血清miRNA作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了血清miRNA作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用，所述血清miRNA为miR

【技术实现步骤摘要】
血清miRNA作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及血清miRNA作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用。

技术介绍

[0002]据世界卫生组织估计，2019年有2.96亿人感染乙型肝炎，每年新增150万人感染。而我国一直是慢性乙型肝炎的重灾区，且长期的慢性乙型肝炎会导致患者进一步发展为肝硬化、肝纤维化以及肝癌等多种严重疾病。据报道，有80％肝癌患者与慢性乙型肝炎相关。慢性乙型肝炎降低了患者的生命质量，增加了患者家庭和社会的医疗负担。
[0003]目前，核苷类似物(NUCs)和干扰素可用于治疗慢性乙型肝炎。虽然NUCs在降低HBV的DNA方面是有效的，但它们在降低乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的表现仍十分有限。干扰素的主要优点是具有免疫介导的控制HBV感染的作用，从而使患者治疗结束时出现HBeAg血清学转换的机会更高，病毒学应答以及HBsAg清除更持久。理想的HBV治疗终点是HBsAg消失，但是现有的抗病毒药物难以达到这个目标，所以更现实的治疗终点是能够诱导一个持续的病毒学抑制状态。抗病毒应答可以分为生化水平、血清水平、病毒学水平和组织学水平。所有的应答都可以在治疗过程中和治疗后的某些时间点来进行评估。临床研究显示，CHB患者使用干扰素常规治疗6个月的应答率仅为25
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40％。测定CHB患者针对HBV特异性免疫应答能力可能能够预测CHB患者接受治疗的预期疗效。长期以来，由于缺乏意义明确的抗HBV免疫应答指标，CHB患者血清ALT水平被作为衡量宿主抗HBV免疫能力的间接替代指标，但预测结果并不理想。若能在治疗前进行治疗应答预测，对于优化药物选择，提高治疗依从性以及保障疗效具有十分重要的意义。

技术实现思路
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[0004]为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供血清miRNA作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用。
[0005]本专利技术的目的是这样实现的：
[0006]血清miRNA作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用，所述血清miRNA为miR
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5p基因。
[0007]miR
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873
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5p基因在作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用。
[0008]miR
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873是位于染色体9p21.1上的microRNA。miR
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5p是miR
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873系列的主要成员之一。研究表明，miR
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5p的表达水平在14种癌症中下调，在4种癌症中上调，是多种癌症诊断和预后的潜在分子标志物(Zou Y,Zhong C,Hu Z,Duan S.MiR
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5p:A Potential Molecular Marker for Cancer Diagnosis and Prognosis.Front Oncol.2021Oct 5；11:743701.)。也有研究显示，miR
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5p在肝纤维化和肝硬化的早期阶段充当表观遗传调节剂(Fern
á
ndez
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Ramos D,Fern
á
ndez
‑
Tussy P,Lopitz
‑
Otsoa F,Guti
é
rrez
‑
de
‑
Juan V,
Navasa N,Barbier
‑
Torres L,Zubiete
‑
Franco I,Sim
ó
n J,Fern
á
ndez AF,Arbelaiz A,Aransay AM,Lav
í
n JL,Beraza N,Perugorria MJ,Banales JM,Villa E,Fraga MF,Anguita J,Avila MA,Berasain C,Iruzibieta P,Crespo J,Lu SC,Varela
‑
Rey M,Mato JM,Delgado TC,Mart
í
nez
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ChantarML.MiR
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5p acts as an epigenetic regulator in early stages of liver fibrosis and cirrhosis.Cell Death Dis.2018Sep 20；9(10):958.)。本专利技术研究发现，miR
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5p基因可以作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物，通过为miR
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5p基因的表达，能够简单、方便、快速且具有高准确性和特异性地预测CHB患者对干扰素治疗的应答，对于优化药物选择，提高治疗依从性以及保障疗效具有十分重要的意义。
[0009]上述慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物miR
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5p基因的筛选方法，包括如下步骤：
[0010]1)从GEO数据库下载关于CHB患者接受干扰素治疗是否应答的数据集；
[0011]2)比较干扰素应答者与干扰素无应答者的miRNAs表达谱，鉴定在干扰素应答者血清和干扰素无应答者血清中差异表达的miRNAs；
[0012]3)使用R语言的“Boruta”程序包，基于“随机森林”算法对差异表达的miRNAs进行特征筛选，筛选出miRNAs具有更高的潜力来区分CHB患者对干扰素治疗是否发生应答反应；
[0013]4)利用R语言的“KKNN”程序包，基于K最邻近(KNN)分类算法构建以筛选出的miRNAs作为因子的预测模型，检验筛选出的miRNAs作为干扰素治疗应答标志物的性能；
[0014]5)利用人肝癌细胞系HepG2
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NTCP和HuH
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7体外转染HBV质粒48小时模拟慢乙肝患者体内的生理过程，用人干扰素
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α
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2b处理细胞48小时，模拟慢乙肝患者接受干扰素治疗的生物学过程，用实时定量RT
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PCR方法检测miRNAs的表达水平；
[0015]6)构建miRNA的抑制物和模拟物，将miRNA的抑制物或模拟物与HBV质粒共转染进肝癌细胞后，用干扰素处理48小时，利用ELISA检测试剂盒检测细胞上清中HBsAg和HBeAg的水平，以证明miRNA的抑制物和模拟物对干扰素下调HBsAg和HBeAg作用的影响。
[0016]根据上述方案步骤1)中包括：从GEO数据库下载了GSE29911系列矩阵文件，该数据本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.miR
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5p基因在作为慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物中的应用。2.慢乙肝患者接受干扰素治疗应答标志物miR
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5p基因的筛选方法，包括如下步骤：1）从GEO数据库下载关于CHB患者接受干扰素治疗是否应答的数据集；2）比较干扰素应答者与干扰素无应答者的miRNAs表达谱，鉴定在干扰素应答者血清和干扰素无应答者血清中差异表达的miRNAs；3）使用R语言的“Boruta”程序包，基于“随机森林”算法对差异表达的miRNAs进行特征筛选，筛选出miRNAs具有更高的潜力来区分CHB患者对干扰素治疗是否发生应答反应；4）利用R语言的“KKNN”程序包，基于K最邻近（KNN）分类算法构建以筛选出的miRNAs作为因子的预测模型，检验筛选出的miRNAs作为干扰素治疗应答标志物的性能；5）利用人肝癌细胞系HepG2
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NTCP和HuH
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7体外转染HBV质粒48小时模拟慢乙肝患者体内的生理过程，用人干扰素
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α
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2b处理细胞48小时，模拟慢乙肝患者接受干扰素治疗的生物学过程，用实时定量RT
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PCR方法检测miRNAs的表达水平；6）构建miRNA的抑制物和模拟物，将miRNA的抑制物或模拟物与HBV质粒共转染进肝癌细胞后，用干扰素处理48小时，利用ELISA检测试剂盒检测细胞上清中HBsAg和HBeAg的水平，以证明miRNA的抑制物和模拟物对干扰素下调HBsAg和HBeAg作用的影响。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中包括：从GEO数据库下载了GSE29911系列矩阵文件，该数据集包含接受PEG
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IFN或常规IFN治疗的CHB患者的血浆样本；根据CHB患者开始接受PEG
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IFN或IFN治疗12周后病毒载量是否减少2*log10，将CHB患者分为IFN治疗应答组或IFN治疗无应答组。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2）中，经miRNA表达谱差异分析，与IFN治疗无应答组相...

【专利技术属性】
技术研发人员：周莉，刘兴，白修远，张志宇，曾维棋，孙雪怡，张琼方，陈奕，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：