WDR1基因功能表达抑制剂在治疗非小细胞肺癌药物或产品中应用制造技术

本发明专利技术中提供了通过WDR1基因功能表达抑制剂应用到治疗非小细胞肺癌药物或产品中，其中非小细胞肺癌是通过抑制YAP信号通路，或降低YAP磷酸化水平来实现的；还提供WDR1基因功能表达抑制剂过表达WDR1后，还包括使用Y27632抑制剂和/或Blebbistatin抑制剂的处理，能够应用到治疗非小细胞肺癌药物或产品中。本发明专利技术首次提出，通过敲降WDR1能降低YAP的蛋白水平，增加YAP的磷酸化水平，并改变YAP的细胞核

【技术实现步骤摘要】
WDR1基因功能表达抑制剂在治疗非小细胞肺癌药物或产品中应用


[0001]本专利技术属于分子生物学
，特别是涉及WDR1基因功能表达抑制剂在治疗非小细胞肺癌药物或产品中应用。

技术介绍

[0002]肺癌被认为是世界上导致癌症相关死亡最多的疾病。根据美国癌症中心2021年的最新统计报告，肺癌在所有恶性肿瘤中发病率占据第二高位，死亡率则为最高。非小细胞肺癌是肺癌病例中占比高达85％的癌症类型。
[0003]对于早期非小细胞肺癌的临床治疗是放疗与手术切除相结合。尽管前几年在NSCLC的治疗方面取得突破性的进展，但其高转移率，肺癌的术后复发率和化疗药物耐药性仍然是个难题。治疗的成功率和生存率仍然很低，5年生存率仅为21％，这可能是由于缺乏早期诊断、局部扩散或远处转移，多数患者在晚期确诊且没有手术选择。对于大多数NSCLC患者，主要的治疗模式是全身化疗、癌基因靶向治疗或免疫治疗。
[0004]基于NSCLC发病机制的研究而研发的分子靶向药物，包括靶向血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)和胰岛素样生长因子I(IGF
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I)信号转导的药物，但都停留在基础研究阶段。因此迫切需要更加深入地探究非小细胞肺癌发生发展的潜在途径和分子机制，来进行指导药品设计，以降低肺癌引起的死亡率。

技术实现思路

[0005]技术方案：为了解决上述的技术问题，本专利技术深入地探究非小细胞肺癌发生发展的潜在途径和分子机制，首次发现，通过敲降WDR1能降低YAP的蛋白水平，增加YAP的磷酸化水平，并改变YAP的细胞核
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质分布，进而来影响由于YAP信号通路关联的非小细胞肺癌细胞的细胞传递，在这基础上，本专利技术中提出敲降WDR1，也就是通过WDR1基因功能表达抑制剂在治疗非小细胞肺癌药物或产品中应用，具有极好的效果。
[0006]作为本专利技术的另一具体实施方式，WDR1基因功能表达抑制剂在治疗非小细胞肺癌药物或产品中应用。
[0007]作为本专利技术的另一具体实施方式，非小细胞肺癌是通过抑制YAP信号通路，或降低YAP磷酸化水平来实现的。
[0008]作为本专利技术的另一具体实施方式，WDR1基因功能表达抑制剂在降低YAP信号通路药物或产品中应用。
[0009]作为本专利技术的另一具体实施方式，WDR1基因功能表达抑制剂在抑制Hippo信号通路药物或产品中应用。
[0010]作为改进，WDR1基因功能表达抑制剂过表达WDR1后，还包括使用Y27632抑制剂和/或Blebbistatin抑制剂的处理。
[0011]有益效果：本专利技术首次提出，通过敲降WDR1能降低YAP的蛋白水平，增加YAP的磷酸
化水平，并改变YAP的细胞核
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质分布，进而来影响由于YAP信号通路关联的非小细胞肺癌细胞的细胞传递，进而能够治疗非小细胞肺癌，在这基础上，本专利技术中提出通过WDR1基因功能表达抑制剂应用到治疗非小细胞肺癌药物或产品中应用，同时，已经具有极好的效果。
附图说明
[0012]图1为本专利技术WDR1影响YAP的磷酸化和胞质分布。
[0013]A：用A549细胞系构建能够稳定遗传的WDR1敲降细胞系(使用shRNA构建)。Western blotting检测WDR1基因敲降效率。结果显示，shWDR1组的WDR1表达水平显著下调。WDR1的敲降导致总YAP水平显著降低，p
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YAP(S127)和p
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YAP(S397)水平升高。B：Western Blotting分析显示，WDR1基因的下调降低YAP的N/C比值。N(Nucleus)代表胞核蛋白，C(Cytoplasm)代表胞质蛋白；TBP为胞核蛋白的内参蛋白，GAPDH为胞质蛋白的内参蛋白。对蛋白水平进行定量分析，结果显示在相应条带下方。C：进行三次细胞核
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质蛋白分离实验，将蛋白质水平进行定量分析。D：A549
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shCTL和A549
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shWDR1细胞中YAP的免疫荧光染色分析，用YAP抗体和细胞骨架phalloidin抗体对细胞进行染色。细胞核用DAPI染色。E：Western blotting结果显示，转染pCDH
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WDR1质粒的细胞(op WDR1)WDR1表达水平高于转染pCDH
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GFP质粒的细胞(GFP)。结果表明，WDR1过表达增加总YAP的表达，降低p
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YAP(S127)、p
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YAP(S397)。对蛋白表达水平进行相对定量，结果显示在相应条带下方。F：Western blotting结果显示，WDR1过表达增加了YAP的N/C比值。对蛋白表达水平进行相对定量，结果显示在相应条带下方。数据表示为平均值
±
SEM。**P<0.01，***P<0.001。
[0014]图2为本专利技术中WDR1影响YAP的转录活性。
[0015]A：PT
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PCR检测YAP的mRNA水平。B：本研究中使用的Tead报告质粒示意图。GTIIC为Tead结合基序。C：荧光素酶报告基因检测结果。数据表示为平均值
±
SEM。*P<0.05。
[0016]图3为本专利技术细胞骨架张力的破坏影响YAP的磷酸化及N/C比值。
[0017]A：phalloidin的免疫荧光染色。与对照组相比，Y27632和Blebbistatin处理组出现应力纤维断裂，F
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actin呈不均匀和斑片状分布。比例尺＝20μm。B：蛋白质印迹实验。经Y27632和Blebbistatin处理后，A549细胞的YAP总蛋白水平降低，磷酸化的YAP增加。对蛋白表达水平进行相对定量，结果显示在相应条带下方。C：Y27632和Blebbistatin处理组YAP的N/C比值明显低于对照组。对蛋白表达水平进行相对定量，结果显示在相应条带下方。
[0018]图4为本专利技术细胞骨架张力的破坏影响细胞的增殖和迁移。
[0019]A
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B：划痕愈合实验显示，Y27632和blebbistatin抑制A549细胞的迁移。比例尺＝200μm。C：用CCK8试剂盒检测增值，Y27632和blebbistatin对A549细胞的增殖有明显的抑制作用。数据表示为平均值
±
SEM。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
[0020]图5为本专利技术Y27632和Blebbistatin处理阻断了WDR1过表达的A549细胞中增加的YAP信号。
[0021]A：Y27632和Blebbistatin对WDR1表达无影响。B
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C：Y27632和Blebbistatin部分逆转YAP总蛋白表达水平的升本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.WDR1基因功能表达抑制剂在治疗非小细胞肺癌药物或产品中应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，非小细胞肺癌是通过抑制YAP信号通路，或降低YAP磷酸化水平来实现的。3.WDR1基因功能表达抑制剂在降低YAP信号通路药物或产品中应用。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王俊燕，徐瑞丰，王诗萱，袁白银，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：