基于Cd胁迫下紫茉莉凋落物浸提液化感抑制作用评价方法技术

本发明专利技术属于评价Cd胁迫下外来入侵种对本地种的化感效应与生态防控技术领域，公开了紫茉莉凋落叶浸提液对本地种白菜的化感效应，具体涉及一种抑制本地种白菜种子萌发和幼苗生长的化感效应的评价。利用外来入侵植物修复Cd污染土壤时，在Cd胁迫下，紫茉莉的化感作用可能是将其应用于重金属污染土壤修复的最大障碍，评价紫茉莉凋落叶浸提液对本地种的化感效应，对评估将紫茉莉运用于Cd污染土壤修复的生态风险提供理论依据。态风险提供理论依据。态风险提供理论依据。

【技术实现步骤摘要】
基于Cd胁迫下紫茉莉凋落物浸提液化感抑制作用评价方法


[0001]本专利技术属于评价Cd胁迫下外来入侵种对本地种的化感效应与生态防控
，具体涉及一种基于紫茉莉凋落叶浸提液抑制本地种白菜种子萌发和幼苗生长的评价方法。

技术介绍

[0002]Cd是我国土壤污染中占重大比例的无机污染中污染最为严重的元素，此外，Cd的环境承载容量较小，易被植物吸收，在植物中积累的浓度越高，对植物的伤害就越大。Cd在土壤中扩散、迁移、稀释速度缓慢，经由食物链在人体和动植物体内积累，危害人体及动植物体健康并且食品安全得不到保证，因此，Cd污染土壤的修复尤显重要且紧迫。
[0003]外来入侵种严重威胁着生物多样性和生态安全，地处边境的云南气候条件优越，更容易受到入侵植物的侵害，已传入的入侵植物正在扩散危害，新的危险性入侵物种也不断出现并构成潜在威胁。外来入侵种成功入侵的关键是分泌次生代谢物对本地种产生化感效应，主要是抑制本地种的种子萌发和幼苗生长，种子萌发和幼苗生长是植物生命周期的关键环节，是植物个体生长和群落形成的关键因素。
[0004]外来入侵植物紫茉莉不仅对Cd有较强的耐受能力，其富集量也接近超富集植物的标准，尤其是在高浓度环境中依然能保持较高生物量，尤其叶片繁茂，叶片最先凋落，凋落后经雨水淋溶将化感物质释放出来，化感效应是将紫茉莉应用于Cd土壤污染修复的最大障碍，因此，评价凋落叶浸提液对本地种种子萌发和幼苗生长的影响具有重要意义，对评估将紫茉莉运用于Cd污染土壤修复的生态风险提供理论依据。

技术实现思路
/>[0005]本专利技术的目的在于提供基于Cd胁迫下紫茉莉凋落物浸提液化感抑制作用评价方法，用受试植物白菜来确定紫茉莉凋落叶浸提液对其的化感抑制作用，对评估将紫茉莉运用于Cd污染土壤修复的生态风险提供理论依据。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：基于Cd胁迫下紫茉莉凋落物浸提液化感抑制作用评价方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
[0006]S1、制备紫茉莉凋落叶浸提液，备用；
[0007]S2、采用培养皿滤纸法，选取籽粒饱满、大小均匀的白菜种子，0.3％ KMnO4消毒25min，蒸馏水漂洗后，浸泡24h，取50粒均匀置于直径12cm的培养皿；
[0008]S3、将步骤S1制得的紫茉莉凋落叶浸提液分别添加到各培养皿中，每个处理重复4次，光照培养箱培养，每日光照培养12h温度26℃，黑暗培养12h温度24℃，相对湿度80％，并及时补充蒸馏水，保持滤纸湿润；
[0009]S4、从种子置床之日起观察，以胚根长度等于种子长度作为发芽标准，以第一颗种子萌发时间为该处理发芽始期，以后每天定期记录发芽种子数，当连续4天不再有种子发芽时作为发芽结束期。白菜种子培养7天后统计发芽率、发芽指数、发芽势和活力指数；
[0010]S5、在直径12cm的培养皿中铺两层滤纸，放入20粒胚根长度等于种子长度的本地
种种子，将步骤s1制得的紫茉莉凋落叶浸提液分别添加到各培养皿中，每个处理设4次重复，对照组加入蒸馏水，将培养皿置于智能人工气候箱中培养，每日光照12h，温度26℃，黑暗12h，温度24℃，相对湿度80％，7天后测定白菜幼苗的根长和苗高，由于每种处理下的发芽幼苗数不同，干质量换算成10株幼苗的质量，用万分之一天平进行测定；
[0011]S6、凋落叶浸提液处理7d后结束试验，测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量。SOD活性测定采用氮蓝四唑法；POD活性测定参照愈创木酚法；CAT活性测定参照紫外分光光度法；MDA含量测定采用硫代巴比妥酸加热显色法；可溶性蛋白含量测定采用考马斯亮蓝G250法；MDA含量含量测定采用硫代巴比妥酸加热显色可溶性糖含量测定采用蒽酮比色法。
[0012]步骤S1中，所述紫茉莉凋落叶浸提液的制备步骤为：
[0013]S11,收集培养了90天后自然枯落的紫茉莉凋落叶；
[0014]S12，将采集紫茉莉凋落叶用蒸馏水清洗3次，55℃烘干48h至质量恒定，剪成1
‑
2cm的碎片；
[0015]S13，按叶片与水1：10(w:v)的比例装入锥形瓶中，充分搅拌均匀后，在黑暗条件下，于恒温培养箱中25℃浸泡72h，间歇震荡；
[0016]S14，经纱布和定性滤纸过滤后取收集液即为100g
·
L
‑
1的紫茉莉凋落叶浸提液，用于本地种种子萌发和幼苗发育实验，4℃冰箱保存备用。
[0017]本专利技术的有益效果为：
[0018]1、本专利技术以本地种白菜为研究对象，通过测定分析不同Cd浓度的紫茉莉凋落物浸提液对白菜种子发芽和幼苗影响，分析紫茉莉凋落物对白菜种子和幼苗生长的化感作用，为评估将紫茉莉运用于Cd污染土壤修复的生态风险提供理论依据；
[0019]2、本专利技术利用外来入侵植物紫茉莉凋落叶浸提液对白菜化感抑制作用，形成了完整的评价体系，从种子萌发、幼苗生长、生理生化指标再到不同Cd浓度胁迫下的综合化感强度，及对幼苗化感平均敏感指数的影响；
[0020]3、本专利技术的紫茉莉凋落叶浸提液中含有能够抑制白菜种子萌发和幼苗生长的物质成分，尤其在低Cd浓度(1、4mg
·
kg
‑
1)的凋落叶浸提液中化感物质最多，受试白菜种子和幼苗均受到显著的抑制作用，高镉浓度胁迫(7、11mg
·
kg
‑
1)抑制作用达不到显著性差异水平。证实抑制效应的方法具有施放操作简便、实验成本低、对环境不会造成污染的优点。
附图说明
[0021]图1为不同Cd浓度胁迫下凋落物浸提液对白菜种子萌发的影响。
[0022]图2为不同Cd浓度胁迫下凋落物浸提液对白菜幼苗生长的影响。
[0023]图3为不同Cd浓度胁迫下凋落物浸提液对白菜生理生化指标的影响。
具体实施方式
[0024]下面结合图1
‑
3对本专利技术进一步说明，但本专利技术保护范围不局限所述内容。
[0025]为了清楚，不描述实际实施例的全部特征，在下列描述中，不详细描述公知的功能和结构，因为它们会使本专利技术由于不必要的细节而混乱，应当认为在任何实际实施例的开发中，必须做出大量实施细节以实现开发者的特定目标，例如按照有关系统或有关商业的
限制，由一个实施例改变为另一个实施例，另外，应当认为这种开发工作可能是复杂和耗费时间的，但是对于本领域技术人员来说仅仅是常规工作。
[0026]1、材料与方法
[0027]盆栽实验土采自昆明理工大学呈贡校区校园，除去枯枝落叶及石块，过5mm筛，置于温室晾干，用CdCl2
·
2.5H2O加入到未污染的校园土壤中，将Cd的含量设计为0、1、4、7、11mg
·
kg
‑
1(Cd2+浓度以纯Cd计)。土壤配比为校园土：沙土：腐殖土＝2：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于Cd胁迫下紫茉莉凋落物浸提液化感抑制作用评价方法，其特征在于，具体包括以下步骤：S1、制备紫茉莉凋落叶浸提液，备用；S2、采用培养皿滤纸法，选取籽粒饱满、大小均匀的白菜种子，0.3％KMnO4消毒25min，蒸馏水漂洗后，浸泡24h，取50粒均匀置于直径12cm的培养皿；S3、将步骤S1制得的紫茉莉凋落叶浸提液分别添加到各培养皿中，每个处理重复4次，光照培养箱培养，每日光照培养12h温度26℃，黑暗培养12h温度24℃，相对湿度80％，并及时补充蒸馏水，保持滤纸湿润；S4、从种子置床之日起观察，以胚根长度等于种子长度作为发芽标准；S5、在直径12cm的培养皿中铺两层滤纸，放入20粒胚根长度等于种子长度的本地种种子，将步骤S1制得的紫茉莉凋落叶浸提液分别添加到各培养皿中，每个处理设4次重复，对照组加入蒸馏水，将培养皿置于智能人工气候箱中培养，每日光照12h，温度26℃，黑暗12h，温度24℃，相对湿度80％，7天后测定白菜幼苗的根长和苗高，由于每种处理下的发芽幼苗数不同，干质量换算成10株幼苗的质量，用万分之一天平进行测定；S6、凋落叶浸提液处理7d后结束试验，测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、丙二醛(MDA)含量、可溶性蛋白含量、可溶性糖含量。2.根据权利要求1所述的基于Cd胁迫下紫茉莉凋落物浸提液化感抑制作用评价...

【专利技术属性】
技术研发人员：李启婷，王宏镔，王海娟，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：