基于QD-LUMABS的抗体定量检测的曲线建立方法、检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种基于QD

【技术实现步骤摘要】
基于QD
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LUMABS的抗体定量检测的曲线建立方法、检测方法及其试剂盒


[0001]本专利技术涉及分析检测领域，特别涉及一种基于QD
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LUMABS的抗体定量检测的曲线建立方法、检测方法及其试剂盒。

技术介绍

[0002]近几年发展起来的mNeonG
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LUMABS探针抗体检测技术，主要由催化发蓝光的荧光素酶(BRET供体)、绿色荧光蛋白mNeonGreen(受体)和两个抗原识别表位构成。由于探针N端与C端序列的相互作用，表达的探针处于“close”状态时，荧光素酶与绿色荧光蛋白空间位置被拉近发生高效的BRET；当有探针对应的特异性抗体存在时，探针呈“open”状态， BRET效率降低，实现对抗体的定量检测。现有的以BRET方式检测的 LUMABS探针，都是以催化发蓝光的荧光素酶(Nanoluc)为供体，绿色荧光蛋白(GFP、mNeonGreen、Clover4等)为受体，二者的发射主峰仅相距约40nm，峰图部分重叠，供体信号对受体信号造成干扰，且荧光蛋白的最大激发波长与最大发射波长仅相差本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于QD
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LUMABS的抗体定量检测的曲线建立方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：设计并表达带有BirATag的特定抗原识别表位
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LUMABS融合蛋白；所述BirATag为生物素连接酶可特异性识别的一段15个氨基酸的序列；所述生物素连接酶为BirA；S2：将S1的融合蛋白加上生物素标记；S3：将S2得到的带有生物素标记的融合蛋白与量子点
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链霉亲和素化合物反应，得到量子点
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特定抗原识别表位
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LUMABS探针；S4：将S3得到的所述量子点
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特定抗原识别表位
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LUMABS探针和梯度浓度的所述特定抗原识别表位的抗体反应，加入LUMABS探针底物，检测溶液的供体通道和受体通道荧光强度，计算获得BRET效率，建立特定抗体浓度
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BRET效率工作曲线。2.根据权利要求1所述的曲线建立方法，其特征在于，所述步骤S1的所述融合蛋白由N端到C端具体为SH3
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BirATag
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特定抗原识别表位
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helix
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helix
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特定抗原识别表位
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荧光素酶

【专利技术属性】
技术研发人员：金宗文，卫小元，罗擎颖，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：