一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法及应用技术

本发明专利技术涉及免疫抗体技术领域，公开了一种快速免疫方法制备肿瘤特异性丙酮酸激酶(Tu

【技术实现步骤摘要】
一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法及应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，涉及快速免疫法和人Tu
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PKM2抗原决定簇多肽、抗体的制备和应用。。

技术介绍

[0002]丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)是参与糖酵解的限速酶,在肿瘤发生过程中，由于肿瘤细胞的坏死和转移，肿瘤细胞中的多种形式的PKM2会释放进入血液、尿液中，而消化道肿瘤的多种形式的PKM2亦能随着肿瘤患者的粪便排出。此外，PKM2在一些分化组织中表达，如肾脏、肺、白色和棕色脂肪、肠、卵巢、睾丸、胰岛、正常增殖细胞、胚胎细胞、成人干细胞和肿瘤细胞。因此，检测仅在肿瘤细胞中表达的Tu
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PKM2可以用于精确的肿瘤诊断、抗肿瘤疗效评价和预后判断。
[0003]在哺乳动物中PKM2有5种同工酶PKL、PKR、PKM1、PKM2和Tu
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PKM2，可以在无氧的情况下催化磷酸烯醇化物(PEP)的去磷酸化生成丙酮酸和ATP，它们在组织特异性、动力学特征和调节机制方面差异很大。PKL和PKR是同本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法，其特征在于，至少包括以下步骤：以鼠为受体，用完全弗氏佐剂和甲状腺球蛋白与多肽抗原混合进行免疫；所述多肽抗原为人Tu
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PKM2抗原决定簇多肽。2.根据权利要求1所述的一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法，其特征在于，所述人Tu
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PKM2抗原决定簇多肽含有如SEQ ID NO:2＝ESFASDPILY(P)RPVAVC所示的氨基酸序列，并且上述序列的C端Cys的侧链硫基共轭反应交联有血蓝蛋白KLH。3.根据权利要求2所述的一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法，其特征在于，包括以下步骤：1)免疫小鼠步骤：S1.第一次免疫：以小鼠为受体，用完全弗氏佐剂和猪甲状腺球蛋白与人Tu
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PKM2抗原决定簇多肽混合，进行第一次免疫；S2.第二次免疫:重复步骤S1进行第二次免疫；S3.第三次免疫:用非完全弗氏佐剂和猪甲状腺球蛋白进行第三次免疫。4.根据权利要求3所述的一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法，其特征在于，包括以下步骤：1)免疫小鼠步骤：S1.第一次免疫：以小鼠为受体，第1天用完全弗氏佐剂和猪甲状腺球蛋白与人Tu
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PKM2抗原决定簇多肽混合，进行第一次免疫；S2.第二次免疫:第7天，重复步骤S1进行第二次免疫；S3.第三次免疫:再过7天，用非完全弗氏佐剂和猪甲状腺球蛋白进行第三次免疫。5.根据权利要求3所述的一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法，其特征在于，所述步骤S1中，人Tu
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PKM2抗原决定簇多肽的用量为1
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50μg。6.根据权利要求3所述的一种快速制备肿瘤特异性丙酮酸激酶单克隆抗体方法，其特征在于，包括以下步骤1)，还包括步骤2)
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11)中的至少一个步骤：1)免疫小鼠步骤：...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄蓓，沈杰，张蕾，尚海，刘厚如，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：