一种细胞标本及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种细胞标本制备方法，包括如下步骤：S1：建立冰冻切片支架：将明胶溶液滴置在冰冻切片托盘上，冰冻处理、定型；S2：进行支架表面的切割；S3：细胞微球置冰冻切片支架平面上，进行固定和标记，然后放入冰冻切片机中进行冰冻处理；S4：进行冰冻切片。该方法制备的细胞标本可以用于质谱成像。本发明专利技术通过优化分析3D细胞微球培养过程、细胞微球切片过程等过程，实现了小尺寸细胞微球在肉眼可见的条件下达到完整切割，不需要组织形态学的确认，有效的节省了时间成本和标本的用量。本方法有效的提高了质谱成像在细胞标本研究中的空间分辨率，扩大了该技术的应用范围。扩大了该技术的应用范围。扩大了该技术的应用范围。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞标本及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种细胞标本及其制备方法。

技术介绍

[0002]细胞、动物和人体标本是生物分析研究中的常用模型。其中，细胞模型因取材简便和生长周期短等因素，应用十分广泛。但是，传统的单层细胞培养方式很难准确直接的模拟细胞生长微环境和细胞之间的交互作用，可能造成细胞信号传递、细胞结构和功能的缺失。三维(3D)细胞微球培养既可以模拟疾病发展过程中细胞间和细胞外基质的信号传递，又可以直接真实的再现细胞迁移、浸润等重要的生物学行为，在疾病分子机制探寻、新型环境污染物毒性快速筛查、药物毒性和耐药性评价，以及药物代谢等方面具有重要的应用前景。
[0003]以质谱和质谱成像为主的组学研究策略，通过研究生物体整体代谢组、脂质组和蛋白组的特征变化来实现內源和外源生物分子的定性定量和定位的精准分析，具有高通量、高灵敏度和免标记的显著性优点。基于3D细胞微球的质谱组学和成像的研究策略，被广泛应用于药物药效筛选和器官芯片等研究领域。与二维细胞培养
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质谱组学分析相比，3D细胞微球
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质谱组学方法可以准确模拟生物体状态，包括细胞增殖、细胞间相互作用以及细胞微环境的改变。Amanda B.Hummon研究组在该领域做出了重要贡献。药物对实体肿瘤的渗透是影响临床化疗效果的关键，如果不考虑药物渗透的效率会导致许多癌症的再次复发。该研究组以HCT116结肠癌3D细胞微球作为研究对象，采用基质辅助激光解吸/电离质谱成像技术(MALDI
‑r/>MSI)评估抗癌药物伊立替康的空间分布和药物渗透，同时考察该药物代谢产物和母体分子在3D细胞微球中的空间分布特征(Anal.Chem.2013.85.6295
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6302)。与动物模型实验相比，此方法具有准确快速的优点，可以同时对母体药物和其代谢物进行空间定位、定性和定量的研究，为新药药效的快速筛选提供了更为节省成本和时间的研究策略。

技术实现思路

[0004]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的由于细胞微球比组织和整个生物体要小得多，因此，细胞微球的3D
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MSI面临挑战，从而提供一种细胞标本及其制备方法。
[0005]本专利技术提供一种细胞标本制备方法，包括如下步骤：
[0006]S1：建立冰冻切片支架：将明胶溶液滴置在冰冻切片托盘上，冰冻处理、定型；
[0007]S2：进行支架表面的切割；
[0008]S3：细胞微球置冰冻切片支架平面上，进行固定和标记，然后放入冰冻切片机中进行冰冻处理；
[0009]S4：进行冰冻切片。
[0010]优选的，所述明胶溶液中明胶的质量百分含量为1
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5％；优选为2％。
[0011]优选的，S1步骤中明胶溶液中含有染料。
[0012]优选的，切片厚度为10μm
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15μm。
[0013]优选的，S3和S4步骤之间还包括滴加明胶溶液的步骤。
[0014]优选的，细胞微球培养为3D细胞微球培养；包括如下步骤：将细胞悬浊液加入到有琼脂糖涂层的细胞培养板的孔中，培养，得到细胞微球。
[0015]优选的，琼脂糖涂层的细胞培养板的制备方法包括如下步骤：将琼脂糖添加到细胞培养基、灭菌、一定温度下保持。
[0016]优选的，所述温度为60℃
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100℃。
[0017]优选的，3D细胞微球培养包括如下任意一种：
[0018]A)单种肿瘤相关细胞微球的3D培养；
[0019]B)多种肿瘤相关细胞微球的3D共培养；
[0020]C)单种非肿瘤相关细胞微球的3D培养；
[0021]D)多种非肿瘤相关细胞微球的3D共培养；
[0022]优选的，所述多种肿瘤相关细胞为胰腺癌相关细胞。
[0023]上述方法制备的细胞标本。
[0024]本专利技术公开了一种用于细胞标本制备方法，该方法制备的细胞标本可以用于质谱成像。本专利技术通过优化分析3D细胞微球培养过程、细胞微球切片过程等过程，实现了小尺寸细胞微球在肉眼可见的条件下达到完整切割，不需要组织形态学的确认，有效的节省了时间成本和标本的用量。本方法有效的提高了质谱成像在细胞标本研究中的空间分辨率，扩大了该技术的应用范围。
附图说明
[0025]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0026]图1为实施例1的冰冻切片支架示意图(A是俯视图；B和C是侧视图，其中B图是半包被切片的制备，C图是全包被切片的制备)；
[0027]图2为实施例1的胰腺癌相关的3D细胞微球的质谱成像结果：A，细胞微球扫描谱图；B，细胞微球质谱成像分割图谱；C，典型脂质分子的原位空间分布谱图；白色圆圈是细胞微球所在的位置。
具体实施方式
[0028]2％(w/v)明胶溶液的配置方法为：2g明胶溶解于100mL溶剂。
[0029]实施例1
[0030]一种适用于质谱成像技术的3D细胞微球培养方法、适用于质谱成像技术细胞标本切片方法及其基于3D细胞微球测定细胞代谢分子轮廓的检测方法。
[0031]1、适用于质谱成像技术的3D细胞微球培养方法，步骤如下：步骤1)、将0.1～0.2g(本实施例为0.1g)琼脂糖添加到10mL细胞培养基中，并高压灭菌处理30
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40分钟(本实施例为40分钟)，灭菌后取出全程保持在60℃环境下，以防止琼脂糖溶液凝固；细胞培养基为：DMEM高糖基础培养基+10％(v/v)胎牛血清+10％(v/v)非必须氨基酸+1％(v/v)双抗。
[0032]步骤2)、用移液器将上述含有琼脂糖溶液的细胞培养基(50μL)加入到96孔板中，并离心处理2分钟避免气泡产生，得到有琼脂糖涂层的细胞培养板；
[0033]步骤3)、将100μL胰腺癌细胞(细胞包括PANC
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1、HUVEC和MRC
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5)悬浊液加入到有琼脂糖涂层的细胞培养板的每个孔中，保持5000个细胞/孔，放入37℃进行培养或处理，得到细胞微球。
[0034]2、适用于质谱成像技术的细胞标本切片方法，步骤如下：
[0035]步骤1)、建立冰冻切片支架：考虑到细胞微球体积较小，直接进行冰冻切片无法定位。为了有效对细胞微球进行定位，在500μL 2％(w/v)明胶溶液(该溶液的溶剂为含有0.1M乙酸、1％(v/v)三氯甲烷的水溶液)中加入1μL台盼蓝溶液后，滴置在冰冻切片托盘上，放入
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20℃的冰冻切片机中进行冰冻处理、定型；
[0036]对于半包被的支架(图1B)：
[0037本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞标本制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：建立冰冻切片支架：将明胶溶液滴置在冰冻切片托盘上，冰冻处理、定型；S2：进行支架表面的切割；S3：细胞微球置冰冻切片支架平面上，进行固定和标记，然后放入冰冻切片机中进行冰冻处理；S4：进行冰冻切片。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述明胶溶液中明胶的质量百分含量为1
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5％；优选为2％。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，S1步骤中明胶溶液中含有染料。4.根据权利要求1
‑
3任一所述的方法，其特征在于，切片厚度为10μm
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15μm。5.根据权利要求1
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4任一所述的方法，其特征在于，S3和S4步骤之间还包括滴加明胶溶液的步骤。6.根据权利要求1
‑
5任一所...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵超，罗茜，李文波，任松磊，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：