一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法，检测引物对包含上游引物Hade467F和下游引物Hade865R，上游引物Hade467F的序列号如SEQ ID NO：1所示，下游引物Hade865R的序列号如SEQ ID NO：2所示，试剂盒包括检测引物对、荧光试剂和阳性对照，方法包括提取待测样品的基因组DNA，利用试剂盒中的引物对进行PCR扩增；本发明专利技术通过设计的引物，可实现对古菌Hadesarchaea的定量检测，同时具有灵敏度高、重复性好、准确度高的特点，定量检测线性范围广，可以快速鉴定检测各种环境样品中古菌Hadesarchaea的存在。测各种环境样品中古菌Hadesarchaea的存在。测各种环境样品中古菌Hadesarchaea的存在。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法


[0001]本专利技术涉及微生物检测
，尤其涉及一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]碳循环是指CO2、CH4等从大气进入生物圈、岩石圈、水圈，再回到大气的循环过程，包括碳固定、甲烷氧化、产甲烷、有机质降解等生物地球化学过程。CO2是碳循环的重要组成部分，同时也是最主要的温室效应气体之一，CO2介导的碳循环过程直接影响到全球变暖问题，也是实现我国碳达峰和碳中和目标的直接切入点。微生物直接驱动了环境中的碳循环过程，因此直接影响到大气中CO2这一温室气体的含量及分布。
[0003]古菌Hadesarchaea是广古菌门新发现的类群，也有研究认为其应该列为古菌的一个新门类，目前尚无定论。尽管如此，已有研究发现Hadesarchaea古菌在陆地和海底环境中广泛存在，在一些特殊的环境如矿区中也有分布，其在古菌群落结构中占有较高的相对丰度。另外，基因组预测分析显示，Hadesarchaea古菌可能通过一氧化碳脱氢酶途径(C1途径)被产甲烷菌和许多其他厌氧菌用于CO2固定或生产。基于以上研究，Hadesarchaea古菌可能在全球CO2循环中发挥着重要的作用，因此，检测Hadesarchaea古菌在不同环境中的分布状况对于深入探讨其在CO2介导的全球变暖中的贡献具有重要的意义。
[0004]目前关于Hadesarchaea古菌的检测手段大都是采用古菌的通用引物进行高通量测序来开展，研究的层面主要停留在Hadesarchaea古菌的相对丰度上，而对其绝对定量的研究匮乏，因此，本专利技术提出一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法，以解决现有技术中存在的问题。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术的目的在于提出一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法，该用于检测古菌Hadesarchaea的引物对、试剂盒及方法通过设计的引物，可实现对古菌Hadesarchaea的定量检测，同时具有灵敏度高、重复性好、准确度高的特点，定量检测线性范围广，可以快速鉴定检测各种环境样品中古菌Hadesarchaea的存在。
[0006]为实现本专利技术的目的，本专利技术通过以下技术方案实现：一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对，包括检测引物对，所述检测引物对包含上游引物Hade467F和下游引物Hade865R，所述上游引物Hade467F的序列号如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物Hade865R的序列号如SEQ ID NO：2所示。
[0007]一种用于检测古菌Hadesarchaea的试剂盒，包括如权利要求1所述的检测引物对。
[0008]进一步改进在于：试剂盒还包括SYBR Green Mix荧光试剂和阳性对照。
[0009]进一步改进在于：所述阳性对照为一种或多种，所述阳性对照为多种时包括古菌Hadesarchaea在不同浓度梯度下测得的扩增循环数Ct值，进而实现对古菌Hadesarchaea含量的定量检测。
[0010]一种检测古菌Hadesarchaea的方法，提取待测样品的基因组DNA，利用权利要求2
‑
4所述的试剂盒中的检测引物对进行PCR扩增。
[0011]进一步改进在于：包括以下步骤，提取待测样品的基因组DNA作为模板，加入检测引物对，进行PCR反应，反应结束后判断待测样品中是否含有古菌Hadesarchaea。
[0012]进一步改进在于：所述步骤具体包括先提取待测样品的基因组DNA作为模板，再加入检测引物对，与荧光试剂混合成扩增反应体系，进行荧光定量PCR反应，反应结束后当扩增曲线有典型荧光扩增曲线，且Ct值小于33，则待测样品中含有古菌Hadesarchaea，并对古菌Hadesarchaea进行荧光定量PCR检测；当扩增曲线无典型荧光扩增曲线，则待测样品中不含有古菌Hadesarchaea。
[0013]进一步改进在于：所述反应体系中每10μl扩增体系包括荧光试剂5μl、检测引物对5
‑
10μmol/L、所述样品的基因组DNA模板0.01
‑
0.2μg和余量超纯水。
[0014]进一步改进在于：所述反应体系反应过程包括95℃预变性4min，95℃变性30s、57℃退火30s、72℃延伸30s，共进行35个循环，最后延伸7min并在4℃下保存。
[0015]本专利技术的有益效果为：本专利技术通过设计的引物，可实现对古菌Hadesarchaea的定量检测，同时具有灵敏度高、重复性好、准确度高的特点，定量检测线性范围广，可以快速鉴定检测各种环境样品中古菌Hadesarchaea的存在。
附图说明
[0016]图1为本专利技术实施例2标准样品的扩增动力学曲线图。
[0017]图2为本专利技术实施例2溶解曲线图。
[0018]图3为本专利技术实施例2标准样品qPCR的标准曲线图。
[0019]图4为本专利技术实施例2沉积物样品的扩增曲线图。
[0020]图5为本专利技术实施例2标准样品qPCR产物和样品阴性电泳图。
具体实施方式
[0021]为了加深对本专利技术的理解，下面将结合实施例对本专利技术做进一步详述，本实施例仅用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术保护范围的限定。
[0022]实施例1
[0023]本实施例提供了一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对，包括检测引物对，所述检测引物对包含上游引物Hade467F和下游引物Hade865R，所述上游引物Hade467F的序列号如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物Hade865R的序列号如SEQ ID NO：2所示。
[0024]一种用于检测古菌Hadesarchaea的试剂盒，包括如权利要求1所述的检测引物对，还包括SYBR Green Mix荧光试剂和阳性对照，所述阳性对照为一种或多种，所述阳性对照为多种时包括古菌Hadesarchaea在不同浓度梯度下测得的扩增循环数Ct值，进而实现对古菌Hadesarchaea含量的定量检测。
[0025]一种检测古菌Hadesarchaea的方法，提取待测样品的基因组DNA，利用权利要求2
‑
4所述的试剂盒中的检测引物对进行PCR扩增，包括以下步骤，提取待测样品的基因组DNA作为模板，加入检测引物对，进行PCR反应，反应结束后判断待测样品中是否含有古菌Hadesarchaea。
[0026]所述步骤具体包括先提取待测样品的基因组DNA作为模板，再加入检测引物对，与荧光试剂混合成扩增反应体系，进行荧光定量PCR反应，反应结束后当扩增曲线有典型荧光扩增曲线，且Ct值小于33，则待测样品中含有古菌Hadesarchaea，并对古菌Hadesarchaea进行定量；当扩增曲线无典型荧光扩增曲线，则待测样品中不含有古菌Hadesarchaea；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测古菌Hadesarchaea的引物对，其特征在于：包括检测引物对，所述检测引物对包含上游引物Hade467F和下游引物Hade865R，所述上游引物Hade467F的序列号如SEQ ID NO：1所示，所述下游引物Hade865R的序列号如SEQ ID NO：2所示。2.一种用于检测古菌Hadesarchaea的试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1所述的检测引物对。3.根据权利要求2所述的一种用于检测古菌Hadesarchaea的试剂盒，其特征在于：还包括荧光试剂和阳性对照。4.根据权利要求3所述的一种用于检测古菌Hadesarchaea的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照包括古菌Hadesarchaea在不同浓度梯度下测得的扩增循环数Ct值。5.一种检测古菌Hadesarchaea的方法，其特征在于：提取待测样品的基因组DNA，利用权利要求2
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4所述的试剂盒中的检测引物对进行PCR扩增。6.根据权利要求5所述的一种检测古菌Hadesarchaea的方法，其特征在于：包括以下步骤，提取待测样品的基因组DNA作为模板，加入检测引物对，进行PCR反应，反应结束后判断待测样品中是否含有古菌Hadesarcha...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯庆华，魏文政，叶映仪，曹瀚升，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：