA Barcoding)产地溯源技术是近几年迅速发展的一项分子生物学技术，以遗传物质为检测对象，具有操作简便、结果可靠，特异性强的优势，具有较好的重现性。携带外源DNA溯源码的溯源标志物具备DNA条形码防伪性强的突出优势，同时可结合DNA密码学实现信息的编写和读取。
[0003]目前国内应用于地理标志产品的溯源手段主要有在商品外包装粘贴地标产品标识、通过条码技术标识产品信息、利用RFID技术进行物流信息管理等。目前常见产品溯源防伪一般通过在外包装打防伪标识的方式，但无法识别包装为真但内容物为假的情况。二维条码以信息容量大、价格低廉等优点，在农产品溯源中得到广泛应用。但标签外露存在非法贸易商扫描和转载加密的二维码的风险，难以保证农产品标识的独特性。无线射频识别即射频识别技术(Radio Frequency Identification，RFID)是一种利用无线电波的射频信号自动识别目标对象并获取相关数据的无线射频身份识别技术，在动物溯源领域有较为广泛的应用。但该技术存在使用成本高、电子标签信息有非法读取和恶意篡改风险、技术标准不统一等问题，在农产品追踪溯源领域的适用度较低，并未实现普遍推广。
[0004]目前地理标识产品认证的标识方法主要是在外包装印制认证标签，独占性差、防伪性低，假冒成本低廉。假冒商品通过冒贴标等方式伪造产品，侵害消费者合法权益、损害地理标识产品品牌形象、不利于地理标识产品的品质控制和销售市场安全监管。
[0005]因此，需要建立一种防伪性高、实用性强、认证可靠的溯源标识方法，用于满足食品产地溯源的市场需求。
技术实现思路
[0006]为解决现有技术存在的缺陷，本专利技术包括以下方面的内容：
[0007]本专利技术的第一方面提供一种添加DNA溯源码的DNA油墨的使用方法，所述使用方法包括如下步骤：
[0008](1)确定携带认证商品信息的DNA溯源码；
[0009](2)根据DNA溯源码序列信息设计合成特定的DNA及其鉴别引物和测序引物；
[0010](3)利用铵功能化二氧化硅微粒包埋DNA溯源码作为溯源标志物，加入食用印字油墨中，制得用于印制在溯源样本表面的DNA油墨；
[0011](4)建立包含溯源样本、DNA溯源码、鉴别引物，与所述溯源样本溯源源头信息和/或批次物流信息对应关系的在线查询网站，将网站转化为二维码图案；
[0012](5)将DNA油墨以二维码图案的形式印制溯源样本表面。
[0013]优选的，所述步骤(1)中DNA溯源码包含信息区、特征身份标识区及扩增特异引物片段，所述信息区包含商品产地信息，参考邮政编码实现来源定位；溯源信息参考索引表格
将数字化信息转换为碱基序列。
[0014]优选的，所述索引表格为下述索引表格1和/或索引表格2，
[0015]索引表格1
[0016]0GAC5GTT1CAT6TAT2AAG7CCT3GGT8CTG4TAA9ATG
[0017]索引表格2
[0018]0GAT5ACC1AGC6CTC2CCT7AAG3ATC8AGT4GCC9TCC。
[0019]更优选的，所述索引表格为索引表格1。
[0020]优选的，所述步骤(1)中DNA溯源码序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.4所示。
[0021]优选的，所述步骤(2)中合成特定DNA的PCR引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、或者SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示。
[0022]优选的，所述步骤(2)中合成特定DNA的PCR反应条件为：94℃预变性2min；94℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸30s；35个循环，最后72℃延伸5min；4℃保存；PCR反应体系为：2
×
Taq PCR Master预混液10μL，10μM上、下游引物各0.15μL，10mM DNA模板0.25μL，加超纯水至20μL。
[0023]优选的，所述步骤(2)中构建携带DNA溯源码的质粒的方法如下：将DNA溯源码接入质粒，对携带成功接入完整DNA溯源码质粒的感受态细胞进行扩增，通过质粒提取进行富集，得到溯源标志物。
[0024]优选的，所述步骤(2)中接入DNA溯源码的质粒为pMD
TM
19
‑
T载体。
[0025]优选的，所述步骤(3)中铵功能化二氧化硅微粒包埋DNA溯源码的方法如下：制备二氧化硅微粒，将二氧化硅微粒进行铵功能化处理，溯源标志物包埋于铵功能化二氧化硅微粒中，即得。
[0026]更优选的，上述用铵功能化二氧化硅微粒包埋溯源标志物的方法如下：使用乙醇、氨溶液、无菌去离子水和正硅酸乙脂的混合物制备二氧化硅微粒，将二氧化硅微粒用N
‑
三甲氧基硅烷基丙基
‑
N,N,N
‑
三甲基氯化铵溶液进行铵功能化处理，溯源标志物与铵功能化二氧化硅微粒混合后，加入食用油墨专用稀释剂，制备得到包埋溯源标志物的铵功能化二氧化硅微粒。
[0027]优选的，所述食用油墨专用稀释剂符合GB10343
‑
2008要求。
[0028]优选的，所述制备二氧化硅微粒的方法如下：将乙醇、氨溶液、无菌去离子水和正硅酸乙脂的混合物震荡后离心，弃去上清液，加入异丙醇涡旋，超声，离心，丢弃上清液，将颗粒悬浮在异丙醇中，制得含二氧化硅微粒的溶液。
[0029]优选的，所述溶液中二氧化硅微粒的浓度为50mg/ml。
[0030]优选的，所述将二氧化硅微粒进行铵功能化处理的方法如下：在含二氧化硅微粒的溶液中加入N
‑
三甲氧基硅烷基丙基
‑
N,N,N
‑
三甲基氯化铵溶液(TMAPS，50％甲醇溶液，wt/wt)，震荡后离心，弃去上清液，加入异丙醇，涡旋后超声处理，离心，弃去上清液，最终将铵功能化二氧化硅微粒悬浮在异丙醇中，制得含铵功能化二氧化硅微粒的溶液。
[0031]优选的，所述溶液中铵功能化二氧化硅微粒的浓度为50mg/ml。
[0032]优选的，所述步骤(3)中的食用印字油墨颜色为黑色。
[0033]优选的，所述步骤(3)中的食用印字油墨在与食用油墨专用稀释剂按体积比1:1稀释后使用。
[0034]优选的，所述食用油墨专用稀释剂符合GB10343
‑
2008要求。
[0035]更优选的，所述食用油墨专用稀释剂为XJ稀释剂(028)。
[0036]优选的，所述步骤(3)中的食用印字油墨中添加2种及以上使用不同鉴别引物的DNA溯源码。
[0037]优选的，所述步骤(4)中的鉴别引物序列如SEQ本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种添加DNA溯源码的DNA油墨的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括如下步骤：(1)确定携带认证商品信息的DNA溯源码；(2)根据DNA溯源码序列信息设计合成特定的DNA及其鉴别引物和测序引物；(3)利用铵功能化二氧化硅微粒包埋DNA溯源码作为溯源标志物，加入食用印字油墨中，制得用于印制在溯源样本表面的DNA油墨；(4)建立包含溯源样本、DNA溯源码、鉴别引物，与所述溯源样本溯源源头信息和/或批次物流信息对应关系的在线查询网站，将网站转化为二维码图案；(5)将DNA油墨以二维码图案的形式印制溯源样本表面。2.根据权利要求1所述的添加DNA溯源码的DNA油墨的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)中DNA溯源码序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求1所述的添加DNA溯源码的DNA油墨的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)中合成特定DNA的PCR引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、或者SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示。4.一种添加DNA溯源码的DNA油墨的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：(1)通过扫描溯源样本表面的二维码获得商品信息；(2)回收溯源样本表面的DNA油墨；(3)从DNA油墨中分离DNA溯源码，在鉴别引物参与下对溯源标志物中的DNA溯源码进行跨越式滚环等温扩增，鉴定标注溯源信息的真实性；(4)对于溯源成功的溯源对象，针对DNA溯源码进行测序，获得DNA溯源码片段的序列信息，将DNA溯源码片段的序列信息输入扫描商品表面印制的二维码后显示的在线查询网站，获取DNA溯源码溯源信息；如果DNA溯源码所对应的源...
【专利技术属性】
技术研发人员：邢冉冉，陈颖，刘珂涵，张九凯，于宁，邓婷婷，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。