一种晚期糖基化终末产物的富集方法和检测方法技术

本发明专利技术涉及一种晚期糖基化终末产物的富集方法和检测方法，属于化学检测技术领域。本发明专利技术的晚期糖基化终末产物的富集方法，采用磁固相萃取剂对含晚期糖基化终末产物的液体样品中的晚期糖基化终末产物进行磁固相萃取，可实现晚期糖基化终末产物的选择性高效富集，磁固相萃取剂具有高孔隙率、低晶体密度、大的比表面积、良好的结构稳定性，可通过外部磁铁与样品溶液快速分离，具有操作简单、萃取时间短、低溶剂消耗等优点，可克服固相萃取柱成本高以及过柱子操作过程复杂等问题。及过柱子操作过程复杂等问题。及过柱子操作过程复杂等问题。

【技术实现步骤摘要】
一种晚期糖基化终末产物的富集方法和检测方法


[0001]本专利技术涉及一种晚期糖基化终末产物的富集方法和检测方法，属于化学检测


技术介绍

[0002]晚期糖基化终末产物(Advanced glycosylation end products，AGEs)是蛋白质、氨基酸等大分子物质在非酶促条件下经美拉德反应形成的化学危害产物。已有研究表明，人体内AGEs的积累与多种疾病的发生密切相关，如糖尿病慢性并发症、衰老、动脉粥样化、高血压、老年痴呆症等。富含碳水化合物、脂肪和蛋白质的食品在热加工过程中容易产生AGEs，如烘焙食品，是膳食中公认的AGEs的重要来源，其中羧甲基赖氨酸(Nε
‑
(carboxymethyl)lysine，CML)和羧乙基赖氨酸(Nε
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(carboxyethyl)lysine，CEL)是2种典型的AGEs，其含量常被用作食品中AGEs生成的指标。目前检测AGEs的主要方法有酶联免疫法(ELISA)、液相色谱
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荧光检测器法(HPLC
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FL)、气相色谱
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质谱联用法(GC
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MS)、液相色谱
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质谱联用法(HPLC
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MS/MS)等。酶联免疫法(ELISA)虽然简单，但缺乏选择性和非特异性，可能会出现假阳性或导致实验结果过高；液相色谱
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荧光检测器法(HPLC
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FL)在分析食品中AGEs含量时，通常采用衍生化试剂邻苯二甲醛或芴甲氧羰酰氯(FMOC
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Cl)对样品进行柱前衍生，但定性准确度和定量灵敏度有限；气相色谱
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质谱联用法(GC
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MS)具有较高灵敏度和定性准确性，但同样需要采用衍生化反应后再进行定量分析。液相色谱
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质谱联用法(HPLC
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MS/MS)的仪器灵敏度更高，定性更准确，然而由于CML和CEL的极性和水溶性较强，直接进样分析存在基质效应较强，色谱分离度较低等问题。采用FMOC
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Cl对烘焙食品中羧甲基赖氨酸(CML)和羧乙基赖氨酸(CEL)进行衍生化反应后再采用HPLC
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MS/MS分析，能有效降低基质效应。然而，由于食品基质非常复杂，存在很多蛋白质等大分子化合物，晚期糖基化终末产物极性强，含量低，为了实现烘焙食品中糖基化终末产物的选择性高效富集，通常需采用固相萃取的方法对样品进行净化处理。商品化的固相萃取柱存在比表面积和吸附容量有限、吸附选择性性能不佳、成本高以及过柱子操作过程复杂等问题。因此，亟需开发一种晚期糖基化终末产物的富集方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种晚期糖基化终末产物的富集方法，可解决目前采用商品化的固相萃取柱对晚期糖基化终末产物进行富集时存在吸附容量有限、吸附选择性性能不佳的问题。
[0004]本专利技术的另一个目的在于提供一种晚期糖基化终末产物的检测方法。
[0005]为了实现以上目的，本专利技术的晚期糖基化终末产物的富集方法所采用的技术方案为：
[0006]一种晚期糖基化终末产物的富集方法，包括以下步骤：将含晚期糖基化终末产物的液体样品和磁固相萃取剂混合，进行固相萃取，然后固液分离，再将固液分离所得固体采
用洗脱剂进行洗脱，得到含晚期糖基化终末产物的富集液，干燥后得到富集物；所述磁固相萃取剂包括磁性纳米颗粒和修饰在所述磁性纳米颗粒表面的共价有机框架材料，所述共价有机框架材料主要由2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛和4,4
”‑
二氨基三联苯经席夫碱缩合反应制得。
[0007]本专利技术的晚期糖基化终末产物的富集方法，采用磁固相萃取剂对含晚期糖基化终末产物的液体样品中的晚期糖基化终末产物进行磁固相萃取，可实现晚期糖基化终末产物的选择性高效富集，磁固相萃取剂具有高孔隙率、低晶体密度、大的比表面积、良好的结构稳定性，可通过外部磁铁与样品溶液快速分离，具有操作简单、萃取时间短、低溶剂消耗等优点，可克服固相萃取柱成本高以及过柱子操作过程复杂等问题。
[0008]优选地，所述磁性纳米颗粒为氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒。优选地，所述氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒的平均粒度为50～100nm。例如，所述氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒的平均粒度为50nm。
[0009]优选地，所述氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒由包括以下步骤的方法制得：将铁盐、乙酸盐和二元胺类化合物在醇类溶剂中于不低于200℃下反应不少于6h，固液分离，洗涤，干燥后得到氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒。优选地，所述铁盐为氯化铁和/或氯化铁的水合物。优选地，所述乙酸盐为乙酸碱金属盐。优选地，所述二元胺类化合物为丁二胺、戊二胺、己二胺中的一种或任意组合。优选地，所述己二胺为1,6
‑
己二胺。优选地，所述醇类溶剂为二元醇类溶剂。优选地，所述二元醇类溶剂选自乙二醇、丙二醇、丁二醇中的一种或任意组合。
[0010]优选地，所述磁固相萃取剂由包括以下步骤的方法制得：
[0011](1)将2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛和磁性纳米颗粒在溶剂中混合反应；
[0012](2)向步骤(1)中反应后的体系中加入4,4
”‑
二氨基三联苯，继续混合反应，固液分离，洗涤后得到磁固相萃取剂。
[0013]制备磁固相萃取剂时，先将2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛和磁性纳米颗粒混合，可以使2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛中的醛基和磁性纳米颗粒表面的氨基发生反应而结合在磁性纳米颗粒上，然后再与4,4
”‑
二氨基三联苯反应，得到修饰在磁性纳米颗粒表面的共价有机框架材料。
[0014]优选地，步骤(1)中，每0.3mmol的2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛对应采用的磁性纳米颗粒的质量为0.8～0.105g。
[0015]优选地，步骤(1)中，每0.3mmol的2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛对应采用的溶剂的体积为10～40mL。
[0016]优选地，步骤(1)中，所述溶剂为醇类溶剂。例如，所述溶剂为乙醇。
[0017]优选地，步骤(1)中，所述混合反应的温度为50～80℃。
[0018]优选地，步骤(1)中，所述混合反应的方法包括以下步骤：将2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛和磁性纳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种晚期糖基化终末产物的富集方法，其特征在于，包括以下步骤：将含晚期糖基化终末产物的液体样品和磁固相萃取剂混合，进行固相萃取，然后固液分离，再将固液分离所得固体采用洗脱剂进行洗脱，得到含晚期糖基化终末产物的富集液，干燥后得到富集物；所述磁固相萃取剂包括磁性纳米颗粒和修饰在所述磁性纳米颗粒表面的共价有机框架材料，所述共价有机框架材料主要由2,4,6
‑
三羟基
‑
1,3,5
‑
苯三甲醛和4,4
”‑
二氨基三联苯经席夫碱缩合反应制得。2.如权利要求1所述的晚期糖基化终末产物的富集方法，其特征在于，所述磁性纳米颗粒为氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒。3.如权利要求2所述的晚期糖基化终末产物的富集方法，其特征在于，所述氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒的平均粒度为50～100nm。4.如权利要求3所述的晚期糖基化终末产物的富集方法，其特征在于，所述氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒由包括以下步骤的方法制得：将铁盐、乙酸盐和二元胺类化合物在醇类溶剂中于不低于200℃下反应不少于6h，固液分离，洗涤，干燥后得到氨基功能化Fe3O4磁性纳米颗粒。5.如权利要求4所述的晚期糖基化终末产物的富集方法，其特征在于，所述铁盐为氯化铁和/或氯化铁的水合物；所述乙酸盐为乙酸碱金属盐；所述二元胺类化合物为丁二胺、戊二胺、己二胺中的一种或任意组合；所述醇类溶剂为二元醇类溶剂；所述二元醇类溶剂选自乙二醇、丙二醇、丁二醇中的一种或任意组合。6.如权利要求2
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5中任一项所述的晚期糖基化终末产物的富集方法，其特征在于，所述磁固相萃取剂由包括以下步骤的方法制得：(1)将2,4,6
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三羟基
‑
1,3,5
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苯三甲醛和磁性纳米颗粒在溶剂中混合反应；(2)向步骤(1)中反应后的体系中加入4,4
”‑
二氨基三联苯，继续混合反应，固液分离，洗涤后得到磁固相...

【专利技术属性】
技术研发人员：余晶晶，刘瑞红，蔡君兰，刘克建，王冰，陈满堂，赵晓东，刘雨，谢复炜，刘绍锋，
申请(专利权)人：中国烟草总公司郑州烟草研究院，
类型：发明
国别省市：