异天冬氨酸的检测方法技术

本文披露了处理蛋白质和检测蛋白质中的异天冬氨酸(isoAsp)的方法。还披露了被配置用于处理蛋白质和检测蛋白质中的isoAsp的质谱系统。系统。系统。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】异天冬氨酸的检测方法
[0001]相关申请的交叉引用以及通过引用并入以电子方式提交的材料
[0002]本申请要求2020年10月1日提交的美国临时专利申请号63/086,557和2021年7月2日提交的美国临时专利申请号63/218,186的优先权，将其通过引用以其全文特此并入
[0003]本申请连同电子格式的序列表一起提交。序列表作为名为“55797_Seqlisting.txt”的文件提供，该文件创建于2021年9月20日，并且大小为7,091字节。将电子格式的序列表的信息通过引用以其全文并入本文。

技术介绍

[0004]蛋白质翻译后修饰(PTM)如精氨酸甲基化1、磷酸化2、泛素化3、糖基化4‑5和O
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连接的β
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N
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乙酰氨基葡萄糖修饰6‑7在细胞生物学中发挥的功能现在已经得以很好地确立。蛋白质也可以发生自发的化学降解，在老化后或在应激条件下可容易检测到9。当前文献包含许多关于在细胞蛋白质和生物治疗剂二者中鉴定的此类化学修饰的表征的研究
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种处理蛋白质的方法，该方法包括：(a)将蛋白质消化为肽，(b)对这些肽进行质谱，并通过质谱测量isoAsp N端肽键的碎裂；(c)将该碎裂与阈值进行比较，其中该碎裂超过该阈值指示该蛋白质中存在该isoAsp；和(d)拒绝包含该isoAsp的蛋白质，或工程化该蛋白质以去除该isoAsp。2.如权利要求1所述的方法，该方法还包括在(b)之前减少电荷。3.如权利要求1或2所述的方法，其中在(b)中进行质谱的这些肽带单电荷。4.如权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中该碎裂被测量为b系列峰、y系列峰或两者。5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该质谱是基质辅助激光解吸/电离飞行时间/飞行时间(MALDI
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TOF/TOF)。6.如权利要求2
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5中任一项所述的方法，其中该质谱是液相色谱
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质谱/质谱(LC
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MS/MS)。7.如权利要求6所述的方法，其中该LC
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MS/MS包括电喷雾电离。8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中(a)包括热降解。9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中(a)包括用蛋白水解酶进行酶消化。10.如权利要求9所述的方法，其中该蛋白水解酶包括胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或弹性蛋白酶中的至少一种。11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在该蛋白质的氨基酸序列中该isoAsp不与天冬酰胺相邻和/或在该蛋白质的氨基酸序列中该isoAsp不与苏氨酸相邻。12.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中在该蛋白质的氨基酸序列中该isoAsp与相邻的天冬氨酸残基相邻。13.如权利要求12所述的方法，其中该相邻的天冬氨酸是isoAsp或L
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Asp。14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中当isoAsp N端的碎裂肽键的b峰和/或y峰存在时，该碎裂超过该阈值。15.如权利要求1
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13中任一项所述的方法，其中该阈值为对照肽中L
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Asp N端肽键的碎裂。16.如权利要求15所述的方法，其中该对照肽的肽键的碎裂作为电子存储值提供。17.如权利要求15所述的方法，该方法还包括对该对照肽进行质谱，从而获得该对照肽的肽键的碎裂。18.如权利要求15
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17中任一项所述的方法，其中该对照肽是合成肽。19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该蛋白质是大肽、抗体、抗体片段、抗体融合肽或其抗原结合片段。20.如权利要求19所述的方法，其中该抗体是多克隆或单克隆抗体。21.如前述权利要求中任一项所述的方法，该方法还包括确定该isoAsp在该...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：安进公司，
类型：发明
国别省市：