一种俄罗斯蒲公英遗传转化方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种俄罗斯蒲公英单遗传转化方法及应用，包括俄罗斯蒲公英外植体预培养、侵染、共培养、恢复培养、筛选培养、生根培养等步骤。本发明专利技术能够最终筛选出再生能力强，分化效率高的俄罗斯蒲公英种质，建立了一个简单高效的遗传转化方法，可在2

【技术实现步骤摘要】
rubber latex[J].International journal of molecular sciences,2020,21(15):5282.

技术实现思路

[0010]针对现有技术的至少一个缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种俄罗斯蒲公英高效的遗传转化方法及应用，利用俄罗斯蒲公英叶片作为外植体，建立了一套简单高效的遗传转化系统，成功将外源基因RUBY和GUS成功转入俄罗斯蒲公英中，转化效率高且稳定，诱导分化出来的不定芽出芽率高，生长状态良好。
[0011]为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种俄罗斯蒲公英单遗传转化方法，包括以下步骤：
[0012]S1：俄罗斯蒲公英外植体预培养：挑选长势良好的俄罗斯蒲公英叶片，进行切割和灭菌处理后作为外植体，预培养3天；
[0013]S2：侵染：取步骤S1中预培养的外植体放入预先制备好的侵染液中，28℃，220rpm培养30min，从侵染液中取出外植体，将叶片表面的侵染液用无菌滤纸吸干；
[0014]S3：共培养：待步骤S2中的外植体表面菌液干透后，将叶片置于共培养基中培养3天本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种俄罗斯蒲公英单遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：俄罗斯蒲公英外植体预培养：挑选长势良好的俄罗斯蒲公英叶片，进行切割和灭菌处理后作为外植体，预培养3天；S2：侵染：取步骤S1中预培养的外植体放入预先制备好的侵染液中，28℃，220rpm培养30min，从侵染液中取出外植体，将叶片表面的侵染液用无菌滤纸吸干；S3：共培养：待步骤S2中的外植体表面菌液干透后，将叶片置于共培养基中培养3天；S4：恢复培养：将步骤S3中的外植体转入恢复培养基中培养7天；S5：筛选培养：将步骤S4中的外植体转入筛选培养基中，每隔10天更换一次新鲜培养基直至分化出不定芽，所述筛选培养基配方包括：MS盐+30g/L蔗糖+1mg/L KT,0.4mg/L IAA+300mg/L Timentin+10mg/L hygromycin和3g/L植物凝胶，pH 5.8；S6：生根培养：将步骤S5中分化出来的不定芽转入生根培养基中进行生根，每隔7天更换一次新的培养基直至生根，将已生根的不定芽转入新的生根培养基中继续培养，直至成为完整的俄罗斯蒲公英植株。2.如权利要求1所述的俄罗斯蒲公英单遗传转化方法，其特征在于，所述侵染液的制备包括：利用化学转化法将第一双元表达载体和第二双元表达载体转化到农杆菌菌株中，将转化成功的农杆菌菌株在加有相应抗生素的LB固体培养基上进行培养；挑取转化成功的单菌落在含有相同抗生素LB液体培养基中28℃，220rpm振荡培养30
‑
36h；将OD
600
＝0.4
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0.5的菌液5000rpm离心10min，倒掉上清，并用MS+150mM乙酰丁香酮(AS)液体培养基重悬，5000rpm离心10min；倒掉上清，将菌斑用MS+150mM AS液体培养基重悬，并加入等体积液体培养基，配制配制成OD600＝0.3
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：唐朝荣，杨雪，李中华，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：