角鲨烯在提高蜜蜂精子存活率中的应用及精液保存方法技术

本发明专利技术公开了角鲨烯在提高蜜蜂精子存活率中的应用及精液保存方法，通过向精子原液中依次加入缓冲液和角鲨烯，并低温冷藏，即可完成精子保存。本发明专利技术将角鲨烯用于蜜蜂精子的保护过程中，充分利用了角鲨烯在精子保存过程中出色的抗氧化能力，显著提高了精子的活力和存活率；添加0.5mol/L的角鲨烯的精子保存液进行精子保存时，精子体外存活率在保存36h时相较于未添加角鲨烯的精子保存液高出27%。且本发明专利技术保存方法具有工艺简单，易于操作，成本较低的优点；所用的精液保存液中，角鲨烯易于获得，缓冲液的配置方法也较简单，进一步降低了成本，具有较好的应用前景。具有较好的应用前景。具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
角鲨烯在提高蜜蜂精子存活率中的应用及精液保存方法


[0001]本专利技术属于精子保存
，尤其涉及角鲨烯在提高蜜蜂精子活力和存活率中的应用及精液保存方法。

技术介绍

[0002]蜜蜂是一种重要的经济昆虫，同时，蜜蜂也是一种重要的生态昆虫，其为农作物授粉产生很高的生态价值。但是随着生态的破坏和农药大面积的使用等因素，蜜蜂种质资源遭到破坏，保护蜜蜂种质资源越来越引起人们的重视。
[0003]目前，蜜蜂精子通常采用低温冷藏方式进行长时间保存，保存常用的缓冲液主要有改良基辅溶液(柠檬酸钠3.6g、NaHCO
3 0.32g、KCl 0.06g、葡萄糖0.5g、双蒸水100ml)、林格氏溶液(NaCl 0.85g、KCl 0.025g、CaCl
2 0.03g、葡萄糖0.5g、双蒸水100ml)、杰格氏溶液(NaCl 0.7g、KCl 0.025g、葡萄糖0.1g、双蒸水100ml)、洛克溶液(NaCl 0.85g、KCl 0.025g、CaCl
2 0.01g、NaHCO
3 0.01g、葡萄糖0.1g、双蒸水100ml)以及改良生理盐水(NaCl 0.85g、葡萄糖0.5g、双蒸水100ml)等。但是精子在体外保存过程中常常会出现损伤，如氧化损伤、线粒体损伤以及质膜受损等；其中主要的伤害是由氧化应激带来的。如精子活性氧(ROS)是维持精子正常功能所必需的物质，但过量的ROS会积累有害物质，导致精子生理及运动功能受损，活力下降。因此，降低精子因氧化应激所带来的损伤对精子体外保存有着重要的意义。人们常常在缓冲液的基础上加入低温保护剂如甘油、DMSO等，以最大限度的保护精液不受低温以及其他ROS的损伤。但2012年Wegener J.等人针对冷冻保护剂对蜂王生殖健康影响的研究表明冷冻保护剂会减少精子向蜂王受精囊迁移的数量，大大降低授精成功率。
[0004]因此，人们迫切需要寻找一种更加生物性，低毒性，可靠的生物冷冻保护剂，以保证精子活力。这也是对蜜蜂种质资源的保存和遗传的一个巨大推力，具有十分重要的实践经济价值。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的在于将角鲨烯用作生物冷冻保护剂，用于保存蜜蜂精子，提高蜜蜂精子活力和存活率。并进一步提供一种蜜蜂精液的保存方法，解决现有技术精子体外保存过程中，因氧化损伤导致精子活力下降的技术问题。
[0006]为了解决上述问题，本专利技术的技术方案如下：
[0007]角鲨烯在提高蜜蜂精子存活率中的应用。
[0008]一种蜜蜂精液的保存方法，包括以下步骤：
[0009]S1、将蜜蜂精子原液与缓冲液混合得到精子混合液；其中，精子原液和缓冲液的体积百分比为1：1；
[0010]S2、将角鲨烯加入精子混合液中，混合均匀后得到精子保存液，密封后置于4℃下保存；其中，角鲨烯在精子保存液中的浓度为0.5mol/L
‑
1mol/L；
[0011]优选的，角鲨烯在精子保存液中的浓度为0.5mol/L。
[0012]进一步，所述蜜蜂精子原液由蜜蜂精液与蒸馏水按体积百分比1：1混合而成。
[0013]进一步，所述缓冲液，按质量百分比计，由如下组分配制而成：二水柠檬酸三钠3.6％、氯化钾0.06％、碳酸氢钠0.32％、葡萄糖0.5％，余量为蒸馏水。
[0014]相比现有技术，本专利技术具有如下有益效果：
[0015]1、本专利技术首次提出将角鲨烯用于提高精子保存过程中的活力和存活率，且将角鲨烯用于蜜蜂精子的保护过程中，充分利用了角鲨烯在精子保存过程中出色的抗氧化能力，显著提高了精子的活力和存活率；添加0.5mol/L的角鲨烯的精子保存液进行精子保存时，精子体外存活率在保存36h时相较于未添加角鲨烯的精子保存液高出27％。
[0016]2、本专利技术蜜蜂精液的保存方法，通过向精子原液中依次加入缓冲液和角鲨烯，并低温冷藏，即可完成精子保存。工艺简单，易于操作，成本较低；且所用的精液保存液中，角鲨烯易于获得，缓冲液的配置方法也较简单，进一步降低了成本，具有较好的应用前景。
附图说明
[0017]图1为本专利技术实施例1、2和对比例1的精子体外存活率
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时间折线图。
具体实施方式
[0018]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明。
[0019]本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0020]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0021]本专利技术中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0022]本专利技术中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过购买或已知的方法合成。
[0023]本专利技术中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
[0024]首先，本专利技术创造性地提出角鲨烯在提高蜜蜂精子活力和存活率中的应用。
[0025]其中，角鲨烯是通过GC
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MS技术从雄蜂精囊中鉴定而来，是一种具有抗衰老、抗癌作用的无毒性的强化剂。在其他比如微生物、植物种籽、微藻、鲨鱼肝脏及人体皮脂中被证明具有提高缺氧耐受力功能、抑制微生物生长、抗菌消炎、调节胆固醇代谢等生物活性功效。本专利技术将角鲨烯用于蜜蜂精液保存，旨在为精液存储提供一种新的保护物质，减少因保护剂带来的精液活力损伤，从而避免对蜂王生殖健康力产生影响。
[0026]进一步，本专利技术还提供了运用角鲨烯进行精液保存的方法。
[0027]一、实施例
[0028]实施例1
[0029]一种蜜蜂精液的保存方法，包括以下步骤：
[0030](1)配制精液保存液
[0031]配制缓冲液：称取二水柠檬酸三钠3.6g、氯化钾0.06g、碳酸氢钠0.32g以及葡萄糖0.5g，用蒸馏水溶解后，转入100mL容量瓶中，并用蒸馏水定容至100mL；该缓冲液pH为8.0，偏碱性，与蜂王受精囊内部环境PH值相似，更有利于精液的保存。其中，二水柠檬酸三钠具有良好的pH调节及缓冲性能，氯化钾及碳酸氢钠起到了平衡缓冲液pH的作用，葡萄糖为供应能量的主要物质。
[0032]配制角鲨烯溶液：将购自上海麦克林生化科技有限公司的角鲨烯，用蒸馏水稀释至1mol/L和2mol/L。
[0033]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.角鲨烯在提高蜜蜂精子存活率中的应用。2.一种蜜蜂精液的保存方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将蜜蜂精子原液与缓冲液混合得到精子混合液；其中，精子原液和缓冲液的体积百分比为1：1；S2、将角鲨烯加入精子混合液中，混合均匀后得到精子保存液，密封后置于4℃下保存；其中，角鲨烯在精子保存液中的浓度为0.5mol/L
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1mol/L。3.根据权利要求2所述蜜蜂精液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：许金山，燕乐乐，吴平，唐相友，宋华莉，石鹏，
申请(专利权)人：重庆师范大学，
类型：发明
国别省市：