一种活性寡肽RYIVPL及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种活性寡肽RYIVPL及其制备方法和应用。该活性寡肽为RYIVPL，氨基酸序列为：Arg

【技术实现步骤摘要】
一种活性寡肽RYIVPL及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物活性肽
，尤其是涉及一种活性寡肽RYIVPL及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]肥胖已成为全球性的公众健康问题。许多慢性疾病包括动脉粥样硬化、心血管疾病、II型糖尿病等均与肥胖有关。能量摄入和能量支出不平衡是导致个体超重肥胖的直接原因。因此，为了预防肥胖，限制过多的能量摄取，即限制摄食量是最佳的手段。机体摄食中枢下丘脑和消化道是机体控制摄食调节的关键部位，其中分布着许多与摄食调节有关的脑肠肽。胆囊收缩素(cholecystokinin，CCK)是经典脑肠肽中的一员，可调节机体产生饱感信号，减少机体的摄食量，从而达到抑制食欲的作用。现有研究已表明CCK的分泌受膳食因素调控。因此，可以通过膳食调控肠道CCK的分泌进而改善或缓解肥胖及相关的慢性疾病。
[0003]食源性生物活性肽是一种常见的膳食因子，具有易被人体消化吸收、食用安全性高等特点，在食品领域具有广泛的应用范围。鉴于CCK的重要作用及生物活性肽的诸多优点，寻找一种能够促进肠道CCK分泌的生物活性肽或提取物具有重要价值，对于预防肥胖或相关的慢性疾病具有重大经济和社会意义。

技术实现思路

[0004]基于现有技术中缺乏能够促进肠道CCK分泌的生物活性肽的现状，本专利技术提供一种具有促进CCK分泌功能的活性寡肽RYIVPL及其制备方法和应用。
[0005]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0006]本专利技术第一方面，提供一种具有促CCK分泌活性的活性寡肽，该活性寡肽为RYIVPL，氨基酸序列为：Arg
‑
Tyr
‑
Ile
‑
Val
‑
Pro
‑
Leu。
[0007]小麦蛋白主要是谷蛋白和醇溶蛋白。研究发现RYIVPL活性寡肽存在于小麦蛋白，来源于小麦Protein kinase domain
‑
containing protein(Uniprot蛋白登录号：A0A3B6D6B8)，因此，RYIVPL活性寡肽可以从小麦蛋白中制备。
[0008]本专利技术第二方面，提供编码所述活性寡肽的多核苷酸。
[0009]本专利技术第三方面，提供所述活性寡肽的制备方法，利用小麦蛋白进行生物酶解继而通过分离纯化的方法获得，或直接获得通过基因工程的方法人工合成，或直接通过化学合成制备。
[0010]通过基因工程的方法人工合成所述活性寡肽是本领域技术人员能够实现的技术方案，例如可以是以DNA重组技术为基础，通过合适的DNA模板来控制寡肽的序列合成。
[0011]关于从小麦蛋白中通过分离纯化的方法直接获得的方式可以为：基于给定的活性寡肽的氨基酸序列，采用生物学技术上常规的酶解、分离、纯化方法从小麦获取所述活性寡肽。
[0012]通过化学合成制备的方法为采用传统的固相合成法合成上述活性寡肽。
[0013]本专利技术第四方面，提供含有所述活性寡肽的酶解产物的制备方法，采用两步酶解法将小麦蛋白进行酶解，包括以下步骤：用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次酶解小麦蛋白，得到小麦蛋白酶解产物，即为含有所述活性寡肽的酶解产物。
[0014]在本专利技术的一个实施方式中，所述用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次酶解小麦蛋白的方法，包括如下步骤：
[0015]1)从小麦中提取小麦蛋白；
[0016]2)用所述胃蛋白酶酶解所述小麦蛋白，得到第一次酶解产物；
[0017]3)用所述胰蛋白酶酶解所述第一次酶解产物，得到小麦蛋白酶解产物。
[0018]在本专利技术的一个实施方式中，从小麦中提取小麦蛋白的方法包括以下步骤：
[0019]将小麦磨粉、脱脂，然后加入蒸馏水中，将温度设定50
‑
60℃，pH调到4
‑
6，用糖化酶预先处理0.5
‑
2h；冷却至室温后，将pH调至10
‑
12进行蛋白提取，结束后离心取上清液，将上清液pH调至4.4
‑
4.6，静置后离心，水洗；最后干燥得到小麦蛋白。
[0020]在本专利技术的一个实施方式中，所述胃蛋白酶或胰蛋白酶与所述小麦蛋白的质量比为1：10
‑
100。
[0021]在本专利技术的一个实施方式中，所述胃蛋白酶或胰蛋白酶的酶解条件为37℃酶解1
‑
4h。
[0022]在本专利技术的一个实施方式中，步骤3)得到小麦蛋白酶解产物后，还包括以下步骤：
[0023]将所述小麦蛋白酶解产物利用YMC ODS C18色谱柱进行分离，以5％甲醇去离子水溶液、30％甲醇去离子水溶液、80％甲醇去离子水溶液和100％甲醇溶液作为洗脱剂，以一定的流速进行洗脱、层析纯化，收集不同组分；然后检测不同组分对肠内分泌细胞CCK分泌的影响，选择刺激CCK分泌最高活性的组分为目的组分，即为含有所述活性寡肽的产物。
[0024]本专利技术第五方面，提供基于上述制备方法制备的活性寡肽的酶解产物。
[0025]本专利技术第六方面，提供所述活性寡肽、含有所述寡肽的酶解产物在制备具有如下1)
‑
4)中至少一种功能的产品中的应用：
[0026]1)促进CCK分泌；
[0027]2)减缓胃排空；
[0028]3)抑制食欲减少进食量；
[0029]4)预防或辅助治疗肥胖。
[0030]所述活性寡肽、含有所述活性寡肽的酶解产物具有促进CCK分泌功能，能够减缓胃排空、抑制食欲减少进食量、预防或辅助治疗肥胖。
[0031]本专利技术第七方面，提供一种产品，其中包含所述活性寡肽，或含有所述活性寡肽的酶解产物，所述产品具有如下1)
‑
4)中至少一种功能：
[0032]1)促进CCK分泌；
[0033]2)减缓胃排空；
[0034]3)抑制食欲减少进食量；
[0035]4)预防或辅助治疗肥胖。
[0036]所述产品包括食品、功能食品/保健食品和药品。
[0037]与现有技术相比，本专利技术的优点及有益效果体现在以下方面：
[0038]本专利技术筛选出了具有促进肠道CCK分泌的活性寡肽，该活性肽具有新型肽序列结
构，迄今尚未见其他相关报道；本专利技术所述活性肽可由食品蛋白质小麦蛋白制备得到，具有安全无毒副作用的优点；所述活性寡肽不容易受胃肠道中胃蛋白酶和胰酶的降解，具有较好的稳定性，从而最大限度的发挥促CCK分泌活性；本专利技术所述活性寡肽分子量小于1000Da，分子量小，除了具有促进肠道CCK分泌活性，还容易被机体吸收，具有良好的营养功能。本专利技术提供的活性寡肽或含所述寡肽的酶解产物的制备方法简单、易于操作，便于工业化大规模生产，应用前景广阔。
附图说明
[0039]图1为RYIVPL活性寡肽对STC
‑
1细胞活力的影响；
[0040]图2为RYIVPL活性寡肽对S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有促进胆囊收缩素分泌的活性寡肽，其特征在于，该寡肽为RYIVPL，氨基酸序列为：Arg
‑
Tyr
‑
Ile
‑
Val
‑
Pro
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Leu。2.编码权利要求1所述活性寡肽的多核苷酸。3.权利要求1所述活性寡肽的制备方法，其特征在于，直接通过化学合成法制备获得，或通过基因工程的方法人工合成，或从小麦蛋白中通过生物酶解和分离纯化的方法获得。4.含有权利要求1所述活性寡肽的酶解产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：用胃蛋白酶和胰蛋白酶依次酶解小麦蛋白，得到小麦蛋白酶解产物，即为含有权利要求1所述活性寡肽的酶解产物。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，从小麦中提取小麦蛋白的方法包括以下步骤：将小麦磨粉、脱脂，然后加入蒸馏水中，将温度设定50
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60℃，pH调到4
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6，用糖化酶预先处理0.5
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2h；冷却至室温后，将pH调至10
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12进行蛋白提取，结束后离心取上清液，将上清液pH调至4.4
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4.6，静置后离心，水洗；最后干燥得到小麦蛋白。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述胃蛋白酶或胰蛋白酶与所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：管骁，宋洪东，王擎宇，邵诸伟，汪新月，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：