一种菜心恢复系材料的选育方法技术

本发明专利技术公开了一种菜心恢复系材料的选育方法，属于菜心育种技术领域。该选育方法包括杂交、自交分离：以携带恢复基因的油菜材料为母本，未携带恢复基因的菜心材料为父本，经杂交、自交分离获得F2代植株；分子标记筛选：将获得的F2代植株通过特异性扩增方法筛选出含有恢复基因的F2代植株；再重复回交、自交分离和分子标记筛选6

【技术实现步骤摘要】
一种菜心恢复系材料的选育方法


[0001]本专利技术涉及菜心育种
，特别是涉及一种菜心恢复系材料的选育方法。

技术介绍

[0002]Ogu CMS自出现以来，在油菜、白菜等作物的花期表现出不育性稳定、彻底，不受温度影响等优良特性，广受十字花科雄性不育选育者欢迎。由于Ogu CMS恢复系基因仅在油菜中出现，与菜心的亲缘关系较远，传统的回交育种技术通常为：油菜Ogu CMS恢复系第1次与菜心自交系杂交获得F1代、分离获得大群体F2代，选择一定数量的F2代单株作父本分别与Ogu CMS测交获得杂交种，同时父本自交；测交获得的杂交种进行花期育性调查、花粉活力检测等技术，获得育性恢复单株，即所获得的对应父本为恢复性单株；然后该恢复性单株再与第1次的菜心自交系进行回交，后代继续进行以上操作，至少经过6代回交，筛选出农艺性状与菜心相似，并保留有于Ogu CMS恢复系基因的植株。上述传统选育技术存在诸多缺点：恢复性单株与菜心自交系杂、分离交获得的F2代，选择一定数量的F2单株作父本分别与Ogu CMS测交获得杂交种，获得的后代要在花期进行育性田间检查，生育期较长，且花粉在逆境(特别是低温)条件下，会出现雄蕊退化或花粉发育不正常的现象，不利于恢复性单株的筛选；同时采用传统选育方法人工投入大，需要的时间长，筛选较为困难。
[0003]本专利技术利用分子标记辅助传统选育技术，开发出与恢复基因相关的特异性引物标记，每代的F2代群体不需要选择单株与Ogu CMS测交，直接对F2代单株进行苗期DNA检测，即可确定恢复性单株，再与菜心进行6代回交，获得菜心Ogu CMS恢复系。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种菜心恢复系材料的选育方法，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术利用分子标记技术结合传统育种技术，辅助选育菜心Ogu CMS恢复系，解决了菜心Ogu CMS恢复系选育困难的问题，且显著节约时间人力成本，为菜心恢复系材料的高效选育提供了新途径。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0006]本专利技术提供一种菜心恢复系材料的选育方法，包括以下步骤：
[0007](1)杂交、自交分离：以携带恢复基因的油菜材料为母本，未携带恢复基因的菜心材料为父本，经杂交获得F1代植株，再经自交分离获得F2代植株；
[0008](2)分子标记筛选：将步骤(1)获得的F2代植株通过特异性扩增方法筛选出含有恢复基因的F2代植株；
[0009](3)以步骤(2)筛选出的含有恢复基因的F2代植株为母本，重复步骤(1)
‑
(2)经回交、自交分离和分子标记筛选6
‑
8次进行选育，最终获得菜心恢复系材料。
[0010]进一步地，在步骤(1)中，所述母本为携带Rfo基因的甘蓝型油菜；所述父本为未携带Rfo基因的菜心自交系或菜心Ogu CMS胞质不育系。
[0011]进一步地，所述甘蓝型油菜的的品系包括16C；所述菜心自交系的品种或品系包括
油绿703、油绿702或油绿501；所述菜心Ogu CMS胞质不育系的材料包括玉田2号菜心或玉田3号菜心。
[0012]进一步地，在步骤(2)中，所述分子标记筛选具体为：以所述F2代植株的DNA为模板，利用如SEQ ID NO：1
‑
2所示的引物对进行特异性扩增，若扩增结果显示出特异性条带，则为含有恢复基因的F2代植株。
[0013]进一步地，所述特异性扩增的反应体系为：2μL 10
×
PCR reaction Buffer、1.6μL MgCl2、引物对各1μL、0.15μL Taq酶、0.4μL dNTP、0.5μL模板DNA、ddH2O补充至20μL。
[0014]进一步地，所述特异性扩增的程序为：95℃、3min；94℃、30s，55℃、30s，72℃、40s，33个循环；72℃、8min。
[0015]本专利技术公开了以下技术效果：
[0016]传统选育技术通过恢复性单株与菜心自交系杂、分离交获得的F2代，选择一定数量的F2单株作父本分别与Ogu CMS测交获得杂交种，获得的后代要在花期进行育性田间检查，生育期较长，且花粉在逆境(特别是低温)条件下，会出现雄蕊退化或花粉发育不正常，不利于恢复性单株的筛选，并且传统选育方法人工投入大，耗时长、筛选较为困难。
[0017]本专利技术直接以Ogu CMS恢复性基因的遗传信息为基础，进行特异性引物设计，对F2单株DNA进行扩增，直接筛选出Ogu CMS恢复性单株，再与菜心进行6代回交，获得菜心Ogu CMS恢复系。本专利技术利用分子标记技术结合传统育种技术，辅助选育菜心Ogu CMS恢复系，解决了菜心Ogu CMS恢复系选育困难的问题，同时本专利技术提供的选育方法不需进行F2单株与Ogu CMS测交的步骤，显著节约时间人力成本，为菜心恢复系材料的高效选育提供了新途径。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0019]图1为引物Rfo
‑
F/Rfo
‑
R扩增混合单株DNA的电泳图；其中M是DL5000，1
‑
3分别是16C
×
油绿703、16C
×
油绿702、16C
×
油绿501的F2代单株，4
‑
5分别是玉田2号
×
16C、玉田3号
×
16C的F1代单株，6是油绿702、7是油菜Ogu CMS标样
×
16C的F1代单株，8是ddH2O；
[0020]图2为引物Rfo
‑
F/Rfo
‑
R扩增的单株DNA的电泳图；其中M是DL2000，1
‑
10分别是16C
×
油绿703的10个F2代单株、11
‑
20分别是16C
×
油绿702的10个F2代单株。
具体实施方式
[0021]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0022]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包
括或排除在范围内。
[0023]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种菜心恢复系材料的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)杂交、自交分离：以携带恢复基因的油菜材料为母本，未携带恢复基因的菜心材料为父本，经杂交获得F1代植株，再经自交分离获得F2代植株；(2)分子标记筛选：将步骤(1)获得的F2代植株通过特异性扩增方法筛选出含有恢复基因的F2代植株；(3)以步骤(2)筛选出的含有恢复基因的F2代植株为母本，重复步骤(1)
‑
(2)经回交、自交分离和分子标记筛选6
‑
8次进行选育，最终获得菜心恢复系材料。2.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述母本为携带Rfo基因的甘蓝型油菜；所述父本为未携带Rfo基因的菜心自交系或菜心Ogu CMS胞质不育系。3.根据权利要求2所述的选育方法，其特征在于，所述甘蓝型油菜的品系包括16C；所述菜心自交系的品种包括油绿703、油绿702或油绿50...

【专利技术属性】
技术研发人员：李光光，江定，张华，郑岩松，
申请(专利权)人：广州市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：