具有高产α-环糊精能力的环糊精葡萄糖基转移酶的突变体及突变方法技术

具有高产α－环糊精能力的环糊精葡萄糖基转移酶的突变体及突变方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明专利技术改进环糊精葡萄糖基转移酶（简称ＣＧＴ酶）的产物特异性，提供了提高来源于Ｐｅａｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍａｃｅｒａｎｓ　ＪＦＢ　０５－０１（ＣＣＴＣＣ　ＮＯ：Ｍ　２０８０６３）的ＣＧＴ酶产α－环糊精能力的突变方案，将ＣＧＴ酶的３７２位的Ａｓｐ替换为Ｌｙｓ，８９位的Ｔｙｒ分别替换为Ａｓｐ及Ａｒｇ，分别获得单突变体酶Ｄ３７２Ｋ，Ｙ８９Ｄ及Ｙ８９Ｒ，它们的α－环糊精生产能力较野生型ＣＧＴ酶有所提高；将带有Ｌｙｓ３７２的ＣＧＴ酶的基因片段替代Ｙ８９Ｒ基因的相应片段，可获得双突变体酶Ｄ３７２Ｋ／Ｙ８９Ｒ，其α－环糊精产量比野生型ＣＧＴ酶增加了１．５倍，而β－环糊精产量降低了５７％。这些突变体比野生型ＣＧＴ酶更利于α－环糊精的生产。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
来源于软化类芽孢杆菌（Ｐｅａｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ　ｍａｃｅｒａｎｓ）ＪＦＢ０５－０１的环糊精葡萄糖基转移酶，简称ＣＧＴ酶，的三种单突变体酶Ｄ３７２Ｋ，Ｙ８９Ｄ及Ｙ８９Ｒ，其特征是：将ＣＧＴ酶基因中第３７２位的天冬氨酸Ａｓｐ突变成了赖氨酸Ｌｙｓ，命名为Ｄ３７２Ｋ；将ＣＧＴ酶基因中第８９位的酪氨酸Ｔｙｒ分别突变成了天冬氨酸Ａｓｐ或精氨酸Ａｒｇ，分别命名为Ｙ８９Ｄ及Ｙ８９Ｒ；它们相比于野生型ＣＧＴ酶具有更高的产α－环糊精能力。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，陈坚，李兆丰，张佳瑜，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]