一种含双硫代核苷寡核苷酸探针在测定DNA序列的应用制造技术

本发明专利技术的目的是提供一种含双硫代核苷寡核苷酸测序探针在测定ＤＮＡ序列的应用，即一种不具有对映体结构的（即含双硫代）核苷测序探针，利用外切酶Ⅲ对正常碱基间的磷酸二酯键具有的降解作用，而对双硫代修饰的磷酸二酯键具有不被切割的功能，实现测序反应中标记物的清除建立新的杂交－酶连接－酶切割的高通量测序技术，为全基因组ＤＮＡ序列分析提供一种新方法，建立快速，准确，便宜的基因组序列测定技术，具有测定正确可靠，易于实现的优点。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种含双硫代核苷寡核苷酸的测序探针在测定ＤＮＡ序列的应用，所述的应用方法包括以下步骤：　ａ．将待测ＤＮＡ模板连接已知的连接子，固定并扩增后变性为单链ＤＮＡ模板，与连接子序列互补的测序定位引物同单链ＤＮＡ模板完成杂交，杂交的测序定位引物 距离单链ＤＮＡ模板未知碱基序列位置的碱基数目为ｉ，ｉ≥１且为自然数数；　ｂ．加入四种明确碱基为Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ或四种双硫代的明确碱基含双硫代核苷寡核苷酸的测序探针，完成与单链ＤＮＡ模板的杂交，在连接酶的作用下，测序探针与紧邻的测序定位引 物连接，清除未连接的双硫代核苷的标记寡核苷酸序列，扫描记录ＤＮＡ模板本次杂交－连接后出现的标记信号，测定碱基，用外切酶ＩＩＩ将测序探针中未被硫代修饰的碱基连同标记物一同切除；　ｃ．在外切酶ＩＩＩ切除后的ＤＮＡ模板中，加入四种明确碱基为 Ａ、Ｇ、Ｃ、Ｔ或四种双硫代的明确碱基含双硫代核苷寡核苷酸的测序探针，完成与单链ＤＮＡ模板的杂交，在连接酶的作用下，紧邻未被外切酶ＩＩＩ切除的测序探针碱基与测序探针连接，清除未连接的双硫代核苷的标记寡核苷酸序列，扫描记录ＤＮＡ模板本次杂交－连接后出现的标记信号，测定碱基，用外切酶ＩＩＩ将测序探针中未被硫代修饰的碱基连同标记物一同切除；　ｄ．重复步骤ｃ，根据序列测定的长度和双硫代碱基在探针中的位置确定终止上述步骤；　ｅ．将测序定位引物变性清除，更换新的测序定位引物与单 链的ＤＮＡ模板完成杂交，使得杂交的测序定位引物距离单链ＤＮＡ模板未知碱基序列位置的碱基数目为ｉ－ｎ，其中ｉ≥１且为自然数，１≤ｎ≤ｉ且ｎ为从１开始的递增自然数；　ｆ．重复步骤ｂ，ｃ，ｄ，ｅ；　ｇ．测定当ｎ＝ｉ时，重复步骤ｂ，ｃ， ｄ，终止测定。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：肖鹏峰，李燕强，唐静，陆祖宏，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]