基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂及其应用制造技术

基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂及其应用，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为氯金酸，试剂2为超纯水，其中含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾。本发明专利技术技术方案不同于现有技术在体外合成金纳米结构后，再通过其他特异性化合物分子捕获肿瘤细胞进行鉴定。本发明专利技术在肿瘤细胞中通过液

【技术实现步骤摘要】
基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂及其应用


[0001]本专利技术属于肿瘤检测
，具体涉及一种基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测的组合试剂及其应用。

技术介绍

[0002]当前对于肿瘤的表面增强拉曼光谱检测方法是通过在体外合成具有表面增强拉曼光谱特性的纳米颗粒或者纳米片，然后与肿瘤组织共孵育，通过肿瘤细胞或者正常细胞主动摄取纳米颗粒后，进行拉曼光谱检测并分类。这种体外合成纳米颗粒导入细胞的方法的操作是十分复杂的，对于表面官能团是不可控的，导入细胞内会导致细胞在细胞内分布不均匀，通常会通过胞吞摄入到溶酶体中。由于酸性环境和不均匀的分布导致不能获得稳定可信的拉曼光光谱信息，最终导致肿瘤分类检测的失败。并且很难对离体肿瘤组织进行分析鉴定。
[0003]另一方面，对于肿瘤检测的荧光探针也是如此，需要通过体外引入的方式对肿瘤进行成像检测，导致的结果和上述情况是一致的。或者通过引入金离子在细胞的线粒体中通过ROS进行细胞原位合成金纳米簇，实现肿瘤的荧光成像。这种通过细胞内线粒体ROS合成金纳米簇后产生荧光检测是存在荧光背景的，是由于比较小的斯托克斯位移，半峰宽比较宽。这就导致测出来的信号是不准确的。具体来说，现有技术存在如下缺陷：
[0004]首选，在体外环境中通过化学合成的方法合成金纳米棒，通过对金纳米棒表面修饰，对肿瘤细胞进行捕获。这种方法极为复杂，可控性差，对肿瘤的捕获效率不高，表面增强拉曼光谱信号并不稳定，并且不能通过可调浓度使肿瘤产生近红外荧光实现肿瘤可视化。
[0005]其次，虽然现有技术中能够采用柠檬酸钠体外合成金纳米颗粒，但循环肿瘤细胞相对而言比较难与金纳米颗粒特异性结合。
[0006]第三，只能对体液进行表面增强拉曼光谱测定，不能对实体瘤进行检测。
[0007]第四，体外合成的金银纳米核壳结构，合成步骤复杂，银纳米结构容易被氧化影响拉曼光谱测定的稳定性，另外mi
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RNA通常存在于肿瘤细胞内的细胞质中，所以纳米探针很难对肿瘤细胞内的物质进行检测，只有在细胞存活的情况下，细胞主动胞吞进入细胞，之后可能会实现肿瘤细胞的检测，但是这种过程是特别长的，可能会有蛋白冠的存在，或者其他物质遮住纳米材料表面修饰的特异性靶标，导致很难的测到特异性的肿瘤细胞表面增强拉曼光谱信号。
[0008]第五，利用石墨烯在细胞内还原金纳米颗粒，其中注意的是，石墨烯本身具有还原性，是通过石墨烯对金的还原，并且由于石墨烯具有表面增强拉曼光谱特性，并不能确定具体是什么结构的增强。
[0009]第六，通过在3t3成纤维细胞中生成纳米金，具有表面增强拉曼光谱特性测定，并不能对肿瘤细胞进行测定，并非在肿瘤细胞中生成金纳米材料。测出来的拉曼光谱信号并不均一稳定。
[0010]第七，在细胞核内产生金纳米颗粒，细胞核内并没有区分肿瘤细胞和正常细胞的
表面增强拉曼光谱特征物，并且并不能对组织进行拉曼光谱分析，以及通过可调浓度实现肿瘤细胞/组织的近红外荧光成像。
[0011]第八，从柠檬草植物的提取物合成金纳米颗粒，并不是在细胞内合成的，并且合成出来的金纳米结构属于一种金三角片，表面是金的(111)晶面，表面增强拉曼光谱效应是相对较差。
[0012]最后，纳米带的三角形纳米板的侧面和斜坡在红外区域的四极共振模式中表现出等离子体激元，但是该方案合成时间长，金纳米结构属于一种金三角片，表面是金的(111)晶面，表面增强拉曼光谱效应是相对较差，只具有强的光热效应，不能有效产生表面增强拉曼信号，并不能实现肿瘤细胞的测定和检测。

技术实现思路

[0013]解决的技术问题：针对上述存在的问题，本专利技术提供一种基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测的组合试剂及其应用，通过调节组合试剂的浓度和孵育时间，让肿瘤细胞内产生具有超窄半峰宽和超长斯托克斯位移的近红外发射的金纳米结构，或者等离子体共振金纳米结构(具有表面增强拉曼光谱性质的纳米金)，本领域技术人员通过这种荧光现象对肿瘤和非肿瘤进行鉴定。此外，可以利用肿瘤细胞内产生等离子体共振金纳米金结构，进一步测定其拉曼光谱，并且通过PCA分析对肿瘤细胞和非肿瘤细胞进行鉴定(或者肿瘤组织和非肿瘤组织)。
[0014]技术方案：基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为氯金酸，试剂2为超纯水，其中含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾。
[0015]上述氯金酸的浓度为20μm
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1000μm。
[0016]优选的，上述氯金酸的浓度为50μm
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100μm。
[0017]还包括刺激药物，所述刺激药物为盐酸、肝素、聚乙二醇或甘油三酯。
[0018]上述试剂2中每100mL超纯水配伍氯化钠6
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9g，氯化钾0.2g
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0.5g、磷酸氢二钠1g
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3g、磷酸二氢钾0g
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2g。
[0019]优选的，上述试剂2中每100mL超纯水配伍氯化钠6g，氯化钾0.3g、磷酸氢二钠1g、磷酸二氢钾1g。
[0020]上述试剂1和试剂2的质量比例为1:(200
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2000)。
[0021]优选的，上述试剂1和试剂2的质量比例为1:1000。
[0022]上述组合试剂在制备基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测产品中的应用。
[0023]基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测产品，有效成分为上述组合试剂。
[0024]有益效果：首先，本专利技术技术方案不同于现有技术在体外合成金纳米结构后，再通过其他特异性化合物分子捕获肿瘤细胞进行鉴定。本专利技术在肿瘤细胞中通过液
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液相分离，合成金纳米结构，具有很好的特异性，并且没有体外合成的步骤，方便简单。其次，本专利技术合成方便快捷，成本很低，不需要加入其他危险化学品。第三，本专利技术简单的操作就可实现肿瘤组织/细胞近红外荧光的标记和表面增强拉曼光谱的分子识别和检测。最后，本专利技术重复性高，能实现单细胞水平对肿瘤细胞的化学分子的分析、鉴定和成像。
附图说明
[0025]图1为金纳米透射电镜图；
[0026]图2为金纳米结构的荧光光谱图；
[0027]图3为肿瘤组织的表面增强拉曼光谱图；
[0028]图4为肿瘤组织和正常组织PCA分类。
具体实施方式
[0029]下面结合附图说明和具体实施方式对本专利技术作进一步详细的描述。
[0030]实施例1：
[0031]1、配制不同浓度的溶液1(氯金酸溶液)和溶液2(氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和液
‑
液相分离刺激药物)。具体成分如下：
[0032]溶液1
[0033]名称剂量氯金酸20μm
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1000μm
[0034]溶液2
[0035]名称剂量氯化钠6g
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9g氯化钾0.2g
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0.5g磷酸氢二本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂，其特征在于，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为氯金酸，试剂2为超纯水，其中含有氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾。2.根据权利要求1所述基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂，其特征在于，所述氯金酸的浓度为20μm
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1000μm。3.根据权利要求2所述基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂，其特征在于，所述氯金酸的浓度为50μm
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100μm。4.根据权利要求1所述基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂，其特征在于，还包括刺激药物，所述刺激药物为盐酸、肝素、聚乙二醇或甘油三酯。5.根据权利要求1所述基于原位胞内矿化的多维肿瘤检测组合试剂，其特征在于，所述试剂2中每100mL超纯水配伍氯化钠6
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9g，氯化钾0.2 g
‑
0.5 g、磷酸氢二...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪梅，刘皓，姜晖，刘晓辉，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：