一种氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐中亚精胺含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐中亚精胺含量的方法，所述方法为通过测定亚精胺盐酸盐和内标物对苯二甲酸二甲酯在氘代二甲基亚砜中的定量峰，采用核磁内标法进行分析，实现亚精胺盐酸盐中有效成分游离亚精胺含量的测定。该方法简易快捷、操作性好、成本低、准确性高，在测定目标含量的同时实现了本品的结构鉴别，测试时无需本品对照品，经济高效。经济高效。

【技术实现步骤摘要】
一种氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐中亚精胺含量的方法

：
[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐中亚精胺含量的方法。

技术介绍
：
[0002]亚精胺，是一种广泛存在生物体内的多胺。亚精胺可抑制神经元合成酶，结合并沉淀DNA；也可用于纯化DNA结合蛋白，刺激T4聚核苷酸激酶活性。亚精胺最早是从精液中分离而被发现的，但是实际上它是生物体内广泛存在的一种物质，全麦食物、海带、蘑菇、豆类和全谷类均富含这种成分。
[0003]2013年9月1日，德国和奥地利的科学家合作研究表示，亚精胺或可阻止老年痴呆症发病。2016年，日本科学家大隅良典就曾因阐明细胞自噬机制而获得诺贝尔生理学与医学奖。他认为，人体细胞会随着年龄的增加而逐渐衰老，部分蛋白结构会出现功能障碍成为垃圾，如果不及时清理，不仅会加速衰老的，还会带来一系列衰老疾病，亚精胺可通过加强细胞自噬功能，维持基因稳定。
[0004]亚精胺还具有提高记忆力、保护心血管、调节神经等多种生物活性，在心血管疾病和老年痴呆症的预防和治疗方面具有良好的应用潜力，在食品添加剂、保健品和医药领域具有潜在的应用价值。由于亚精胺原料和产品价格高昂，在工业生产和产品过程生产过程中，高效准确的亚精胺含量检测方法对其质量控制具有重要意义。
[0005]国内亚精胺由于熔点低等问题，不易储存和运输，一般制备成亚精胺三盐酸盐形式，其英文名称为Spermidine Hydrochloride。
[0006]亚精胺盐酸盐是高沸点、无紫外吸收的化合物，难以用GC法或配制紫外检测器的HPLC法直接进样进行本品中亚精胺含量的测定，若考虑GC或HPLC手段，GC手段下需要进行本品的游离预处理，HPLC手段下需要进行本品的衍生预处理或配制紫外检测器以外的其他检测器，无论是游离预处理或衍生预处理，都属于间接的手段，用间接手段检测含量，操作相对复杂，操作步骤多，其检测准确度可能会因此受到更多干扰因素的影响，操作的便捷性和检测的高效性都不是很理想。滴定法，即为加入过量的氢氧化钠首先将其游离、再利用盐酸标准溶液来返滴定，该滴定手段虽然被证实可行，但是其操作和计算比较复杂，便捷性不是特别理想。
[0007]综上分析，考虑使用核磁手段进行本品中亚精胺含量的检测。核磁共振技术在解析化合物的结构的同时，也能定量测定化合物的含量，即定量核磁共振技术(quantitative nuclear magnetic resonance，qNMR)。定量核磁共振技术是一种基于核磁共振原理的定量分析方法，原理是不同于化学环境的氢原子共振峰面积，只与其原子数有关。该方法收录于《美国药典》和《欧洲药典》，2010版《中国药典》也增加此方法。该方法快捷、不破坏样品，使用已知含量的普通化学物质替代待测组分的高纯度对照品为参比，相比于高效液相法、气质及液质联用等定量技术具有不受杂质响应值影响，能同时给出定性的结构信息和定量分
析结果，不依赖与被测物的高纯度标准品的优势，定量成本大大降低。利用定量核磁共振氢谱法，选择内标物代替使用目标测试物的标准品做外标的高效液相色谱法的研究具有重要意义。

技术实现思路
：
[0008]目前，关于亚精胺盐酸盐中有效成分游离亚精胺含量的检测方法至今未见报道。因此，提供一种高效、简便的检测方法是本领域急需解决的技术问题。
[0009]本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简单易于快速测定亚精胺盐酸盐中亚精胺含量的方法。
[0010]本专利技术采用的技术方案为一种氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐中亚精胺含量的方法。
[0011]进一步，将亚精胺盐酸盐和供试品内标物加入到溶解溶剂中，溶解完全并混匀即得供试液。
[0012]更进一步，所述内标物选自对苯二甲酸二甲酯、二苯乙腈，优选对苯二甲酸二甲酯。
[0013]更进一步，所述溶解溶剂为氘代二甲基亚砜。
[0014]进一步，选择氢谱实验模式，设置核磁共振波谱仪的参数，包括脉冲宽度、弛豫延迟时间、采样温度、采样次数。
[0015]更进一步，所述脉冲宽度设为5.95us。
[0016]更进一步，所述弛豫延迟时间≥60s，优选60s。
[0017]更进一步，所述采样温度为25～40℃，优选28℃；
[0018]更进一步，所述单次采集时间≥2s，优选2s；
[0019]更进一步，所述采集次数≥16次(要求为4的整数倍数)，优选16次。
[0020]进一步，按设置好的核磁共振波谱仪的参数后，进样供试液实施核磁氢谱的采集，记录原始FID谱图并对原始图谱进行处理分析(包括必要的相位校正、基线调整、峰化学位移的标示)，分别对内标物甲基质子信号和供试品亚甲基质子信号峰进行积分。
[0021]更进一步，按照内标法进行亚精胺盐酸盐供试品中亚精胺含量的计算，计算公式如下：
[0022]亚精胺含量＝100％*A
s
*W
r
*C
r
*6*M
亚精胺
/(A
r
*W
s
*M
r
*4)，其中：
[0023]A
s
代表供试液图谱里供试品亚甲基质子信号峰的积分数；
[0024]A
r
代表供试液图谱里内标物甲基质子信号峰的积分数；
[0025]W
r
代表供试液配制时内标物的称样量，mg；
[0026]W
s
代表供试液配制时供试品的称样量，mg；
[0027]C
r
代表内标物的标示含量；
[0028]M
亚精胺
代表游离亚精胺的摩尔分子量；
[0029]M
r
代表内标物的摩尔分子量。
[0030]本专利技术的有益效果在于，本专利技术公开了一种氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐中亚精胺的方法，该方法采用核磁内标法进行分析，该方法简易快捷、操作性好、成本低、准确性高，在测定亚精胺含量的同时实现了本品的结构鉴别，测试时无需本品对照品，经济
高效。
附图说明
[0031]图1实施例1中供试品结构中的定量目标质子在结构中的位置图
[0032]图2实施例1中内标物对苯二甲酸二甲酯的定量目标质子在结构中的位置图
[0033]图3实施例1中的核磁氢谱图谱
[0034]图4实施例2中内标物二苯乙腈的定量目标质子在结构中的位置图
[0035]图5实施例2中的核磁氢谱图谱
具体实施方式
[0036]下面结合具体实施例对本专利技术的
技术实现思路
作进一步的阐述，其目的是为了更好的理解本专利技术的内容，但本专利技术的保护范围不限于此。
[0037]实施例1氢核磁定量分析技术
[0038]本实验为氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐供试品中亚精胺的含量。
[0039]具体实施方式如下：
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氢核磁定量分析技术测定亚精胺盐酸盐中亚精胺含量的方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：(1)供试液配制，将内标物对苯二甲酸二甲酯和供试品亚精胺盐酸盐加入到溶解溶剂氘代二甲基亚砜中，溶解完全并混匀即得供试液。(2)设置核磁共振波谱仪的参数，包括脉冲宽度、弛豫延迟时间、采样温度、采样次数。(3)进样供试液实施核磁氢谱的采集，记录原始FID谱图并对原始图谱进行处理分析，分别对内标物甲基质子信号和供试品亚甲基质子信号峰进行积分。(4)按照内标法计算亚精胺盐酸盐供试品中亚精胺的含量。2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，核磁共振波谱仪的参数设置主要包括，脉冲宽度设为5.95us，弛豫延迟时间≥60s，采样温度为25～40℃，单次采集时间≥2s，采集次数≥16次。3.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，内标法计算公式为：亚精胺...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉玉，孙梦梦，
申请(专利权)人：尚科生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：