拟美国薄荷组培繁殖方法技术

本发明专利技术涉及植物离体组织培养技术领域，尤其涉及一种拟美国薄荷组培繁殖方法。所述拟美国薄荷组培繁殖方法以母株上生长期20

【技术实现步骤摘要】
拟美国薄荷组培繁殖方法


[0001]本专利技术涉及植物离体组织培养
，尤其涉及一种拟美国薄荷组培繁殖方法。

技术介绍

[0002]拟美国薄荷（Monarda fistulosa），属于唇形科，美国薄荷属，一年或多年生草本植物，常用作观赏植物。由于拟美国薄荷花色新颖优美，花期长久，具有极高的园艺价值和市场前景。
[0003]拟美国薄荷的繁殖方式包括播种繁殖、扦插繁殖和分株繁殖。由于拟美国薄荷园艺栽培的种子结实率低，质量参差不齐，因此播种繁殖时间长且成苗的质量差。而扦插繁殖和分株繁殖存在繁殖系数低、繁殖周期长、病虫害积累、长期使用易导致品种退化等缺点。另外，上述传统繁殖方法受到季节更替变化的影响，只能在春秋季进行。因此，拟美国薄荷的繁殖效率低下，不利于大范围推广。
[0004]目前针对拟美国薄荷的组织培养技术的研究尚较少，而且，现有的拟美国薄荷组织培养方法的污染率和死亡率较高，繁殖效率也有待提高。有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种拟美国薄荷组培繁殖方法。所述繁殖方法可显著提高拟美国薄荷的繁殖效率，且成活率高。
[0006]具体的，本专利技术的技术方案如下：第一方面，本专利技术提供了一种拟美国薄荷组培繁殖方法，包括外植体的消毒，以及对消毒后的外植体进行诱导培养，所述外植体选择生长20
‑
60天的枝条；所述诱导培养在诱导培养基中进行，所述诱导培养基以MS培养基为基础培养基，添加0.05
‑/>0.15mg/L的6
‑
BA和0.05
‑
0.15mg/L的NAA。
[0007]现有的拟美国薄荷组织培养多采用无菌播种后长大的无菌苗作为培养材料，由于种子小不易消毒且消毒后的种子发芽率低，污染率高、死亡率高，从而导致繁殖效率低。本专利技术发现，不同来源的外植体会直接影响拟美国薄荷组织培养的最终结果。
[0008]本申请选择拟美国薄荷的幼嫩枝条作为外植体进行组织培养，一方面，相较选择拟美国薄荷其他部位作为外植体进行组织培养，幼嫩枝条取材对于母株的生长有促进作用，更加有利于母株的复壮，在组织培养中有助于母株的重复利用，从而提高组织培养的繁殖效率，降低组织培养的成本；另一方面，幼嫩枝条的组织细胞分裂活动旺盛，发育良好，相较于其他来源的外植体，在组织培养中表现出更高的诱导率和成功率，同时能够有效缩短组织培养过程中的诱导周期，提高增殖系数和生根率。且在诱导不定芽及不定芽增殖时，采用腋芽萌发直接形成不定芽的方法进行增殖，相较于采用其他部位的其他诱导方式得到的分化苗更加健壮，且能稳定遗传母本特性，不易变异。
[0009]在本专利技术中，所述外植体选择母株茎段顶部生长健壮且无病虫害的幼嫩枝条，所
述幼嫩枝条在母株上的生长期为20
‑
60天。
[0010]相较于生长期小于20天的幼嫩枝条，本专利技术所选枝条组织厚实，对各类消毒剂的耐受能力较强，可通过延长消毒时间来降低外植体的污染率，且延长消毒时间对枝条造成的负面影响较小，存活率明显升高。而生长期大于60天的老枝条存在纤维化加重、叶片细胞代谢活动减弱的问题，且不容易消毒，污染率较高，诱导成功率明显下降，诱导时间长，增殖系数降低，且存在植物生理紊乱失调、产生畸形等问题。添加较高浓度的细胞分裂素和生长素虽然能在一定程度上缩短诱导时间，但会产生更为严重的植物生理紊乱失调情况，且会增加生成成本。本专利技术所选生长期为20
‑
60天的幼嫩枝条，其细胞代谢活动旺盛、分裂能力强，枝条内各类激素浓度较高，在使用较低浓度的细胞分裂素和生长素即可成功诱导出不定芽，可有效避免因各类激素过高引起的玻璃化及其他不良反应。且生长期为20
‑
60天的幼嫩枝条自身存在时间较短，受外界干扰较小，有助于降低拟美国薄荷组织培养的污染率。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述茎段顶部的幼嫩枝条在母株上的生长期可以为20天、40天、60天。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述茎段顶部的幼嫩枝条在母株上的生长期可以为20
‑
40天。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述茎段顶部的幼嫩枝条在母株上的生长期可以为40
‑
60天。
[0014]优选的，所述幼嫩枝条为母株上生长期为20
‑
40天的枝条。
[0015]以上述幼嫩枝条为外植体进行拟美国薄荷的组织培养，能够有效提高拟美国薄荷的繁殖效率和成活率，降低季节对拟美国薄荷生产的限制，促进拟美国薄荷的推广应用。
[0016]除了外植体的选取，诱导培养基的成分，尤其是激素的种类和浓度，也对拟美国薄荷组织培养的最终结果有直接且重要的影响。
[0017]本专利技术发现，较低浓度的植物激素组合对拟美国薄荷幼嫩枝条的诱导效果更好。低浓度的6
‑
BA有助于促进拟美国薄荷外植体细胞分裂；低浓度的NAA有助于促进拟美国薄荷细胞生长伸长及细胞分裂。
[0018]进一步的，当诱导培养基中包含0.05
‑
0.15mg/L的6
‑
BA和0.05
‑
0.15mg/L的NAA时，拟美国薄荷的外植体细胞得到了更好的增殖和扩大效果，外植体上的腋芽可在较短时间内诱导萌发伸长形成不定芽，且不定芽生长健壮，无褐化，无玻璃化。另外，上述低浓度的6
‑
BA和NAA组合还有助于降低外植体的死亡率，相较其他的激素浓度或激素组合，具有明显优势。优选的，所述诱导培养基中包含0.05
‑
0.1mg/L的6
‑
BA和0.1mg/L的NAA。进一步的，在本专利技术所述诱导培养基中，所述6
‑
BA和所述NAA的用量比例优选为（0.8
‑
1.2）:1，更优选为1:1。
[0019]当6
‑
BA和NAA的用量比小于上述范围时，以幼嫩枝条外植体诱导的不定芽在后续培养中表现较差，增殖系数较低，且获得的分化苗长势一般，植株稍弱。当6
‑
BA和NAA的用量比大于上述范围时，获得的不定芽及分化苗玻璃化严重。
[0020]在本专利技术更优选的实施方式中，所述诱导培养基中包含0.1mg/L的6
‑
BA和0.1mg/L的NAA。
[0021]本专利技术所述诱导培养基中优选不添加2,4
‑
D。本专利技术发现，添加2,4
‑
D容易使诱导的不定芽玻璃化，且容易导致不定芽在后续发育过程中生理紊乱失调，出现畸形。不添加2,
4
‑
D的诱导培养基对外植体的不定芽诱导效果更好。
[0022]本专利技术所述诱导培养基中优选不添加TDZ。本专利技术发现，添加TDZ容易使诱导的不定芽玻璃化，不添加TDZ的诱导培养基对外植体的不定芽诱导效果更好。
[0023]在本专利技术中，所述诱导培养的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.拟美国薄荷组培繁殖方法，包括外植体的消毒，以及对消毒后的外植体进行诱导培养，其特征在于，所述外植体选择生长20
‑
60天的枝条；所述诱导培养在诱导培养基中进行，所述诱导培养基以MS培养基为基础培养基，添加0.05
‑
0.15mg/L的6
‑
BA和0.05
‑
0.15mg/L的NAA。2.根据权利要求1所述拟美国薄荷组培繁殖方法，其特征在于，所述6
‑
BA和所述NAA的用量比例为（0.8
‑
1.2）:1。3.根据权利要求1或2所述拟美国薄荷组培繁殖方法，其特征在于，所述诱导培养的光照时间为8
‑
10h/天，光照强度为1500
‑
1800Lux；和/或，所述诱导培养的温度为23
‑
27℃。4.根据权利要求1或2所述拟美国薄荷组培繁殖方法，其特征在于，所述外植体选择生长35
‑
45天的枝条；所述外植体的消毒依次包括新洁尔灭消毒、酒精消毒和次氯酸钠消毒。5.根据权利要求4所述拟美国薄荷组培繁殖方法，其特征在于，所述次氯酸钠消毒采用0.95%
‑
1.05%的次氯酸钠溶液消毒处理14
‑
16min。6.根据权利要求1或2所述拟美国薄荷组培繁殖方法，其特征在于，还...

【专利技术属性】
技术研发人员：高丽，林巧玲，杨聪儿，辛培培，刘小妹，王红梅，周莉，马硕，赵芮，孙鑫，
申请(专利权)人：北京花乡花卉科技研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：