一种注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测方法技术

本发明专利技术属于药物质量分析技术领域，具体涉及一种注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测方法。该方法选用凝胶色谱柱，配合优选的液相色谱等度洗脱条件，解决注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测问题。本发明专利技术操作简单、实用性强，能够有效监控注射用血栓通制剂及生产过程中间体的产品质量，有利于保证用药安全。有利于保证用药安全。

【技术实现步骤摘要】
一种注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测方法


[0001]本专利技术属于药物质量分析
，具体涉及一种注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测方法。

技术介绍

[0002]中药注射剂近年来快速发展，在临床上得到广泛应用。与此同时，在应用过程中出现不良反应也常有报道。可见，中药注射剂的用药安全问题越来越需要重视。许多文献认为，中药注射剂中高分子杂质是引起不良反应的重要物质之一。
[0003]注射用血栓通冻干粉常用于治疗心脑血管疾病，药品的有效成分为三七总皂苷，其提取于三七药材。中药材成分复杂，除有效成分外，也可能含有导致不良反应的高分子物质。因此，需研究开发一种稳定有效的注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于通过选用凝胶色谱柱，配合优选的液相色谱等度洗脱条件，解决注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测问题。
[0005]本专利技术的技术方案为：一种注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测方法，其特征在于，它是以乙腈为流动相A、0.1%三氟乙酸为流动相B进行等度洗脱的高效液相色谱法。
[0006]如上所述的高效液相色谱法，所述流动相A的体积比为25~30%，流动相B的体积比为75~70%。
[0007]优选地，所述高效液相色谱法所用的色谱柱为TSK SW
XL
2000凝胶色谱柱（7.8 mm
×
300 mm，6
µ
m）。
[0008]优选地，所述高效液相色谱法的色谱条件为：流速0.4~0.8 ml/min，柱温20~30℃，检测波长为214 nm。
[0009]优选地，所述高效液相色谱法的对照品为生长抑素、胸腺肽α1、人胰岛素、核糖核酸酶A和（牛）血清白蛋白的混合溶液。
[0010]优选地，所述对照品所用的溶剂为0.025%三氟乙酸水溶液。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：建立一种操作简单、实用性强的检测方法，实现注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的准确检测，能有效监控注射用血栓通制剂及生产过程中间体的产品质量，有利于确保用药安全。
附图说明
[0012]图1为胸腺肽分子量标准混合对照溶液标准曲线。
[0013]图2为实验例各供试品的高效液相检测色谱图。
具体实施方式
[0014]下面以实施例作进一步说明，但本专利技术不局限于这些实施例。
[0015]实施例1（1）样品制备：取注射用血栓通冻干粉（由广西梧州制药（集团）股份有限公司生产），精密称定250mg至5ml容量瓶，用超纯水超声溶解10min并定容至刻度，0.45μm滤膜过滤，滤液直接作为供试品。对照品取购于中国食品药品检验所的生长抑素（分子量1638，批号：140656
‑
201705）、胸腺肽α1（分子量3108，批号：140655
‑
201705）、人胰岛素（分子量5808，批号：140654
‑
201705）、核糖核酸酶A（分子量13700，批号：140653
‑
201705）及（牛）血清白蛋白对照品（分子量66430，批号：140619
‑
201120）各4mg置于5ml容量瓶，加入0.025%三氟乙酸水溶液溶解并定容至刻度，得胸腺肽分子量标准混合对照溶液。
[0016]（2）检测：分别吸取10μl对照品溶液和20μl供试品溶液注入高效液相色谱仪（Aglient1200）中，色谱柱使用TSK SW
XL
2000凝胶色谱柱（7.8 mm
×
300 mm，6μm），设定流速为0.5 ml/min，柱温为25℃，检测波长为214 nm，以流动相A:B=27:73进行等度洗脱。
[0017]实施例2（1）样品制备：同实施例1。
[0018]（2）检测：分别吸取10μl对照品溶液和20μl供试品溶液注入高效液相色谱仪（Aglient1200）中，色谱柱使用TSK SW
XL
2000凝胶色谱柱（7.8 mm
×
300 mm，6μm），设定流速为0.4 ml/min，柱温为20℃，检测波长为214 nm，以流动相A:B=28:72进行等度洗脱。
[0019]实施例3（1）样品制备：同实施例1。
[0020]（2）检测：分别吸取10μl对照品溶液和20μl供试品溶液注入高效液相色谱仪（Aglient1200）中，色谱柱使用TSK SW
XL
2000凝胶色谱柱（7.8 mm
×
300 mm，6μm），设定流速为0.8 ml/min，柱温为30℃，检测波长为214 nm，以流动相A:B=25:75进行等度洗脱。
[0021]实施例4（1）样品制备：同实施例1。
[0022]（2）检测：分别吸取10μl对照品溶液和20μl供试品溶液注入高效液相色谱仪（Aglient1200）中，色谱柱使用TSK SW
XL
2000凝胶色谱柱（7.8 mm
×
300 mm，6μm），设定流速为0.6 ml/min，柱温为23℃，检测波长为214 nm，以流动相A:B=30:70进行等度洗脱。
[0023]实验例（1）样品制备：取20批注射用血栓通冻干粉和20批三七总皂苷（粉针）按实施例1方法制备供试品和对照品。取20批工序F样品，精密吸取1ml置于10ml容量瓶，加少量超纯水超声溶解10min，稀释至刻度，经0.45μm滤膜过滤，滤液作为供试品。另取20批工序E样品、20批工序D样品、20批工序C样品、20批工序B样品、20批工序A样品（以上样品均由梧州制药公司提供，其中工序A~F样品分别为生产注射用血栓通冻干粉连续工序时取样）各1ml，置于5ml圆底离心管并加少量超纯水涡旋1min混匀，用0.45μm滤膜过滤，滤液作为供试品。
[0024]（2）检测：取混合对照液10μl及注射用血栓通冻干粉、三七总皂苷（粉针）、工序A、B、C、D、E、F等供试品溶液各20μl，按实施例1色谱条件检测，记录供试品是否在对照品保留时间范围内出现高分子色谱峰。如出现高分子杂质色谱峰，按面积归一化法计算含量。
[0025]（3）结果：以对照品各相对分子质量对数值与保留时间（见表1）作线性回归，以色谱峰保留时间为横坐标，相对分子质量对数值为纵坐标。图1结果显示，胸腺肽分子量标准混合对照
溶液的标准曲线r值为0.97，其相对分子质量在1638~66430范围内呈良好的线性关系。
[0026]表1 对照品各相对分子质量对数值与保留时间关系表表2 注射用血栓通冻干粉制剂及其生产中间体高分子杂质检测结果如表2和图2所示，20批的注射用血栓通冻干粉及三七总皂苷（粉针）供试品均未在混合对照品保留时间范围内检测出高分子杂质峰，推测注射用血栓通冻干粉及三七总皂苷的高分子杂质在生产过程通过纯化工艺被有效除去。对于工序样品的高本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种注射用血栓通冻干粉中高分子杂质的检测方法，其特征在于，它是以乙腈为流动相A、0.1%三氟乙酸为流动相B进行等度洗脱的高效液相色谱法。2.如权利要求1所述的高效液相色谱法，其特征在于，所述流动相A的体积比为25~30%，流动相B的体积比为75~70%。3.如权利要求1所述的高效液相色谱法，其特征在于，所用的色谱柱为TSK SW
XL
2000凝胶色谱柱（7.8 mm
×
300 mm，6
µ
...

【专利技术属性】
技术研发人员：招丽君，梁咏梅，杨妹妹，蒙永明，黄运琦，谭舒舒，兰星，
申请(专利权)人：广西梧州制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：