检测叶螨体内共生菌的多重PCR检测方法技术

本发明专利技术同时检测叶螨体内两种共生菌Ｗｏｌｂａｃｈｉａ和Ｃａｒｄｉｎｉｕｍ的多重ＰＣＲ方法，属于农业生物技术范畴。多重ＰＣＲ是在普通ＰＣＲ的基础上加以改进，于一个ＰＣＲ反应体系中加入多对特异性引物，针对多个ＤＮＡ模板或同一模板的不同区域扩增多个目的片段的ＰＣＲ技术。本发明专利技术根据Ｗｏｌｂａｃｈｉａ　ｗｓｐ基因序列和Ｃａｒｄｉｎｉｕｍ　１６Ｓ　ｒＤＮＡ基因序列设计了两对新的特异性引物，可扩增出两段不同大小的目的片段，分别为２１１ｂｐ和２７９ｂｐ。本发明专利技术所述多重ＰＣＲ检测方法具有高度特异性、敏感性、可行性和有效性，即节约检测成本，又节省模板。用多重ＰＣＲ检测技术同时检测共生菌Ｗｏｌｂａｃｈｉａ和Ｃａｒｄｉｎｉｕｍ可广泛用于叶螨中这两种共生菌的检测。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
对叶螨体内两种共生菌沃尔巴克氏体（Ｗｏｌｂａｃｈｉａ　ｐｉｐｉｅｎｔｉｓ）和Ｃａｒｄｉｎｉｕｍ进行同时检测的方法，其特征在于：　１）提取叶螨总ＤＮＡ　挑单头雌成螨放入２５μｌ　ＳＴＥ缓冲液中进行碾磨，加入２μｌ１０ｍｇ／ｍｌ蛋白 酶Ｋ，３７℃孵育３０ｍｉｎ后，９５℃初始变性５ｍｉｎ并使蛋白酶Ｋ失活，作为ＤＮＡ模板用于ＰＣＲ扩增，ＳＴＥ缓冲液配制：１００ｍＭ　ＮａＣｌ，１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，１ｍＭ　ＥＤＴＡ，ｐＨ　８．０；　２）多重ＰＣＲ扩增　基于沃 尔巴克氏体（Ｗｏｌｂａｃｈｉａ　ｐｉｐｉｅｎｔｉｓ）的ｗｓｐ基因序列和Ｃａｒｄｉｎｉｕｍ的１６Ｓ...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：洪晓月，陈小琳，谢蓉蓉，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]