内毒素保留时间的估算方法及其应用技术

本发明专利技术公开了内毒素保留时间的估算方法及其应用，所述方法包括向待估算样品中加入内毒素标准品制得加标样品，并保存在不同温度条件下，定期检测加标样品中内毒素回收率，从而估算样品中内毒素的保留时间；其中，内毒素回收率R的范围需满足50％≤R≤200％。与现有技术相比，本发明专利技术具有以下优点：(1)本发明专利技术所述方法针对生物药品中内毒素低回收率情形，设计一种能够适用于生产过程中的样品或生物原液的内毒素保留时间的估算方法；(2)本发明专利技术所述方法能够为QC部门提供无菌生物药品的最大存储时间提供指导，从而建立完善的检测流程。从而建立完善的检测流程。从而建立完善的检测流程。

【技术实现步骤摘要】
内毒素保留时间的估算方法及其应用


[0001]本专利技术属于分析化学
，涉及生物药品储存和检测过程中稳定测定细菌内毒素的方法，具体为内毒素保留时间的估算方法及其应用。

技术介绍

[0002]热源是能引起恒温动物体温异常升高的物质的总称，分为外源性热原和内源性热原。临床输液反应以热原反应危害最大，发生率最高。而细菌内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁的一种成分，为高分子脂多糖复合物(LPS)。LPS位于细菌细胞壁的最外层，包括类脂A、核心多糖和O特异侧链。当细菌死亡或自溶后就会释放内毒素，属于一种外源性热源。内毒素普遍存在且不易灭活，对制药和医疗器械行业是一个挑战。因此，灵敏可靠的热原或内毒素分析技术是非常必须的。内毒素的检测方法有多种，最早采用的是家兔法，基于鲎试剂的检测方法是现在被广泛使用的方法，重组C因子检测法是较新的内毒素检测方法。
[0003]“内毒素低回收率(low endotoxin recovery,LER)”是指使用药典规定的方法进行细菌内毒素检测时，无法在某些无菌生物药品中检测到被添加的(加标的)内毒素，即某些生物药品对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.内毒素保留时间的估算方法，其特征在于，所述方法包括向待估算样品中加入内毒素标准品制得加标样品，并保存在不同温度条件下，定期检测加标样品中内毒素回收率，从而估算样品中内毒素的保留时间；其中，内毒素回收率R的范围需满足50％≤R≤200％。2.根据权利要求1所述的内毒素保留时间的估算方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：S1、制备加标水样、不加标样品及加标样品，所有样品都制备平行样，其中加标水样和加标样品中内毒素的终浓度相等；加标水样为内毒素的BET水溶液，加标样品为内毒素与样品的混合溶液；S2、将S1制得的所有加标样品均置于2
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8℃和20
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25℃环境中，并在不同时间点取样检测内毒素浓度，加标水样和不加标样品制备完成即在20
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25℃环境中检测内毒素浓度；S3、根据S2的检测结果计算回收率R，回收率R的范围满足50％≤R≤200％时的时间记为有效的保留时间。3.根据权利要求2所述的内毒素保留时间的估算方法，其特征在于，样品为生产过程中的样品或生物原液；其中生产过程中的样品为亲和层析样品、深层过滤样品、病毒灭活样品或超滤/渗滤样品。4.根据权利要求2所述的内毒素保留时间的估算方法，其特征在于，内毒素标准品为CSE，S1中加标水样和加标样品中CSE的终浓度均为5EU/mL。5.根据权利要求2所述的内毒素保留时间的估算方法，其特征在于，S2中所有加标样品的储存条件和保留时间点如下表所示：6.根据权利要求2所述的内毒素保留时间的估算方法，其特征在于，S2中采用动态浊度法检测内毒素浓度，具体为：(1)制备CSE标准曲线将50EU/mL的CSE溶液梯度稀释成5EU/mL、0.5EU/mL、0.05EU/mL和0.005EU/mL，制备CSE标准曲线，通过反应时间和理论值拟合标准曲线，公式为log(RT)＝b+a*log(EU)，其中a为斜率、∣a∣范围为0.100...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘友文，杜凤昆，陈琪，
申请(专利权)人：无锡药明生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：