一种软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记及其特异性引物对M3制造技术

本发明专利技术属于分子生物学及遗传育种技术领域，公开了一种用于软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记及其特异性引物对M3，引物序列如SEQ ID NO.1和2所示，分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。利用本发明专利技术提供的特异性引物能够快速准确地区分软枣猕猴桃的雌株和雄株，对软枣猕猴桃的性别进行鉴定。由于软枣猕猴桃属于雌雄异株，童期漫长，需要5~7年才能分辨性别。利用该特异性引物对软枣猕猴桃早期幼苗的性别鉴定能够大量节约育种成本，并且操作简单，成本低廉，稳定性好，具有很大的应用潜力和较高的经济价值。的经济价值。

【技术实现步骤摘要】
一种软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记及其特异性引物对M3


[0001]本专利技术属于分子生物学及遗传育种领域，具体涉及一种软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记及其特异性引物对M3。

技术介绍

[0002]猕猴桃(Actinidia)因其风味独特、营养丰富深受消费者喜爱。软枣猕猴桃(Actinidia arguta)则是猕猴桃属近年来中发展最为迅速的新兴栽培品种。软枣猕猴桃果实大小与枣相似，果皮光滑可食用，具有丰富的膳食纤维、维生素、多糖等营养价值。另外，它也是一种药食同源的植物，对缓解便秘、高血压、高血脂等慢性疾病都有很好的效果。猕猴桃属植物都属于雌雄异株，但是作为果树类经济作物，雄株的培育价值和生产需求要远远小于雌株。尤其在育种过程中，实生后代漫长的童期(5
‑
7年)使得育种家因为无法快速分辨幼苗的性别而对无法结果的雄株投入大量的人力物力等育种成本，造成了资源的浪费。因此，开发用于软枣猕猴桃幼苗早期性别鉴定的标记或方法迫在眉睫。
[0003]已有研究人员在猕猴桃属中尝试开发性别鉴定的分子标记，例如申请号为2014105250145、201410524999X、2014105230438、202010136148、202110969916的相关技术，但是这些技术主要适用于猕猴桃属内的其他物种或中间杂交群体。软枣猕猴桃由于其自身复杂的倍性和遗传背景并没有很好的通用性，难以满足软枣猕猴桃育种工作的需求。因此，开发一种针对软枣猕猴桃早期性别鉴定的方法辅助软枣猕猴桃育种具有重要的现实意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种软枣猕猴桃性别鉴定的特异性分子标记及其引物对M3，能够在软枣猕猴桃幼苗期或非开花挂果期快速地将雄性和雌性软枣猕猴桃植株区分开来，操作简单，重复性好，准确度高。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]专利技术人收集了不同地理来源的88份软枣猕猴桃种质资源作为实验材料，通过对这些样品进行全基因组重测序，比对参考基因组，SNP筛选以及与性别的全基因组关联分析，得到了可能的性别关联位点，结合基因注释结果，在软枣猕猴桃雌、雄样本差异区段设计特异性引物，开发雌雄性别鉴定的特异标记。
[0007]一种用于软枣猕猴桃性别鉴定的试剂盒，所述试剂盒含有用于扩增SEQ ID NO.3所示分子标记的引物对，引物对序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。
[0008]用于软枣猕猴桃性别鉴定的引物对，所述引物对可扩增SEQ ID NO.3所示分子标记，利用所述的引物在雄性软枣猕猴桃中可扩增出DNA条带，在雌性软枣猕猴桃中无法扩增出DNA条带，引物对序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。
[0009]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的分子标记可将软枣猕猴桃雄性植株和雌性植株准确区分开，操作简单、重现性好、准确度高，有效克服软枣猕猴桃植株童期用表型鉴
定方法无法准确鉴定区分软枣猕猴桃性别的缺点。
附图说明
[0010]图1为实施例2中利用本专利技术提供的分子标记引物对M3在软枣猕猴桃雌性和雄性样本中扩增出的PCR产物的电泳结果图。
具体实施方式
[0011]本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业或公开的渠道。
[0012]实施例1：用于软枣猕猴桃性别鉴定的分子标记引物的获得
[0013]申请人收集了不同地理来源的88份软枣猕猴桃种质资源作为实验材料，其中雄株40个，雌株48个。利用改良的CTAB法对收集到的种质提取基因组DNA，然后利用Illumina测序技术平台进行全基因组重测序。将测序得到的二代短序列数据过滤后比对到软枣猕猴桃的参考基因组进行单核苷酸多态性(SNP)检测和筛选并与性别进行全基因组关联分析，得到了可能的性别关联区域。根据雌雄群体在性别关联区域的二代数据覆盖深度差异，对位于性别关联区域内的差异区域的基因设计大片段引物，开发雌雄性别鉴定的特异性标记。最终得到软枣猕猴桃雄性特异性分子标记引物M3可准确鉴定出软枣猕猴桃雄性和雌性植株。
[0014]用于PCR扩增软枣猕猴桃雄性特异性分子标记的引物对M3，其正向引物序列为:5'
‑
TGACTGAGGGAGTGGACGAAT
‑
3'，如序列表中SEQ ID NO.1所示；反向引物序列为:5'
‑
ATGGCACGCTAGATCAAGGAC
‑
3'，如序列表中SEQ ID NO.2所示。扩增出的特异性分子标记的序列如SEQ ID NO.3所示，长度为929bp。
[0015]实施例2：分子标记引物在软枣猕猴桃早期性别鉴定中的应用
[0016](1)按照改良的CTAB法提取48个软枣猕猴桃植株样品的DNA，其中雄株24个，雌株24个，用1.2％琼脂糖凝胶电泳和Nanodrop分光光度计检测DNA质量和浓度，将DNA浓度稀释为25ng/μL备用；
[0017](2)PCR反应体系按20μL计为：
[0018]DNA模板(25ng/μL)2μL引物F(10μM)1μL引物R(10μM)1μL2x Taq PCR Mix预混液10μL无菌水6μL
[0019]PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环；最后72℃延伸10min，10℃保存。得到的PCR产物在1.2％的琼脂糖凝胶电泳分离。
[0020]利用引物对M3扩增软枣猕猴桃雄性和雌性样本的PCR产物的电泳结果如图1所示，雄性样本中含有特异性分子标记，在929bp出现DNA条带，雌性样本中在929bp未出现条带。
[0021]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本专利技术作了详尽的描述，但在本专利技术基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本专利技术精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本专利技术要求保护的范围。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分子标记在软枣猕猴桃性别鉴定中的应用，其特征在于，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，雄性软枣猕猴桃中含有所述的分子标记，雌性软枣猕猴桃中不含有所述的分子标记。2.一种用于软枣猕猴桃性别鉴定的试剂盒，其特征在于，含有用于扩增权利要求1所述分子标记的引物对。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，引物对序列如SEQ ID NO....

【专利技术属性】
技术研发人员：王彦昌，鲁雪梅，满玉萍，雷瑞，姜正旺，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：