日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的双重PCR检测引物及方法技术

本发明专利技术涉及一种用于同时检测日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫双重PCR检测方法，包括如下步骤：首先提取日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的DNA及设计两种吸虫的特异性引物，然后进行双重PCR反应体系和反应条件的优化，最终确定最佳的PCR反应体系和反应条件。按照最佳条件进行验证所建立方法的特异性、敏感性以及临床样品检测方法的可行性。此外，本发明专利技术还公开了用于同时检测日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的特异性引物序列。通过试验验证表明本发明专利技术所公开的引物序列可同时鉴定日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫，具有操作简单快速、结果直观、敏感性和特异性高等优点，为日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的流行病学调查及疾病防控奠定基础。虫的流行病学调查及疾病防控奠定基础。虫的流行病学调查及疾病防控奠定基础。

【技术实现步骤摘要】
日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的双重PCR检测引物及方法


[0001]本专利技术涉及农业和动物检疫
，具体涉及一种短肠重盘吸虫和日本重盘吸虫的双重PCR检测方法。此外，本专利技术还涉及用于同时检测短肠重盘吸虫和日本重盘吸虫的引物。

技术介绍

[0002]日本重盘吸虫(Diplodiscus japonicus)和短肠重盘吸虫(Diplodiscus mehrai)均属于重盘科(Diplodiscidae)重盘属(Diplodiscus)，是蛙类肠道内两种重要的寄生虫，在我国蛙类广泛存在，仅在黑龙江省林蛙体内日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的感染率可达14.19％和22.38％，给蛙类养殖业带来巨大的危害。目前，日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的鉴别检测方法主要为形态学鉴定，但由于二者形态极为相似，需要丰富临床经验的科研人员才可以进行区分，且形态学鉴定往往靠人为主观进行判断，容易造成误判。因此，依靠形态学鉴定这两种吸虫受到了很大的局限。
[0003]随着分子生物学技术的发展，PCR技术已广泛应用于病原的快速检测领域。与常规检测技术相比，此种方法不仅本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫的双重PCR检测引物，日本重盘吸虫特异性引物：DJ
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TTTGTAATGATAATGCGATGT
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；短肠重盘吸虫特异性引物：DM
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。2.一种日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫双重PCR检测方法，其特征在于，具体步骤包括如下:(1)日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫基因组DNA的提取；(2)对日本重盘吸虫特异性引物：DJ
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、DJ
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和短肠重盘吸虫特异性引物：DM
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进行反应条件的优化，筛选出最佳的反应体系和反应条件；(3)按照步骤(2)的最佳PCR反应体系和反应条件进行双重PCR扩增特异性验证；(4)按照步骤(3)的最佳PCR反应体系和反应条件进行双重PCR扩增敏感性验证；(5)按照建立的双重PCR方法对临床样品进行可行性验证。3.根据权利要求2所述的日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫双重PCR检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫DNA提取方法为：经形态学鉴定的日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫虫体保存于70％乙醇，利用TIANGEN公司的组织基因组DNA提取试剂盒，按照说明书分别提取两种吸虫的基因组DNA，
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20℃保存备用。4.根据权利要求2所述的日本重盘吸虫和短肠重盘吸虫双重PCR检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：高俊峰，侯美如，梁梦婷，孙云异，陈滢钰，刘雪薇，李犇，安琪，邱鸿宇，张馨慧，王春仁，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：