一种人羊水干细胞系的建立方法技术

本发明专利技术涉及一种人羊水干细胞系的建立方法，该方法包括以下步骤：１）羊水干细胞的原代分离培养；２）将分离培养的原代羊水干细胞进行分离纯化；３）将分离得到的羊水干细胞经过单克隆筛选和扩增培养，建立羊水干细胞系。本发明专利技术提供了一种快速、有效、安全、可实现人羊水干细胞体外长期扩增、可为组织工程研究提供新的种子细胞来源以及有望作为种子细胞进行临床应用的人羊水干细胞系的建立方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种细胞系的建立方法，尤其涉及。
技术介绍
干细胞具有自我更新能力，在一定的诱导条件下，可分化为具有特殊功能的细胞。 在过去十几年间，分离和培养胚胎干细胞(ES细胞)的成功为基础研究和细胞移植治疗提 供了新的机遇。然而社会及伦理问题制约了 ES细胞的研究及应用。此外，体外培养ES细胞面临 着极大的技术挑战，ES细胞的培养需要饲养层及昂贵的细胞因子，且在体外培养过程中常 会发生基因组突变。更重要的是ES细胞体外移植后可能形成肿瘤，目前尚无解决办法。而 骨髓间充质干细胞(MSC)等成体干细胞分离培养后数量有限，体外增殖分化能力有待进一 步证明。因此，很多研究者都在尝试寻找新的干细胞来源，试图建立一种干细胞系，既具有 增殖速度快，体外分化能力强的特点，又摆脱伦理道德问题。人的羊水应用于产前诊断，已 经有七十多年的历史。2003年，Prusa等在羊水中发现Oct-4阳性细胞，提示羊水中可能存 在多能干细胞(Prusa AR,Marton E, Rosner M, et al. Oct-4-expressing cells in human amniotic fluid -.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人羊水干细胞系的建立方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：　　１）羊水干细胞的原代分离培养；　　２）将分离培养的原代羊水干细胞进行机械分离纯化；　　３）将分离纯化后的羊水干细胞建立羊水干细胞单克隆，后进行扩大培养，建立羊水干细胞系，其具体实现方式是：　　３．１）取初步纯化的细胞制成悬液，台盼蓝染色后计数测定活细胞浓度；　　３．２）用培养液将细胞悬液稀释成不同浓度，并于３７℃、５％ＣＯ↓［２］培养箱中培养；培养基成份为α－ＭＥＭ＋１５％ＦＢＳ＋２％谷胺酰胺＋１％青链霉素；３．３）待细胞贴壁后，显微镜下观察挑选并标记只含一个细胞的孔，继续培养；　　３．４）培养期间，根据培养液中ｐＨ值的变化情况...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王华岩，陈帅，王晗，窦忠英，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]