一种用于HLA基因分型的扩增引物组、试剂盒及方法技术

本发明专利技术属于基因检测领域，具体涉及一种用于HLA基因分型的扩增引物组、试剂盒及方法，提供的HLA基因扩增引物组，包括如下引物组中至少一组引物组组成的混合物：所述引物组的核苷酸序列如SEQ ID NO.1

【技术实现步骤摘要】
一种用于HLA基因分型的扩增引物组、试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于基因检测领域，具体涉及一种用于HLA基因分型的扩增引物组、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]HLA(human leukocyte antigen)表示人类白细胞抗原，是编码主要组织相容性复合体(MHC)的基因，位于6p21.31的区域，包含了一系列紧密连锁的基因座。与人类的免疫系统功能密切相关。HLA全长约3.6M,含有220多种功能不同的基因，是目前已知的人类染色体中基因密度最高，多态性最为丰富的区域。HLA分型已用于组织配型，器官移植、疾病相关性研究、人类学和法医学等领域。
[0003]HLA分型过去主要采用血清学和细胞学方法，随着PCR技术，基因芯片技术等分子生物学技术的发展，已建立了从DNA水平上进行分型的HLA基因分型技术，包括PCR
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SSOP(序列特异性寡核苷酸探针)、PCR
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RFLP(限制性片段长度多态性)、PCR
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SSP(序列特异性引物)、PCR
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SBT(Sanger测序)、基因芯片等。虽然，PCR
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SSOP、PCR
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RFLP和PCR
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SSP具有特异性高、结果简便容易判断等优势，但是需要对每个位点单独设计特异性的引物，实验成本高，检测通量小，相对于HLA这种高度多态性区域，难以用于规模检测。PCR
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SBT是直接通过Sanger测序的方法获得待测样本序列与数据库进行比对，进而获得HLA分型，目前是HLA分型的金标准。但是该方法需要对每个外显子区域进行单独PCR扩增测序，以目前常见的分型区域为例(包括HLA
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A/B/C的外显子2/3/4和HLA
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DRB1/DPB1/DQB1的外显子2/3，共15个外显子区域)，一个待测样本就需要进行15个PCR反应和15个测序反应。基因芯片技术由美国Affymetrix公司首先开发，与现有分型技术比较，具有集成化的优点、操作非常简便、灵敏度高等特点。但是，目前基因芯片还存在着仪器设备昂贵，方法有待标准化以及信号检测低导致结果分辨率低(只能测到2位)等不足。
[0004]因此，面对HLA分型遇到的问题，需要亟需得到一个通量高，操作简便，成本较低的方法，而高通量测序技术能够综合这些因素满足现在需求。目前，基于液相杂交技术的HLA基因分型的方法已有报道且已有产品面市，但是目标区域捕获率为70
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80％，导致检测准确性低，且在文库构建后，还需要进行液相杂交步骤，增加了成本和所需检测时间。

技术实现思路

[0005]因此，本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术中的HLA基因分型方法存在通量低、操作复杂或成本较高，难以满足检测的规模性和快捷性以及检测准确性和分辨率的缺陷，本专利技术提供了一种用于HLA基因分型的扩增引物组、试剂盒及方法，可对HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C、DRB1、DQB1、DPB1的6个基因进行单管多重PCR扩增，通量高、操作简单、成本低，进行检测分型，且精确度可达到6位或8位。
[0006]为此，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0007]一种HLA基因扩增引物组，包括如下引物组中至少一组引物组组成的混合物：
[0008]HLA
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A引物组：正向引物HLA
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AF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物HLA
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AR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0009]HLA
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B引物组：正向引物HLA
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BF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物HLA
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BR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
[0010]HLA
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C引物组：正向引物HLA
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CF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反向引物HLA
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CR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；
[0011]HLA
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DRB1引物组：正向引物HLA
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DRB1F1的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示，反向引物HLA
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DRB1R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；正向引物HLA
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DRB1F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，反向引物HLA
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DRB1R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；
[0012]HLA
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DPB1引物组：正向引物HLA
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DPB1F1的核苷酸序列如SEQ IDNO.11所示，反向引物HLA
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DPB1R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；正向引物HLA
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DPB1F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，反向引物HLA
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DPB1R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；
[0013]HLA
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DQB1引物组：正向引物HLA
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DQB1F1的核苷酸序列如SEQ IDNO.15所示，反向引物HLA
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DQB1R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；正向引物HLA
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DQB1F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，反向引物HLA
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DQB1R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。
[0014]在上述的引物组中，对于HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C基因，分别设计1组引物，对HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C基因的第1个外显子到第8个外显子区域进行扩增，如SEQ ID NO.1到SEQ ID NO.6。对于HLA
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DRB1、DQB1、DPB1基因，分别对每个基因设计2组引物，其中，在HLA
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DRB1扩增引物组中，采用第一组引物(HLA
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DRB1F1、HLA
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DRB1R1)扩增第1个外显子，采用第二组引物(HLA
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DRB1F2、HLA
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DRB1R2)扩增第2到第5个外显子区域；在HLA
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DPB1扩增引物组中，采用第一组引物(HLA
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DPB1F1、HLA
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DPB1R1)扩增第1到第2个外显子区域，采用第二组引物(HLA
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DPB1F2、HLA
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DPB1R2)扩增第3到第5个外显子区域；在HLA
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HLA基因扩增引物组，其特征在于，包括如下引物组中至少一组引物组组成的混合物：HLA
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A引物组：正向引物HLA
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AF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物HLA
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AR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；HLA
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B引物组：正向引物HLA
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BF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物HLA
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BR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；HLA
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C引物组：正向引物HLA
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CF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，反向引物HLA
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CR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；HLA
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DRB1引物组：正向引物HLA
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DRB1F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物HLA
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DRB1R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；正向引物HLA
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DRB1F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，反向引物HLA
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DRB1R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；HLA
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DPB1引物组：正向引物HLA
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DPB1F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，反向引物HLA
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DPB1R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；正向引物HLA
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DPB1F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，反向引物HLA
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DPB1R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；HLA
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DQB1引物组：正向引物HLA
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DQB1F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，反向引物HLA
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DQB1R1的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；正向引物HLA
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DQB1F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，反向引物HLA
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DQB1R2的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示。2.根据权利要求1所述的HLA基因扩增引物组，其特征在于，所述引物组混合时，所述正向引物混合摩尔比例HLA
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AF：HLA
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BF：HLA
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CF：HLA
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DRB1F1：HLA
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DRB1F2：HLA
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DPB1F1：HLA
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DPB1F2：HLA
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DQB1F1：HLA
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DQB1F2为(0.7
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0.9)：(0.7
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0.9)：(0.7
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0.9)：(0.8～1)：(0.8～1)：(0.7
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0.9)：(0.7
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0.9)：(0.8～1)：(0.8～1)；所述反向引物混合摩尔比例HLA
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AR：HLA
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BR：HLA
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CR：HLA
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DRB1R1：HLA
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DRB1R2：HLA
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DPB1R1：HLA
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DPB1R2：HLA
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DQB1R1：HLA
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DQB1R2为(0.7
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0.9)：(0.7
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0.9)：(0.7
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0.9)：(0.8～1)：(0.8～1)：(0.7
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0.9)：(0.7
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0.9)：(0.8～1)：(0.8～1)。3.根据权利要求1或2所述的HLA基因扩增引物组，其特征在于，所述引物组混合时...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋廷亚，刘海涛，刘枫，王银锋，
申请(专利权)人：上海奥根诊断技术有限公司，
类型：发明
国别省市：