间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养上清的净化浓缩物及其制造方法技术

本发明专利技术的课题在于：提供具有高的有效性和高的安全性的培养上清的净化浓缩物及其制造方法。根据本发明专利技术，提供间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养上清的净化浓缩物，其包含间充质干细胞或自其衍生的前体细胞分泌的IGFBP、HGF、VEGF、PDGF、EGF、KGF(FGF

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养上清的净化浓缩物及其制造方法


[0001]本专利技术涉及可用于再生医疗的间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养上清的净化浓缩物。本专利技术还涉及上述净化浓缩物的制造方法。

技术介绍

[0002]已知细胞不论在生物体中还是在培养环境中均释放生理活性物质，以使其细胞自身或周围的细胞维持正常的功能。特别是在成体干细胞/前体细胞中释放其细胞特异性的生理活性物质(细胞因子、生长因子、血管新生因子、外来体、酶、细胞外基质等)，在脏器的再生或稳态维持中起到重要作用。
[0003]干细胞存在于骨髓、脂肪、皮肤等全身的各种部位。据报道，存在于皮下脂肪组织的干细胞(脂肪衍生的间充质干细胞Adipose
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derived stromal/stem cells，ASC)与骨髓衍生的干细胞具有几乎同样的性质。与骨髓衍生的间充质干细胞相比，脂肪衍生的间充质干细胞具有以下优点：在每个组织中的含量多；确立了由组织分离、增殖、保存的简便方法；产生的各种因子(肝细胞生长因子或血管内皮细胞生长因子等)的量多；免疫抑制能力高；以及采集时对患者造成的负担少；对采集后的患者的长期健康或寿命的影响小。
[0004]关于以往的通过给予干细胞而进行的治疗，注意到与细胞自身存活、分化并发挥功能相比，干细胞分泌的体液因子的效能的影响更大。为了组织修复或美容等目的，干细胞的培养上清开始作为注射剂、外用剂、化妆品来使用。
[0005]专利文献1中记载了晶状体的固化防止剂或治疗剂的制造方法，包括以下工序：使间充质干细胞与中空丝膜的内表面接触的工序；向中空丝膜的内腔和外腔灌流细胞培养液，培养间充质干细胞的工序；以及灌流至中空丝膜的内腔的细胞培养液的回收工序。
[0006]专利文献2中记载了细胞培养装置，该装置包括：培养容器，其收纳包含细胞的细胞悬液；第1过滤部，其具有对从培养容器中取出的细胞悬液施行膜分离处理的第1过滤膜；第1循环流路，其使被第1过滤膜阻止的成分返回到培养容器；第2过滤部，其具有对上述细胞悬液的透过了上述第1过滤膜的成分施行膜分离处理的第2过滤膜；第2循环流路，其使透过第2过滤膜的成分返回到培养容器；以及回收流路，其回收被第2过滤膜阻止的成分。
[0007]现有技术文献
[0008]专利文献
[0009]专利文献1：日本特开2019
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172607号公报；
[0010]专利文献2：国际公开WO2018/159847号公报。

技术实现思路

[0011]专利技术所要解决的课题
[0012]目前，临床上利用的培养上清是从培养器回收细胞培养后的上清、并根据需要通过离心操作或过滤器对混入到上清中的干细胞施行去除处理而得到的原液或其稀释液。这
样的培养上清中，肝细胞生长因子(hepatocellular growth factor，HGF)、胰岛素样生长因子(Insulin
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like growth factors，IGFs)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等生理活性物质的浓度低，还包含细胞所释放的代谢废物(乳酸、氨等)，因此无法最大限度地发挥有效性。在将包含代谢废物的培养上清直接用于治疗的情况下，还存在对组织或细胞造成危害的可能性。本专利技术以提供具有高的有效性和高的安全性的培养上清的净化浓缩物及其制造方法作为所要解决的课题。
[0013]用于解决课题的手段
[0014]本专利技术人为了解决上述课题进行了深入研究。首先，发现在间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养上清中产生的生理活性物质的量受到氧浓度、环境应激、培养时的细胞密度(汇合度)、培养时间、培养基组成、重力、气压等的影响，着眼于这些培养条件，通过确立最适的培养方案，获得了高功能的培养上清原液。另一方面，关于培养上清中所含的有害物质，确认到可通过基于适当方案的净化工序来去除。根据该净化工序，证实了在去除有害物质的同时可实现有用的生理活性物质的浓缩。本专利技术根据这些见解而完成。
[0015]即，根据本专利技术，提供以下的专利技术。
[0016]<1>间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养上清的净化浓缩物，其包含间充质干细胞或自其衍生的前体细胞分泌的IGFBP、HGF、VEGF、PDGF、EGF、KGF(FGF
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7)、PDGFR、TGFα和TGFβ的至少一种以上，去除了作为由间充质干细胞或自其衍生的前体细胞产生的代谢废物的乳酸和氨。
[0017]<2><1>所述的净化浓缩物，其用于用作再生医疗用治疗剂、免疫抑制剂、抗炎药或抗纤维化剂。
[0018]<3><1>或<2>所述的净化浓缩物，其包含间充质干细胞或自其衍生的前体细胞分泌的IGFBP、HGF、VEGF、PDGF、EGF、KGF(FGF
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7)、PDGFR、TGFα和TGFβ的全部。
[0019]<4><1>～<3>中任一项所述的净化浓缩物，与浓缩前的培养上清相比，IGFBP、HGF、VEGF、PDGF、EGF、KGF(FGF
‑
7)、PDGFR、TGFα和TGFβ的至少一种以上的浓度被浓缩至1.2倍以上。
[0020]<5><1>～<4>中任一项所述的净化浓缩物，其中，间充质干细胞或自其衍生的前体细胞是脂肪衍生的间充质干细胞或脂肪衍生的血管内皮前体细胞。
[0021]<6><1>～<5>中任一项所述的净化浓缩物，其中，氨浓度为20μg/dL以下，HGF浓度为50000pg/mL以上。
[0022]<7><1>～<6>中任一项所述的净化浓缩物的制造方法，其包括以下工序：
[0023]培养上清获得工序，通过在培养液中培养间充质干细胞或自其衍生的前体细胞而获得培养上清；
[0024]浓缩工序，由上述培养上清浓缩有用成分；以及
[0025]净化工序，从上述浓缩培养上清中去除代谢废物。
[0026]<8><7>所述的方法，其中，在培养上清获得工序中，由处于增殖期或汇合期的状态的间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养物获得培养上清。
[0027]<9><7>或<8>所述的方法，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.间充质干细胞或自其衍生的前体细胞的培养上清的净化浓缩物，其包含间充质干细胞或自其衍生的前体细胞分泌的IGFBP、HGF、VEGF、PDGF、EGF、KGF(FGF
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7)、PDGFR、TGFα和TGFβ的至少一种以上，去除了作为由间充质干细胞或自其衍生的前体细胞产生的代谢废物的乳酸和氨。2.根据权利要求1所述的净化浓缩物，其用于用作再生医疗用治疗剂、免疫抑制剂、抗炎药或抗纤维化剂。3.根据权利要求1或2所述的净化浓缩物，其包含间充质干细胞或自其衍生的前体细胞分泌的IGFBP、HGF、VEGF、PDGF、EGF、KGF(FGF
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7)、PDGFR、TGFα和TGFβ的全部。4.根据权利要求1～3中任一项所述的净化浓缩物，其中，与浓缩前的培养上清相比，IGFBP、HGF、VEGF、PDGF、EGF、KGF(FGF
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7)、PDGFR、TGFα和TGFβ的至少一种以上的浓度被浓缩至1.2倍以上。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉村浩太郎，白土贵子，斋藤夏美，吴云燕，
申请(专利权)人：TeleBio股份有限公司，
类型：发明
国别省市：