一种基于CRISPR/Cas12a的新型冠状病毒核酸即时检测体系及其方法技术

本发明专利技术涉及生物化学中核酸检测技术领域，提供了一种基于CRISPR/Cas12a的新型冠状病毒核酸即时检测体系及其方法，包括适用于新型冠状病毒即时检测的恒温扩增引物和CRISPR/Cas12a反应体系，所述恒温扩增引物为针对新型冠状病毒N基因的特异性恒温扩增引物；所述恒温扩增引物为N

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas12a的新型冠状病毒核酸即时检测体系及其方法


[0001]本专利技术涉及生物化学中核酸检测
，尤其涉及一种基于CRISPR/Cas12a的新型冠状病毒核酸即时检测体系及其方法。

技术介绍

[0002]新冠病毒检测方法主要包括核酸检测和抗原抗体检测。抗原抗体检测高效便利，但由于抗体检测存在窗口期的滞后性，抗原检测灵敏度差、准确率低，因此，不能作为早期诊断的方式。核酸检测作为新型冠状病毒感染筛查诊断和病情监测的主要手段，能够检测到处于窗口期的感染者，及早发现感染者。但目前最主要的核酸检测方法是反转录实时荧光定量PCR，该方法由于需要依赖温控精度较高的热循环仪，并且反应必须的变性、退火和延伸步骤使整个扩增检测时间较长(～2h)，难以实现核酸分子的现场快速检测。目前急需一种无需设备、快速且能直接判读的检测方法，可以满足基层医疗、传染病防控、偏远地区医学检验和家庭个性化诊断的需求。
[0003]恒温扩增是在重组酶及其他酶的共同作用下对目标模板进行指数扩增，不需要温度循环，简化了对专业仪器的要求，同时也能够弥补传统本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas12a的新型冠状病毒核酸即时检测体系，其特征在于，所述检测体系包括适用于新型冠状病毒即时检测的恒温扩增引物和CRISPR/Cas12a反应体系；所述恒温扩增引物为针对新型冠状病毒N基因的特异性恒温扩增引物；所述恒温扩增引物为N
‑
F/R，核酸序列如下：编号引物序列(5
’‑3’
)No1 N
‑
F AGGCA GCAGT AGGGG AACTT CTCCT GCTAG AATNo2 N
‑
R TTGGC CTTTA CCAGA CATTT TGCTC TCAAG CTG；所述CRISPR/Cas12a反应体系包括：针对新型冠状病毒N基因的特异性crRNA、CRISPR/Cas12a蛋白和单链DNA报告系统；所述特异性crRNA为N
‑
crRNA1，N
‑
crRNA1的核苷酸序列如下：编号引物序列(5
’‑3’
)UAAUU UCUAC UAAGU GUAGA UCUGC UGCUUNo3 N
‑
crRNA1GACAG AUUGA A；所述单链DNA报告系统包括用于侧流层析试纸条检测的荧光探针F
‑
B，荧光探针F
‑
B为5
’‑
FAM
‑
TTATTATT
‑
Biotin
‑3’
，或用于荧光检测的荧光探针F
‑
Q，荧光探针F
‑
Q为5
’‑
FAM
‑
CCCCCC
‑
BHQ1
‑3’
。2.根据权利要求1所述的一种基于CRISPR/Cas12a的新型冠状病毒核酸即时检测体系，其特征在于，所述侧流层析试纸条包括底板，所述底板上依次粘附有硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫和吸收垫；所述金标垫上包被有被胶体金标记的抗荧光素抗体；所述硝酸纤维素膜上分别包被有链霉亲和素构成的质控线和由山羊抗小鼠IgG抗体构成的检测线。3.根据权利要求2所述的一种基于CRISPR/Cas12a的新型冠状病毒核酸即时检测体系，其特征在于，所述侧流层析试纸条的...

【专利技术属性】
技术研发人员：王铁，杜以晨，刘梅，曾帅，于帆，
申请(专利权)人：天津理工大学，
类型：发明
国别省市：