一种抑制成肌细胞分化的环状FOXO3序列及干扰其表达的方法技术

本发明专利技术公开了一种抑制成肌细胞分化的环状FOXO3序列及与骨骼肌生长发育相关的circRNA，提供了环状RNA circ

【技术实现步骤摘要】
一种抑制成肌细胞分化的环状FOXO3序列及干扰其表达的方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及环状RNA在肌肉生长发育中的作用。

技术介绍

[0002]CircRNA（环状RNA）是一类不具有5
’
末端帽子和3
’
末端poly（A）尾巴，通过共价键形成闭合环状的非编码RNA分子(Sanger et al., 1976; Capel et al., 1993)。CircRNA来自于外显子或内含子，其在细胞核中形成，之后被运送到细胞质中发挥作用。目前关于circRNA的形成主要有两种模型：1）套索驱动的环化：是由上游的一个外显子的3
’
端的剪切供体和下游的另一个外显子的5
’
端的剪切受体共价结合反向剪切掉内含子形成的闭合环状RNA分子。2）内含子配对驱动的环化：通过内含子两侧的Alu互补或其它的RNA二级结构，使两个内含子通过碱基互补配对自身环化后切除内含子而形成的环状RNA分子（Zhang X O，Wang H B，Zhang Y，et al． Complementary sequence
‑
mediated exon circularization ［J］． Cell，2014，159( 1) : 134
‑
147）。具有组织、时序和疾病特异性；与传统的线性RNA相比，circRNA分子呈封闭环状结构，不易被核酸外切酶RNaseR消化，比lineRNA更稳定，且具有高度的保守性（Jeck WR, Sorrentino JA, Wang K, et al. Circular RNAs are abundant, conserved, and associated with ALU repeats［J］. RNA, 2013, 19（2）：141
‑
157.）。
[0003] 目前，随着高通量测序的发展，circRNA进入科研视界，被视为“转录噪音”的circRNA相继被发现。作为一类新的功能性分子，circRNA可通过多种方式发挥其生物学功能。广泛存在于各个物种中的circRNA可与转录因子结合，参与基因的表达调控，进一步丰富了真核生物转录调控的复杂性和多样性（Memczak S, Jens M, Elefsinioti A, et al. Circular RNAs are a large class of animal RNAs with regulatory potency［J］. Nature, 2013, 495（7441）：333
‑
338.）。例如，在人类上皮
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间充质细胞转换（EMT）期间，剪切因子Quaking（QKI）基序可影响circRNA的形成（Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, et al. The RNA binding protein quaking regulates formation of circ RNAs［J］. Cell, 2015, 160（6）：1125
‑
1134.）。circRNA通过吸附miRNA，调控转录后水平靶基因的表达（Bolha L, Ravnik
‑
Glava
č M, Glava
č D. Circular RNAs ：biogenesis, function, and a role as possible cancer biomarkers［J］. International Journal of Genomics, 2017, 2017（30）：6218353.）。作为非编码RNA的circRNA可通过依赖内部核糖体进入位点（IRES）（Legnini, I., Di Timoteo, G., Rossi, F., Morlando, M., Briganti, F., Sthandier, O., & Laneve, P. (2017). Circ
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ZNF609 is a circular RNA that can be translated and functions in myogenesis. Molecular cell, 66(1), 22
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37.）和甲基化（Yang, Y., Fan, X., Mao, M., Song, X., Wu, P., Zhang, Y., ... & Wong, C. C. (2017). Extensive translation of circular RNAs driven by N 6
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methyladenosine. Cell research, 27(5), 626.）两种方式翻译成蛋白发挥功能。
[0004] 作为一类新型功能性的circRNA，以调控病毒的复制进入科学家的视野（Sanger HL, Klotz G, Riesner D, et al. Viroids are single
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stranded covalently closed circular RNA molecules existing as highly base
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paired rod
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like structures［J］. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 1976, 73（11）：3852
‑
3856. Kolakofsky D. Isolation and characterization of Sendai virus DI
‑
RNAs［J］. Cell, 1976, 8（4）：547
‑
555.）。目前，关于circRNA的研究主要集中在疾病的防控，对畜禽的经济性状的研究相对较少。骨骼肌是肉用动物躯体的重要产出部分，也是动物运动的重要组织。因此，肌肉的发育是畜牧业关注的重要经济性状之一。CircFUT10通过吸附miR
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133a促进成肌细胞的分化，抑制成肌细胞的增殖（Li, H., Yang, J., Wei, X., Song, C., Dong, D., Huang, Y., ... & Qi, X. (2018). CircFUT10 reduces proliferation and facilitates differentiation of myoblasts by sponging miR
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133a. Journal of cellular physiology, 233(6), 4643
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4651.）。
[0005] 目前，对CircFOXO3的研究本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与骨骼肌生长发育相关的circRNA，其特征在于，所述环状RNA circRNA
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FOXO3的序列为SEQ ID NO：1。2.一种用于验证权利要求1所述的环状RNA circ
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FOXO3基因的试剂，其特征在于，试剂包括一对用于核酸扩增circ
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FOXO3基因的引物对，序列为SEQ ID NO：2和 SEQ ID NO：3；试剂检测的样本为动物骨骼肌。3.一种用于抑制权利要求1所述的环状RNA表达的试剂，其特征在于，所述试剂用于抑制cicr
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FOXO3基因表达的siRNA，序列为SEQ ID NO：4。4.一种验证权利要求3所述试剂抑制效率的方法，其特征在于，方法通过将siRNA转染细胞，利用qRT
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PCR检测线性和环状RNA FOXO3基因的相对表达水平，所述方法包括两对用于...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡圣伟，刘芝瑾，张云峰，倪伟，李村院，李晓悦，
申请(专利权)人：新疆农垦科学院，
类型：发明
国别省市：