使用工程化iNKT细胞对抗COVID-19制造技术

本公开的方面涉及与制备免疫细胞相关的方法和组合物，包括用于COVID

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用工程化iNKT细胞对抗COVID
‑
19
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请根据35U.S.C.第119(e)节要求于2020年9月10日提交的标题为“使用工程化iNKT细胞对抗COVID
‑
19”的共同未决和共同转让的美国临时专利申请序列号63/076,494的权益，该申请通过引用并入本文。


[0003]本公开的实施方案至少涉及免疫学、细胞生物学、分子生物学和医学领域。

技术介绍

[0004]严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
‑
CoV
‑
2)与SARS
‑
CoV密切相关，是具有核衣壳的有包膜的单链阳性RNA病毒，属于冠状病毒科β冠状病毒属。新型SARS
‑
CoV
‑
2是冠状病毒病19(COVID
‑
19)大流行的病因。患有基础疾病的60岁以上患者患重症COVID
‑
19的风险很高，这与75％的机械通气风险和50％的死亡风险相关。
[0005]该病毒主要在密切接触期间在人与人之间传播，(a)最常通过咳嗽、(b)打喷嚏和说话时产生的小飞沫传播。飞沫通常落在地面或表面上，而不是在空气中长距离传播。从暴露到出现症状的时间通常在五天左右，但也可能从两天到十四天的范围内。常见症状包括发烧、咳嗽、疲劳、呼吸急促以及嗅觉和味觉丧失。虽然大多数病例会出现轻微症状，但有些会发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、多器官衰竭、感染性休克和血栓。随着全球新病例的不断增加，人们越来越担心COVID
‑
19可能会在人类社会中长期存在/复发，并且疫苗可能不足以终结COVID
‑
19。
[0006]需要经设计以帮助患有COVID
‑
19感染的个体的治疗剂和相关方法。本公开为COVID
‑
19疗法的迫切需求提供了解决方案。
[0007]专利技术概述
[0008]在没有针对COVID
‑
19的有效治疗方法的情况下，必须通过快速开发创新疗法来应对这种对人类健康的加速威胁。如下文详细讨论，细胞疗法代表了非常有前景的COVID
‑
19疗法。特别是，恒定自然杀伤T(iNKT)细胞是强大的先天免疫细胞，其具有清除病毒感染和减轻有害炎症的潜力。同时，这些细胞在肿瘤学临床中表现出很强的安全性谱，并且不会产生移植物抗宿主(GvHD)现象。
[0009]本文公开的专利技术提供了用于制造和使用造血干细胞(HSC)工程化的免疫细胞和工程化的自然杀伤T(iNKT)细胞的新方法和材料，这些细胞特别是适用于例如治疗患有冠状病毒病19的个体的方法的细胞。本专利技术的HSC工程化的免疫细胞实施方案还包括包含工程化的HSC细胞与严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
‑
CoV
‑
2)(例如位于受感染细胞内的或在抗原呈递细胞上呈递的)组合的物质组合物。
[0010]本专利技术的示例性方法包括将本文公开的工程化的自然杀伤T(iNKT)细胞置于患有冠状病毒疾病19的个体体内，以便iNKT细胞杀伤个体中的感染SARS
‑
CoV
‑
2的宿主细胞。在本专利技术的典型实施方案中，工程化的iNKT细胞包含一种或多种外源核酸，例如编码T细胞受
体α链、T细胞受体β链、自杀基因或类似物的核酸。在某些实施方案中，工程化的iNKT细胞的基因组已被改变以消除至少一种HLA
‑
I和/或HLA
‑
II分子的表面表达。
[0011]本专利技术的示例性实施方案包括制备工程化的自然杀伤T(iNKT)细胞的方法，该方法通常包括选择干细胞或祖细胞；将一种或多种编码核酸，例如编码自杀基因的核酸，或编码至少一种T细胞受体(TCR)α链和/或β链基因的核酸引入干细胞或祖细胞；然后培养细胞以诱导细胞分化为恒定自然杀伤T(iNKT)细胞，从而制备自然杀伤T(iNKT)细胞。通常，在这些方法中，工程化的自然杀伤T(iNKT)细胞包含外源自杀基因；和/或细胞的基因组已被改变以消除至少一种HLA
‑
I或HLA
‑
II分子的表面表达。在本专利技术的某些实施方案中，至少一种TCR从外源核酸和/或从处于重组修饰的启动子区域的转录控制下的内源不变TCR基因表达。
[0012]本专利技术的实施方案还包括包含工程化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞的物质组合物，例如包含以HLA
‑
I阴性；HLA
‑
II阴性；HLA
‑
E阳性；和/或表达自杀基因为特征的基因表达谱的细胞的物质组合物。在本专利技术的某些实施方案中，该组合物还包括严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
‑
CoV
‑
2)，例如位于受感染细胞内的病毒。在本专利技术的典型实施方案中，一种或多种外源核酸被转导到干细胞或祖细胞中以制备工程化的iNKT细胞。在本专利技术的某些实施方案中，工程化的iNKT细胞被置于同种异体体内环境中(例如，在本专利技术的实施方案中，包括通过施用本文公开的工程化的iNKT细胞来治疗感染SARS
‑
CoV
‑
2的个体的方法)。
[0013]在本专利技术的示例性实施方案中，CB CD34+HSC可从商业供应商(例如，HemaCare)或从已建立的CB库获得。细胞可以运送到中央GMP设施进行制备、测试、配制和冷冻保存。一旦通过批释放测试，细胞产品就可以运送到医院进行直接输注。由于HSC
‑
iNKT细胞产品是非定制产品，可用于在不受MHC限制的情况下治疗COVID
‑
19患者，一旦商业化，该细胞产品可以允许这种可能挽救生命的基于干细胞的疗法的广泛应用。
[0014]自体基因修饰的细胞疗法，如新批准的Kymriah和Yescarta(CAR
‑
T疗法)，每位患者每次治疗的市场价格为约30万
‑
50万美元。非定制产品，如本文公开的同种异体HSC
‑
iNKT细胞，可以大大降低成本。制备一批HSC
‑
iNKT细胞的成本可能高于制备CAR
‑
T细胞的成本，但不太可能相差10倍以上。即使假设制备成本高出10倍，所提出的HSC
‑
iNKT细胞疗法仍将每剂(每位患者每次治疗)仅花费约3,000
‑
5,000美元，使得该疗法合理可负担。
[0015]通过以下详细描述，本领域技术人员将清楚本专利技术的其他目的、特征和优点。然而，应当理解，详细描述和具体示例虽然指示了本专利技术的一些实施方案，但是以说明而非限制的方式给出的。在不脱离本专利技术的精神的情况下，可以在本专利技术的范围内进行许多改变和修改，并且本专利技术包括所有此类修改。
附图说明
[0016]图1A<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.抑制严重急性呼吸综合征冠状病毒2的复制的方法，其包括：将多个纯化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞与感染严重急性呼吸综合征冠状病毒2的细胞结合，使得所述恒定自然杀伤T(iNKT)细胞选择性杀伤所述感染严重急性呼吸综合征冠状病毒2的细胞，从而抑制严重急性呼吸综合征冠状病毒2的复制；其中：所述多个纯化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞包含同种异体CD34
+
造血干细胞衍生的工程化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞。2.权利要求1的方法，其中通过将一种或多种外源核酸转导到CD34
+
干细胞或祖细胞中从而制备所述工程化的iNKT细胞来获得所述工程化的iNKT细胞。4.权利要求2的方法，其中：所述转导到所述干细胞或祖细胞中的一种或多种外源核酸包含T细胞受体α链基因和/或T细胞受体α链基因；和所述工程化的iNKT细胞包含含有所述T细胞受体α链基因和/或所述T细胞受体β链基因的细胞克隆群。5.权利要求2的方法，其中所述多个纯化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞包括工程化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞，所述iNKT细胞进一步包含特征如下的基因表达谱：HLA
‑
I
‑
阴性；HLA
‑
II
‑
阴性；HLA
‑
E
‑
阳性；和表达自杀基因。6.权利要求1的方法，其中所述多个纯化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞包含至少1
×
106个恒定自然杀伤T(iNKT)细胞。7.权利要求4的方法，其中所述工程化的iNKT细胞包含编码至少一种功能性T细胞受体(TCR)的一种或多种外源核酸，其中所述TCR识别一种或多种SARS
‑
CoV
‑
2抗原。8.权利要求1的方法，其中所述方法包括使用冷冻保存后解冻的多个纯化的恒定自然杀伤T(iNKT)细胞。9.权利要求1的方法，其中所述感染严重急性呼吸综合征冠状病毒2的细胞为人单核细胞。10.权利要求1的方法，其中所述多个纯化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：