用乙醇沉淀的菜豆提取物，其应用及制剂制造技术

可通过用水溶液提取菜豆获得的提取物，其特征在于具有活性的α－淀粉酶抑制剂的含量等于或高于１８００ＵＳＰ／ｍｇ（ＨＰＬＣ含量等于或高于１５％ｗ／ｗ），植物血凝素含量范围为１５００－６０００ＨＡＵ／ｇ，以及该提取物的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用乙醇沉淀的菜豆提取物，其应用及制剂专利技术概述本专利技术涉及从菜豆属植物的种子获得的提取物以及其制备方法。 更具体地讲，本专利技术涉及菜豆种子的提取物，其特征在于该提取物中含有确定比例的a-淀粉酶抑制剂和植物血凝素，其可减少来源于食物淀粉 中的葡萄糖的吸收，并且能在重复给药后抑制食欲。现有技术a-淀粉酶抑制剂((xAI)是一种存在于菜豆种子中的糖蛋白类物质，它能 够以一种受到区分的物种依赖性方式抑制动物源性淀粉酶的活性，特别是 人类淀粉酶的活性。该抑制剂是由Marshall和Lauda于1974年首次提纯 发现的(J.Biol.， 250(20)， 8030-8037， 1975)，他们之所以对此感兴趣，是因 为它的胰腺淀粉酶抑制活性能够影响小肠对葡萄糖(由淀粉的酶水解产生) 的吸收，而以上的这些又都为a-淀粉酶抑制剂在饮食行业的潜在应用奠定 了基础。碳水化合物是卡路里的重要来源，并有助于形成个体中的脂肪， 导致个体的肥胖或II型糖尿病。在自然界中，在物种进化的过程中，有时 不能保证食物对生物的足够供给，所以在这种情况下，积累超过机体直接 需求的那部分能量的功能是必须的。遍布于机体不同部位的脂肪细胞是积 累能量的场所之一，这些能量在机体需要可被迅速利用。这种生理学系统 处于内分泌系统及神经系统的精细调控中，它使人类即使处于缺乏食物的 状态下也可以生存更长时间。然而，在工业化国家中，由于食物充足、固 有的生活方式以及遗传的原因，该系统导致不受控制的脂肪能量堆积增加， 从而产生了负面后果，例如，影响美观和心血管系统的超负荷运转。最主 要的问题是肥胖，这在有些国家例如美国日趋普遍。肥胖已成为导致心血管疾病、高血压和糖尿病的主要原因。超重在男性与女性中都普遍存在， 造成个体摄入的食物数量越来越多，其结果是健康的恶化。由于高血糖可 增加能量的堆积，因此获得可以减少葡萄糖吸收的物质就变的十分重要。世界范围内对减肥物质的需求，促进了对防止进行性体重积累的食物 的研究。很久以来，人们就已经发现在多种豆类和谷物中存在a-淀粉酶抑制 剂，在最近几年中人们已经开始了针对这一方向的临床试验，并得到了一 系列不确定的结果。根据浓缩和分离这种抑制剂所用的不同制备方式，可 以得到互相矛盾的试验结果，许多商品化制剂显示其在体内缺乏有效的活 性。才艮才居Layer, Carlson和Di Magno的首次研究成果(Gastroenterology， 88(6): 1895， 1902， 1985)显示，这个问题似乎是因为在高度不纯的制剂中抑 制剂被高度的稀释；事实上，当将纯化的抑制剂制品直接注入到小肠内腔 时，它对a-淀粉酶是有活性的。很久以来，人们便已发现某些种子和豆类含有某些物质，当在未完全 煮熟的情况下食用时，这些物质可能产生毒性或者可以减少正常饮食。事 实上，a-淀粉酶抑制剂并不是单独出现在提取物中，而是在茱豆中常伴随 大量的植物血凝素存在，这些植物血凝素具有毒性。自然剂量下的植物血 凝素的毒性通常是较高的。植物血凝素同a-淀粉酶抑制剂一样为糖蛋白类 物质，高剂量的植物血凝素可以导致增生，肥大以及胰腺功能增强。已知 植物血凝素在相对高剂量时可以导致胰腺的增大，因而增加聚胺物质的积 累和酶的分泌。这些糖蛋白自肠内通过并与肠上皮细胞结合，导致胆嚢收 缩素的分泌，胆嚢收缩素是一种刺激胰腺分泌的营养激素。除这些作用于 胰腺和肠道的不利影响之外，胆嚢收缩素还可以抑制食欲，这项重要的特 性可用于减轻肥胖。文献中描述的有关a-淀粉酶抑制剂制备的一些不完整的方法包括利用 磷酸盐緩冲液提取并用硫酸铵使蛋白质不溶，没有任何选择性。获得的提 取物包含有高浓度的植物血凝素，所以必须进行稀释以获得具有可以接受 的毒性水平的提取物。除生物学方面之外，已知的提取过程由于在某些阶段有缺陷，所以^f艮难使制得的产品兼备安全性与活性。利用不同的离子浓度和pH值的緩冲液进行提取时所出现的问题是由于高浓度的蛋白质和多 糖杂质导致粘度过高，从而致使其可滤过性降低，以及处理时间增长。当 利用水提法时，同样有着很高的蛋白质提取物的微生物污染的风险，这种 风险是很难控制的，尤其是在制品粘度很高的情况下。以上的这些情况可 导致产物损失，并且很难获得含低含量植物血凝素和相应的多成分的标准 化的最终提取物。人们采用了多种方法试图解决限制植物血凝素的问题， 包括热处理，但是这种方法不仅破坏了植物血凝素，而且还破坏了产物中 的a-淀粉酶抑制剂，从而导致获得的产物缺乏活性。实践证明，商业产品 含有非常低的aAI含量。而其他含有过高a-淀粉酶抑制剂的产品在以大剂 量使用时则会导致令人不适的胃肠胀气的问题。专利技术描述已经惊奇的发现，通过制备其中植物血凝素含量在完全可以接受限度 内的富含a-淀粉酶抑制剂的产物，可以获得与给药剂量成比例的体重减轻。 大鼠试验的数据显示影响体重减轻的因素是综合性的，它不仅表现在血糖 水平的降低，还包括食物消耗的显著减少。多种药理学实验显示，在食物 可以任意获得的情况下，食物摄入的减少并非与毒性作用有关，而是因为 食欲的改变。 一系列首先在动物中进行，随后在人体中进行的实验使得可 以获得各成分间合适的平衡，从而在减轻体重的同时不会引起不良反应。本专利技术的产物是通过用水提取并随后用乙醇和水的适宜混合物分级沉 淀来制备的。本专利技术的方法采用乙醇和水的混合液，并提供了一种富含a-淀粉酶抑 制剂的提取物，其中所含a-淀粉酶抑制剂的活性等于或高于1800 USP/mg(高效液相值(HPLC)等于或高于15% w/w),植物血凝素的含量在 1500-6000 HAU/g之间，因此其可以以足够低的剂量添加在饮食中使用并 获得所需的结果。除这项主要的优点以外，本专利技术的方法还显著降低了微 生物数量。另一项主要的优点是该方法有可能获得初始提取物中所含的主要成分的完美的分离，从而获得一种a-淀粉酶抑制剂含量丰富、具有确定 的植物血凝素比率的终产物。本专利技术的方法包括将植物材料用pH范围在3-6.5之间，优选3.5-5.5， 更优选pH为4的緩冲液在2-25。C,优选4-18。C的温度下进行提取，然后 通过离心将提取物与植物材料分离。适合于提取的緩沖液有磷酸盐、柠檬酸盐或醋酸盐緩冲液或二羧基氨 基酸緩沖液，优选磷酸盐或柠檬酸盐緩冲液。根据所用的提取剂以及提取的循环次数，每份药物使用5-20体积的緩 冲液，优选10-12.5份，并将混合物搅拌l-4个小时，优选2小时；这些植 物材料可以进一步用适宜量的緩沖液提取3次以上，直至其a-淀粉酶抑制 剂和植物血凝素被全部提取。将合并的提取物通过过滤或离心进行澄清，并在25-35。C，优选30°C 的温度下真空浓缩，或在离心后超滤(10000Da截止值)至相当于约10%提 取物重量的体积、。接下来的步骤是将浓缩的7jC提取物用稀乙醇进行微分沉淀，并且使乙 醇的最终浓度在40-50% v/v之间，优选45。/。v/v，操作温度在18-30。C之 间，优选在20-25。C之间。将富含植物血凝素的沉淀物分离，滤液用乙醇进 一步稀释，使乙醇的浓度达到60-70%,优选65% 。获得的沉淀物可以被离心和/或过滤，重新溶解于去离子水中并用60% 的乙醇再次沉淀以减本文档来自技高网...

【技术保护点】
可通过用水溶液提取菜豆获得的提取物，其特征在于具有活性的α－淀粉酶抑制剂的含量等于或高于１８００　ＵＳＰ／ｍｇ（ＨＰＬＣ含量等于或高于１５％ｗ／ｗ），植物血凝素含量范围为１５００－６０００　ＨＡＵ／ｇ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：D伯兰达，M贝尔塔尼，E邦巴尔代利，F唐泽立，A加尔迪，C蓬佐内，
申请(专利权)人：因德纳有限公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]