一种检测他达拉非中遗传毒性杂质的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测他达拉非中遗传毒性杂质的方法，所述方法通过HPLC

【技术实现步骤摘要】
一种检测他达拉非中遗传毒性杂质的方法


[0001]本专利技术涉及到他达拉非中遗传毒性杂质测定方法，该方法采用HPLC
‑
MS液质联用技术测定他达拉非中遗传毒性杂质胡椒醛。

技术介绍

[0002]胡椒醛是他达拉非合成过程中使用的起始原料之一，胡椒醛可能作为残留杂质存在于最终药物中。胡椒醛既属于小分子芳香醛又含有环氧结构，属于具有遗传毒性致癌性的杂质。胡椒醛化学结构如下式所示。
[0003][0004]他达拉非，英文名为Tadalafil，是礼来公司开发的一种口服新型磷酸二酯酶(V)抑制剂，其商品名为希爱力。主要治疗男性勃起功能障碍，于2002年获得欧盟批准，2003年11月经FDA批准在美国上市，2005年批准在中国上市。化学名称：6
‑
(1,3
‑
苯并间二氧戊环
‑5‑
基)
‑
2,3,6,7,12,12a
‑
六氢化
‑2‑
甲基
‑
(6R,12aR)
‑
吡嗪并[1
’2’
:1,6]吡啶并[3,4
‑
b]吲哚
‑
1,4
‑
二酮(CAS#：171596
‑
29
‑
5)，其化学结构如下式所示。
[0005][0006]为了控制成品的质量，需要对他达拉非及其遗传毒性杂质进行分离测定，检查遗传毒性杂质是否超过限度。但是，目前还没有公开的方法报道分离测定他达拉非及其遗传毒性杂质胡椒醛的方法。因此开发一种分离测定他达拉非及其遗传毒性杂质的方法对于实现对他达拉非的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是提供一种具有灵敏度高、重现性好、准确高、操作简单、分析速度快的检测他达拉非中遗传毒性杂质胡椒醛的方法。
[0008]为实现以上目的，本专利技术检测他达拉非中遗传毒性杂质胡椒醛的方法包括以下步骤：
[0009](1)供试品溶液的制备：取供试品，加乙腈振摇使溶解，用体积浓度为10％～90％
的甲醇水溶液稀释，制备成供试品溶液；
[0010](2)对照品溶液的制备：取胡椒醛，加乙腈振摇使溶解后，用体积浓度为10％～90％的甲醇水溶液稀释，制备成对照品溶液；
[0011](3)测定方法：取供试品溶液与对照品溶液，分别注入HPLC
‑
MS液质联用仪，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度为50％～60％的甲醇或乙腈水溶液为流动相；质谱条件：以APCI为离子源，扫描类型为MRM；记录谱图，按外标法以峰面积计算胡椒醛含量。
[0012]上述步骤(1)和(2)中，优选用体积浓度40％～60％的甲醇水溶液稀释。
[0013]上述步骤(1)中，优选所述供试品溶液的浓度为0.015～0.15mg/mL。
[0014]上述步骤(2)中，优选所述对照品溶液中胡椒醛的浓度为1～10ng/mL。
[0015]上述步骤(3)中，优选以体积浓度为55％的甲醇水溶液为流动相。
[0016]上述步骤(3)中，在正离子模式条件下胡椒醛的离子对为m/z151.05
→
93.15，他达拉非离子对为m/z388.25
→
262.15。
[0017]上述步骤(3)中，优选HPLC
‑
MS检测的柱温为35～45℃，流速为0.20～0.30mL/min。
[0018]本专利技术的有益效果如下：
[0019]本专利技术采用HPLC
‑
MS液质联用技术检测他达拉非原料药中遗传毒性杂质胡椒醛残留，该方法灵敏度高，检测限可低至7.5ppm(即0.5ng/ml)；应用范围宽，适用于工艺过程中使用到胡椒醛的药物，进行胡椒醛残留量测定；准确度高，经方法验证，回收率在105％～115％之间；重现性好，经实验室不同分析人员、在不同时间配制样品溶液，在相同色谱条件下进行方法验证，测定结果的RSD为1.38％；耐用性好，通过调整柱温、流速、流动相比例，更换不同色谱柱，均能达到理想的测定效果，具有较好的可操作性和稳定性。
附图说明
[0020]图1是胡椒醛母离子流图谱。
[0021]图2是胡椒醛产物离子流图谱。
[0022]图3是他达拉非母离子流图谱。
[0023]图4是他达拉非产物离子流图谱。
[0024]图5是胡椒醛与他达拉非系统适用性溶液。
[0025]图6是胡椒醛线性关系图。
具体实施方式
[0026]下面结合附图和实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护欲范围不仅限于这些实施例。
[0027]实施例1
[0028]本实施例检测他达拉非中潜在遗传毒性杂质胡椒醛的方法包括下述步骤：
[0029](1)供试品溶液的制备：取供试品约25mg，精密称定，置20mL容量瓶中，加乙腈振摇使溶解，再加体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置20mL容量瓶，加体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，制备成供试品溶液。
[0030](2)对照品溶液的制备：取胡椒醛对照品适量，精密称定，加乙腈适量振摇使溶解
后，用体积浓度为50％的甲醇水溶液定量稀释制成每1mL中含5ng的对照品溶液。
[0031](3)测定方法：精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入HPLC
‑
MS液质联用仪，记录谱图，按外标法以峰面积计算含量。
[0032]色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度为55％的甲醇水溶液为流动相，柱温40℃，流速为0.25mL/min，进样量15μL。
[0033]质谱条件：以APCI为离子源，扫描类型为MRM；在正离子模式条件下胡椒醛的离子对为m/z 151.05
→
93.15(见图1和图2)，他达拉非离子对为m/z388.25
→
262.15(见图3和图4)。
[0034]本实施例对上述检测方法进行了专属性、定量限、检测限、线性范围、精密度、重复性、中间精密度、准确度、溶液稳定性、耐用性的验证，具体步骤如下：
[0035]1、专属性试验
[0036]空白溶液：体积浓度为50％的甲醇水溶液。
[0037]对照品溶液：取胡椒醛约10mg，精密称定，置20mL容量瓶中，加入乙腈适量振摇使溶解，再加体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取上述溶液1mL，置100mL容量瓶中，加体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液1mL，置100mL容量瓶中，加体积浓度为50％的甲醇水溶液释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。再精密量取对照品储备液1mL，置10mL容量瓶中，加体积浓度为50％的甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测他达拉非中遗传毒性杂质的方法，其特征在于，该方法采用HPLC
‑
MS液质联用技术进行测定，包括以下步骤：(1)供试品溶液的制备：取供试品，加乙腈振摇使溶解，用体积浓度为10％～90％的甲醇水溶液稀释，制备成供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取胡椒醛，加乙腈振摇使溶解后，用体积浓度为10％～90％的甲醇水溶液稀释，制备成对照品溶液；(3)测定方法：取供试品溶液与对照品溶液，分别注入HPLC
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MS液质联用仪，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积浓度为50％～60％的甲醇或乙腈水溶液为流动相；质谱条件：以APCI为离子源，扫描类型为MRM；记录谱图，按外标法以峰面积计算胡椒醛含量。2.根据权利要求1所述的检测他达拉非中遗传毒性杂质的方法，其特征在于，步骤(1)和(2)中，用体积浓度40％～60％的甲醇水溶液稀释。3.根据权利要求1所述的检测他达拉非中遗传毒性杂质的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述供试品溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛会娟，王亦群，张永利，宋彦妮，
申请(专利权)人：杨凌吉泰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：